O le a le mea e tatau ona fai e se mea e fa'aleagaina ai le su'ega
A'o le'i iloiloina QC, e fesoasoani e tuueseese vasega reagent e aofia ai. Fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'i fa'apoloteomic ma su'esu'ega vaila'au fa'apitoa e fa'ailoa mai ai le au tusitala fa'amalama, su'esu'ega fa'avae, ma reagents fa'atamaoaigaina, ta'itasi fa'aliliuina ubiquitin-proteasome system (UPS) gaioiga i se faitauga fa'atatau i sela, lysates, po'o tali e leai se sela.
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Fa'ailoga felanulanua'i fa'atagaina oe e va'ava'ai pe fa'atusatusa enzymes galue, vaega laiti proteasome, po'o sui fai lipoti e ala ile in-gel fluorescence, microscopy, po'o le au tusitala o tupe maua/to'ilalo.
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Fa'ailoga biotin o meafaigaluega fa'atamaoaigaina, pueina deubiquitinases malosi (DUBs) po'o polotini ua suia e le streptavidin toso i lalo a'o le'i faia le immunoblotting po'o le mass-spectrometry identification.
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Ubiquitin ma NEDD8-mimetic suʻesuʻega ma fluorogenic po'o le FRET substrates e fesiligia enzymes ma ligases e tatau ona iloa ai le ubiquitin mai le ubiquitin-like modifiers - o le kemisi e filifili pe na tupu moni lava se mea faʻaleagaina..
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Mea fa'aleagaina ave se fa'asologa fa'aletonu po'o le fa'a'ese'ese ina ia maua ai se suiga fa'ailo e mafai ona fa'atatauina e se gau fa'atasi po'o le fa'alagolago i le proteasome..
O nei matafaioi taʻitasi e fefaʻatauaʻi i luga o se faʻamatalaga faʻapitoa: o le fea toega ua faailogaina, lea e nofo ai se suiga, pe sa'o se feso'ota'iga isopeptide po'o le oxyester, ma pe o i ai le ulu tau i le itu taumatau. O se reagent o lona "95% mama" e natia ai se isomer e mafai ona suia le fusifusia., mautu, po'o le fua fa'aleaga ua lava e toe fa'avasega ai le fa'auigaina o le lau atoa.
Peptides Fa'aigoaina Manaomia Fa'amauga Fa'apitoa Fa'ailoga
O se fa'ailoga fa'alelei po'o le biotin e le'o se fa'aopoopo fa'aopoopo. O le fa'atasi e suia uma ai le taimi fa'atumauina ma le ionization ile chromatography, ma o lo'o fa'ailoa mai ai se suiga tele - ae se'i vagana ua fa'atupuina le ituaiga o meaola.
Reagent quality o lona uiga o le faʻamaonia o le fa'ailogaina ituaiga, e le na o le peptide matua. E masani ona manaʻomia:
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Fa'asologa o le Peptide mass-spectrometry fa'amaonia o le fa'ailoga fa'aopoopo e ala i le sifi fa'atele;
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LC-MS poʻo le UPLC siaki e faʻamaonia le faʻailoga mole mole elutes ma ionizes e pei ona faʻamatalaina, ituaiga iloga;
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lipoti fa'asinomaga eseese mo le igoa, aua o ana amio ua suia e mafai ona ufiufi fa'atasi mea fa'aluega itu.
Mo le biotin, o le atugaluga o le faatamaoaigaina faamaoni: o se vaega fa'ailoga po'o le mis-biotinylated loto e mafai ona fusifusia ese le streptavidin ma toso i lalo seti sese o polotini.. Mo fluorophores, e ese le faiga fa'aletonu ae e tutusa lava le fa'alavelave - o se mea e le mama e fa'asolo i le umi ole galu fa'ata'ita'i e fa'atusaina le fa'ailoga moni ma fa'atuputeleina ai le tau.. O su'esu'ega su'esu'e ua fa'atuputeleina le fai atu i le au fa'atau e lipoti mai le fa'ailoga sa'o ma se chromatogram o le fa'atasiga mulimuli., e le na o le faasologa mama.
Su'ega Fa'apitoa e tatau ona fa'amaonia, Le Fa'apea
O mea fa'aleagaina e masani ona le o ni peptide manino. Latou te tauaveina ubiquitin-mimetic poʻo NEDD8-mimetic elemene, u'amea eletise, au fa'atasi, feso'ota'iga, ma le FRET po'o le fluorogenic paipa. O le avega faʻamaonia o le faʻamaonia o le faamoemoe fausaga e pule i le fanua ma e leai se isomer e le'i fuafuaina, tipi, po'o oloa i le itu ua fa'aputu i se tulaga e fa'alavelave ai le su'ega.
Mo le itu mole mole laiti o degraders, fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga ua mae'a ona manino: o se pusa malosi e faʻaaogaina le LC-MS poʻo le HPLC mo le mama mama, NMR po'o le qNMR mo le fausaga ma le paleni mamafa, ma e masani ona su'esu'eina chiral po'o u'amea e pu'e ai le epimerization o le stereocenter ma su'esu'ega u'amea leaga e mafai ona tineia le fa'amaopoopoina o le zinc.. O le peptide ma le protein reagents o loʻo fafaga i lau tutusa e tatau ona tutusa le amio pulea - faʻamaoniga o le nofoaga o suiga., faʻamaoniga o le soʻotaga ma faʻauʻuga, ma le manino pe mafai ona fa'alavelaveina le faitaulia o mea ola.
Fa'asologa Fa'amaoni e le mafai ona fa'atalanoaina
O faletusi su'esu'e ma seti su'esu'e e masani lava ona fa'atonuina e fa'asaga i se fausaga fa'amamafa e fa'apipi'i se degron, se fa'ailoga fa'ailoa, se nofoaga tipi enzyme, poʻo se faʻailoga faʻalagolago i le phosphorylation. Fa'asologa o le fa'amaoni o lona uiga o le fausaga o le mea moni na lafo - e aunoa ma le tapeina, leai se suitulaga, leai se fa'atasi, ma faasaʻo N- ma C-termini.
O le fa'amaoni o le mea lea e masani ona aliali mai ai ala 'upu o su'esu'ega. O se tagata fa'atau e fa'amaonia na'o le tele o mea e mafai ona misia se isomer tape fa'atasi ai ma le mamafa tutusa, po'o se phospho-site fa'apipi'i i luga ole toega sese. Fa'atonuga fa'asologa e mana'omia le fa'afanua peptide po'o le vaevaega MS/MS, su'esu'ega amino-acid mo le tuufaatasiga, ma - mo faufale ua matua'i suia - fa'amaoniga o lo'o nonofo uma vaega fa'apipi'i i le nofoaga fa'atatau. Pe a fa'aletonu le mata o le fa'aleagaina po'o se fa'ai'uga fa'alavelave DUB e toe fo'i i tua i "le fa'asologa o mea'ai na sese i le tasi o totoe.,"O le tau o vaiaso o faʻamaumauga e le mafai ona faʻaaogaina e leai se polokalama faʻapipiʻi e mafai ona faʻaleleia.
Orthogonal Analytical Confirmation Siitia le Talitonuga
E seasea ona fa'amautu le fa'asinomaga e tasi se fa'ailoga au'ili'ili. European Medicines Agency ta'iala ile atinae Peptides fa'aola ma le gaosiga o peptides fa'asusui e fautuaina ia le itiiti ifo ma le lua ni auala fa'amama mo le iloagofie, ma le tele fa'a-, molia-, ma auala e fa'atatau i le hydrophobicity mo uiga mama.
Ole faʻamaoniga ole Orthogonal e sili atu ona taua mo faʻailoga ma faʻaleleia reagents nai lo peptides laina tuusao., aua e leai se tasi auala chromatographic e foia uma aiga le mama. Ole su'esu'eina ole su'esu'eina ole su'esu'ega lavelave ole a fa'afeso'ota'i le HPLC ole vaega fa'aliliu ma le kemisi lona lua., tu'ufa'atasia fa'amaufa'ailoga tele ma MS/MS po'o fa'afanua peptide, ma fa'aopoopo metotia fa'atatau e pei o le vavae'esega mo le fa'amaoni fa'ata'ita'i po'o le lapopo'a-tu'ese'ese fa'atasi ai ma le fa'asalalauina o moli e tele mo le tu'ufa'atasiga.. Pe a fafaga e le reagent se faitau aofaʻi, o lenei fa'amaoniga fa'apapa o le mea lea e mafai ai ona e fa'atuatuaina o fa'asinomaga ma fa'amatalaga mama e moni ma toe fa'afo'iina - e le'o se pasene se tasi o vaega pito i luga..
Su'esu'e Faletusi Ola pe Maliu ile Tulaga Fa'atasi
O faletusi su'esu'e e fausia mai le tele o vaieli, tele fagu, ma - se'i vagana ua e fuafua mamao - tele le tele o gaosiga. Fa'ato'a-fa'a'a'au fela'ua'i o le fa'amamafa filemu o lau fa'aumiumi, ona o le tafetafea i se tulaga le mama po o se si'i chromatographic tamatamailima e suia ai amioga su'esu'e e tusa lava pe pasi uma vaega taitasi lona tulaga mama..
O le amio pulea e tolu vaega:
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Lot su'esu'e - o fagu ta'itasi po'o ipu faletusi o lo'o feso'ota'i i se fa'ailoga sa'o ma se tusi fa'amaonia fa'apitoa o su'esu'ega., so'o se taunuuga e mafai ona su'esu'e i mea na gaosia ai.
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Fa'atusatusaga tamatamailima - fa'atusatusa lotoa fou i vili muamua ma tulaga fa'atatau ile taimi fa'atumauina, misa, ma talaaga le mama, e le na'o se numera pasi / toilalo mama.
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Fa'amaumauga mata'utia - fa'amaoniga fa'apitoa (chromatograms, ala tetele) o lo'o tu'uina atu i vaega ta'itasi nai lo le fa'apotopotoga pasene, o lea e mafai ai e fale su'esu'e su'esu'e ona fa'amasino le tutusa mo i latou lava. Gaosiga Peptide
O le tulafono fa'atino mo se faletusi tele fa'aleaga po'o se faletusi su'esu'e e maua mai i se pa'aga na te fa'aogaina le siiina o tamatamai lima e pei o se masani ma e mafai ona fa'aalia pe fa'afefea ona fa'atusatusaina se fasi fanua i le tasi na fa'amaonia au togi muamua..
Polotini-Fa'aleagaina Vasega Su'ega: O le a le "Lava Lelei" Faʻatusa pe a e faʻatupuina
E mafai ona e fa'aliliuina uma nei mea i se seti pu'upu'u o fa'amoemoega pe a e va'ai se reagent pe iloilo se fa'atau. I le faatinoga, fale su'esu'e o lo'o fa'agasolo galuega fa'aleagaina e su'e ni pa'aga o le a talanoaina le QC i tua o se tu'uina atu fa'asologa o le peptide masani fa'atonu nai lo le tu'uina atu o se ata mama e tasi.
O mea taua e: fa'asinomaga fa'amaonia e le sili atu nai lo le tino; fa'amaonia le fa'ailoga ma suiga ta'itasi i le fa'atasiga mulimuli; fa'asologa fa'amaoni fa'amaumauina ile amino-acid po'o fa'afanua-tulaga su'esu'ega pe a mana'omia; auala au'ili'ili fa'apitoa i tua atu o le mama ma le fa'ailoga; a su'ega peptide fa'amaumauga o lo'o aofia ai chromatograms mata'utia ma le tele o alaleo ile lotoa; ma fa'atumauina le fa'atumauina o fa'atama'i lima i totonu o le faletusi.
O se tulaga fa'akomepiuta ta'uta'ua o le a aumaia le va'aiga fa'apipi'i fa'apipi'i, MS/MS-tulaga fa'amaoniga, endotoxin ma bioburden tapula'a, ma faʻamaumauga faʻamaufaʻailoga i luga o le laulau - aua o le eseesega lena i le va o se reagent e maua ai se mata mama ma se tasi e gaosia filemu mea sese i luga o le selau vaieli..
Key Takeaway: I le suʻesuʻeina o le palatini-faʻaleagaina, le lelei o le reagent o le fa'amaonia le aoga. Fa'amaonia ituaiga fa'ailoga i luga ole fa'asologa o matua, fa'amaonia nofoaga ta'itasi suiga, fa'aaoga metotia su'esu'e fa'apitoa, ma fa'amalosia le fa'atasi o fa'amaufa'ailoga tamatamai lima - aua o le faitauga o le a atagia le leoa po'o fea o nei mea na misi..
Laasaga Sosoo
Amata i le tusi i lalo vasega o le reagent e fa'alagolago i ai lau lau - tusitala, su'esu'e, po'o le mea'ai - ma fa'amaumauga au'ili'ili e mana'omia e ta'itasi. Fa'aaoga lena mea e fai ma laina fa'avae pe a e maua mai, ma fai atu i le au fa'atau oloa e fa'aa'oa'o oe ile auala fa'asolosolo ma fa'amaoniga fa'ailoga tamatamai lima i tua atu o mea o le a e fa'aogaina.. O ni nai minute e fa'aalu e toe iloilo ai le QC i luma e mafai ona lavea'iina oe mai se fa'ai'uga su'esu'e e le mafai ona toe fa'aaogaina e alu ai vaiaso e malolo ai..
