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ミリグラムからキログラムへの単純な複素数計算
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How to store peptides?
凍結乾燥ペプチド
ペプチドの長期保存に, 固体粉末として保管することをお勧めします. 凍結乾燥ペプチドは、分解を最小限に抑えながら-20℃以下で保存できます。. お客様には、カスタマイズされたペプチドを毎回再検査することをお勧めします。 2 品質管理リリース日からの年数.
溶液中のペプチド
溶液中のペプチドは安定性が低く、分解しやすい. ペプチドを溶解するために使用される水溶液は、無菌で純粋である必要があります。.
溶液中, 一定量のペプチドが分解される可能性があります, 配列中に存在するアミノ酸に応じて. いくつかの例を以下に示します:
– メチオニンを含むペプチド, システインまたはトリプトファン残基は酸化のため、溶液中での保存期間が制限されるはずです. これらのペプチドは酸素を含まない溶媒に溶解する必要があります。. –
グルタミンとアスパラギンはグルタミン酸とアスパラギン酸に脱アミド化できます, それぞれ. –
システインは酸化的環化を受けてシステイン-システインジスルフィド結合を形成することができます (ジスルフィド結合内またはジスルフィド結合間に形成される). –
帯電した残留物 (アスパラギン酸, グルタミン酸, リジン, アルギニン, ヒスチジン) 吸湿性がある (空気中の水分を吸収する) 粘性のあるものを形成する傾向があります, クリアオイル. この物理的変化はペプチドの性質に影響を及ぼさない可能性があります. このようなペプチドは凍結乾燥して微量の水を除去することをお勧めします。, 次に窒素で脱気し、バイアル内に水蒸気が存在しないことを確認します。, そしてすぐにキャップを閉めた.
凍結・融解の繰り返しによる破損を防ぐため, 現在の実験に必要な量のペプチドのみを溶解することをお勧めします。. 過剰な溶液は ≥ で保存する必要があります。 -20 必要になるまで℃.
湿気を避ける.
水分はペプチドの長期安定性を著しく低下させるため、, バイアルを開ける前に、デシケーター内でペプチドを室温に平衡化することをお勧めします。. ペプチド分注終了時, チューブ内に残っているペプチドは無水窒素で静かにパージする必要があります。, その後、容器に蓋をする必要があります, 封止フィルムで封止されている, -20℃で保存.
異なるペプチドの溶解度特性は大幅に異なります. アラニンなどの残留物 (アーラ), システイン (シシス), イソロイシン (と), ロイシン (レウ), メチオニン (会った), フェニルアラニン (フェ), そしてバリン (ヴァル) ペプチドの疎水性と水溶液への溶解性を高める, また、ペプチドをカスタマイズする場合は、次のガイドラインに従うことをお勧めします。.
溶解性の特性
ペプチドの溶解度はアミノ酸配列に大きく依存します。. 天然の疎水性ペプチド (あ, F, G, V, L, 私, M, W, 性癖高めのP) 可溶化には有機溶媒が必要です. 酸性ペプチド (Dの傾向が高い, ペプチド配列の E) 可溶化には塩基性水性緩衝液が必要です, 一方、塩基性ペプチドは (Kの傾向が高い, H, とR) 可溶化には酸性水性緩衝液が必要です.
溶媒の選択
アッセイの限界を考慮すると, ペプチドの可溶化に最適な溶媒を決定するには、次のガイドラインを使用することをお勧めします。
疎水性ペプチド
疎水性ペプチドを再可溶化するには, 追加 100 DMSO μL を加え、均一な溶液が形成されるまで超音波処理します。. 次, 選択したバッファを追加して、 1 mg/mL溶液 (ペプチド濃度が高いほど, 必要なDMSOの量が増えるほど).
親水性 (酸性) ペプチド
酸性ペプチドを再可溶化するには, 追加 100 μLの 1% NH 4 ああ、へ 1 mgのペプチドとボルテックス. 溶液が透明になったら, 選択したバッファを追加して、 1 mg/mL溶液.
親水性 (基本) ペプチド
基本的なペプチドを再構成するには, に蒸留水を加えます 1 mgのペプチドとボルテックス.
業界標準では、ペプチドを総重量として凍結乾燥した形で提供します。. 総ペプチド重量 凍結乾燥粉末に含まれるすべての成分の総重量です。. これには目的のペプチドが含まれます, ペプチド不純物, 水, 残留溶媒, と対イオン.
それどころか ネット ペプチド重量, から計算されます 正味ペプチド含有量, の重さです ペプチドのみ 凍結乾燥粉末に含まれる成分. これにより、その後のペプチド溶液のより正確な濃度が得られます。. したがって、, 私たちが推奨する正味ペプチド重量量は、 カスタムペプチド 注文.
正味ペプチド含有量 測定はアミノ酸分析により行われます (AAA; 精度は限られていますが、必要な材料の量は少なくて済みます) または元素分析 (CHN; ミリグラムのペプチドが必要ですが、より正確です). どちらの方法でもパーセンテージ値が得られます (つまり。, 75% 正味ペプチド含有量).
正味ペプチド含有量は、存在する対イオンの量によって異なります*, これはペプチド配列に依存します. 本質的には, ペプチドの電荷が高いほど, ペプチド含有量が低いほど
*注記: 正味ペプチド含有量の計算に使用される要素は、ペプチド対イオンに基づいています。. これは、対イオンがペプチド含有量に寄与しないようにするために行われます。. 例えば, TFA または酢酸塩が対イオンの場合, 窒素はペプチドには存在するが、TFA や酢酸塩には存在しないため、窒素が使用されます。. 同じ理由で、塩素が対イオンである場合、炭素または窒素を使用できます。.
正味ペプチド重量の計算:
正味ペプチド量 (総ペプチド) — 純カスタムペプチド注文に当社が使用する方法.
正味ペプチド含有率を乗算します (小数形式) ペプチド総重量による, 正味ペプチド量を取得するには (総ペプチド).
例えば:
のために 5 総ペプチド mg/バイアル:
ペプチド正味含有量は、 84%.
総ペプチドの正確な量 = 0.84*5 mg=総ペプチド 4.2 mg
対象となるペプチドの正味量 - 最も正確 — お客様はこの方法を自分で使用して目的のペプチドを計算できます.
正味ペプチド含有率とペプチド総重量を掛けます。, およびペプチド純度 (HPLCによる), 目的のペプチドの正確な量を計算するには. 正味ペプチドパーセント (小数形式) ペプチド純度を乗算します (小数形式).
例えば:
のために 5 総ペプチド mg/バイアル:
ペプチド正味含有量は、 84%.
対象となるペプチドの正確な量は = 0.84*0.96*5 mg=4.03mg
MOL Changes は BOC 化学ではなく固相 Fmoc 化学を利用します. Fmoc 化学により、ペプチド伸長中に穏やかな条件を使用して保護基を除去できます。, 一方、BOC 化学では、ペプチド伸長中に保護基を除去するために強酸の使用が必要です。. さらに, Fmoc 化学ではトリフルオロ酢酸を利用 (TFA) 樹脂からペプチドを除去するには, 一方、BOC 化学ではフッ化水素酸が使用されます。 (HF). HFは無色です, 腐食性が高い, そして接触毒.
したがって, MOL Changes は、よりマイルドな Fmoc 化学を採用しています, フレキシブル, BOC 化学に比べて汎用性が高い.
モル濃度は溶液のモル濃度を指します, これは溶解している溶質のモル数です。 1 溶液1リットル, mol/Lで表す, またはM.
モル濃度 [M] = 質量 / (体積×モル質量); モル = 濃度 (グラム/リットル) × ボリューム (L)/MW (グラム/モル)
例:
与えられた: 1MW の乾燥ペプチド粉末の mg: 20KDa (ペプチドのモル質量は 20 グラム/モル)
既知の質量と既知の体積でモル濃度を決定するには
このペプチドの1ml溶液の場合:
モル濃度 = 質量 (0.001g) / (音量 (0.001L) x モル質量 (MW 20,000) = 50μM
特定のモル濃度を達成するための質量を決定するには:
あなたのアッセイの場合, 1mlの水に0.01mMのワーキングペプチド溶液が必要です, 次に、次のように必要な質量を計算します。:
質量 = モル濃度 x 体積 x モル質量
質量 = 0.01mM × (1/1000 L) × 20,000g/モル = 0.0002g
したがって、, 0.01mMの作業溶液を得るには、0.2mg/mlのペプチドが必要になります。.
凍結乾燥または生の粉末およびペプチド溶液として納品します.
ペプチドが可溶性かどうかを確認するにはどうすればよいですか?
特定の溶媒におけるペプチドの溶解度はアミノ酸配列に依存し、多くの場合予測が困難です。. カタログペプチドの場合, 溶解性情報は QC データシートに記載されています. カスタムペプチドの場合, というタイトルのセクションを参照してください “ペプチドをどのように可溶化すればよいですか”.
これらは 2 つの別々の測定であるため、ペプチド含有量はペプチドの純度を示すものではありません。. 純度は分析用 HPLC によって測定され、他のペプチド夾雑物の有無を示します。 (つまり. 切断されたペプチド).
正味のペプチド含有量により、実際のペプチドの量が決まります (対象のペプチドおよびペプチド夾雑物) サンプル中に存在する. 正味のペプチド含有量は伝統的にアミノ酸分析によって測定されます。 (AAA; 精度は限られていますが、必要な材料の量は少量です) または元素分析 (CHN; ミリグラムのペプチドが必要ですが、より正確です).
MOL Changes ペプチドは通常、逆相分取 HPLC によって精製されます。, を使用して 2 を含むバッファ 0.1% トリフルオロ酢酸 (TFA). 最初のバッファ (Buffer A) で構成されています 0.1 % 脱イオン水中の TFA と 2 番目のバッファー (Buffer B) で構成されています 0.1 % アセトニトリル中のTFA (ACN).
一般的に, 粗ペプチドはまず、いずれかのバッファー A の溶液に溶解されます。, ある程度の量のバッファーB, またはDMSOなどの有機極性溶媒. 有機極性溶媒または緩衝液Bを使用した場合, この透明な溶液は、最初に緩衝液 A で希釈されます。. 次, ペプチド溶液は濾過され、分取 HPLC システムにロードされます。. 最適化されたメソッド勾配の利用, 次に、吸光度の測定値に基づいて画分が収集されます。. 次に、各画分を分析 HPLC で分析し、各画分の純度が必要な純度仕様を満たしていることを確認します。.
これらの「純粋な」画分は一緒にプールされ、凍結乾燥されます。. 次に、「純粋な」粉末の純度と同一性の両方がテストされ、正しいペプチドが製造されたことが確認されます。.
ついに, AnaSpec の独立した QC グループがペプチドを再度テストし、すべてのテスト属性が必要な仕様を満たしていることを確認します。.
配列末端に使用される国際命名法は次のとおりです。:
– N末端: Hは遊離アミンを意味します (NH2-), Acはアセチルを意味します [CH3C(○)-NH-], Pyrとはピログルタミン酸という意味です
– C末端: OHは遊離酸を意味します (-COOH), NH2はアミドを意味します [-CONH2]
– アミノ酸の側鎖の修飾は、対応するアミノ酸の後の括弧内に示されています。. 例えば; リン酸化セリン = S(PO3H2) またはε-N-アセチル化リジン = K(Ac)
ペプチド生成中, 合成および精製溶液中のイオンは、ペプチドの荷電アミノ酸側鎖に結合します。, 塩の形成. これらのイオンはペプチド対イオンとして知られており、ペプチドの電荷のバランスをとるのに役立ちます。.
トリフルオロ酢酸 (TFA) ペプチドの合成と精製に一般的に使用されます.
塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸塩を形成します (例えば, リジン, アルギニン, ヒスチジン) および遊離のN末端アミン. したがって, トリフルオロ酢酸は通常、デフォルトの対イオンです.
ペプチドに結合する TFA 分子の最小数は、特定のペプチド配列内の塩基性残基の数に比例します。. したがって, ペプチド内に存在するより塩基性の残基, 凍結乾燥粉末の正味ペプチド含有量が低いほど. サンプル中に存在する TFA または水分含有量を考慮するため, すべてのカスタムペプチドに対してペプチド含有量アッセイを実行することをお勧めします。.
水とトリフルオロ酢酸 (TFA) 精製プロセスの副産物です. しかし, TFA は次のような毒性の懸念を引き起こす可能性があります。 生きている および前臨床研究. したがって, MOL Changesは無毒なアセテートを提供します, 塩化, またはアンモニウム塩交換体.
hy は Cys を含むペプチドです, 会った, または合成が難しいTrp?
Cysを含むペプチド, 会った, またはTrpは、高純度の製品を合成して入手することが困難です. これは主に、これらの官能基が不安定で酸化されやすいためです。. これらのペプチドの使用および保管には、バイアルを繰り返し開けないよう特別な注意が必要です。.
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