කඩදාසි වෙළෙන්දා දෛශික උපුටා දක්වන විට: ප්රතික්රියාකාරක උපුටා දැක්වීම් කියවන්නේ කෙසේද? (සිද්ධි අධ්‍යයනය: MDM2 පර්යේෂණයේ GenScript pcDNA3)
ප්රධාන විමර්ශකයින් සහ ජ්‍යෙෂ්ඨ පර්යේෂණ විද්‍යාඥයින් ඔන්කොලොජි හෝ සෛල ජීව විද්යාව පිළිබඳ අලුතින් ප්‍රකාශිත සාහිත්ය පිරික්සීමේදී, වෙළෙන්දාගේ උපුටා දැක්වීම් බොහෝ විට ව්‍යංග අනුමැතියේ මුද්දරයක් ලෙස සලකනු ලැබේ. සම-සමාලෝචනය කරන ලද පත්‍රිකා විස්සක් හරහා උපුටා දක්වා ඇති වාණිජ ක්ෂීරපායී ප්රකාශන දෛශිකයක් හෝ අභිරුචි පෙප්ටයිඩයක් දැකීම විශ්වසනීයත්වය පිළිබඳ උපකල්පනයක් ඇති කරයි.. MDM2-p53 සංඥා අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා බහු ස්වාධීන රසායනාගාර සාමාන්‍යයෙන් නිශ්චිත GenScript pcDNA3 දෛශික ඉදිකිරීමක් හෝ වාණිජ කෘතිම පෙප්ටයිඩයක් ලබා ගන්නේ නම්, හරියටම එකම නාමාවලි අංකය ඇණවුම් කර බංකු ක්‍රියාත්මක කිරීම සඳහා කෙලින්ම ඉදිරියට යාම සාධාරණ බව පෙනේ.
කෙසේ වෙතත්, වෙළෙන්දාගේ උපුටා දැක්වීම් අනුභූතික කාණ්ඩයේ ගුණාත්මක භාවය සඳහා ප්‍රොක්සියක් ලෙස සැලකීම අනුවර්තනය කළ නොහැකි රසායනාගාර දත්ත සඳහා වඩාත් පොදු හේතුවකි. සම-සමාලෝචනය කරන ලද සඟරා වල උපුටා දැක්වීම් ඓතිහාසික භාවිතය ලේඛනගත කරයි, බොහෝ විශේෂිත භෞතික නොවේ, රසායනික, හෝ ක්රියාකාරී සත්යාපනය. වාණිජ ප්ලාස්මිඩ් කොඳු නාරටිය විකුණුම් අනුක්‍රමික සංශෝධනවලට භාජනය වේ, ධාරක වික්‍රියා හරහා ගමන් කිරීම සුළු ප්‍රභේද උප ජනගහනයක් හඳුන්වා දෙයි, සහ වෛරස් ප්‍රවර්ධකයින් විසින් මෙහෙයවනු ලබන ප්රකාශන දෛශික සෛලීය ජානමය පසුබිම මත අනපේක්ෂිත ලෙස හැසිරිය හැක..
පර්යේෂණාත්මක ප්රතිනිෂ්පාදනය ආරක්ෂා කිරීම සඳහා සාහිත්ය උපුටා දැක්වීම් විවේචනාත්මකව කියවන ආකාරය ඉගෙන ගැනීම සහ ස්වාධීනව ක්‍රියාත්මක කිරීම අවශ්‍ය වේ., විකලාංග තත්ත්ව පාලනය (QC) ඕනෑම සාහිත්ය භාවිතා කරන ප්‍රතික්‍රියාකාරකයක් භාවිතා කිරීමට පෙර ප්‍රොටෝකෝලය.
වාණිජ විකුණුම්කරු උපුටා දැක්වීම් එදිරිව. සිදුවීම් අනුග්රහය: වක්‍ර විශ්වාසනීය සංඥා විසංයෝජනය කිරීම
සාහිත්ය මූලාශ්ර ද්රව්ය ඵලදායී ලෙස ඇගයීමට, රසායනාගාර විවිධ වාණිජ සංඥා අතර වෙනස හඳුනාගත යුතුය. විද්යාත්මක ප්‍රකාශනයේ, වෙළෙන්දා සඳහන් කරයි, දත්ත සමුදා උපුටා දැක්වීම්, සහ සිද්ධි අනුග්‍රාහකත්වයන් වෙනස් පරිපාලන සහ ප්‍රවර්ධන කාර්යයන් ඉටු කරයි, නමුත් ඒවායින් කිසිවක් වාණිජ සැපයුම්කරුවෙකුගෙන් නැවුම් කොටසක් ඔබේ තක්සේරුවේදී සමාන ලෙස ක්‍රියා කරන බවට සහතික නොවේ.
සාහිත්ය සඳහන / RRID → ඓතිහාසික භාවිත වාර්තාව (එය ලබා ගත් තැන)
විකුණුම්කරු අනුග්රහය → වාණිජ අලෙවි සංඥා (වෙළඳ නාම දෘශ්‍යතාව)
විකලාංග QC & CoA → ආනුභවික සත්යාපනය (බොහෝ විශේෂිත අනන්‍යතාවය & පිරිසිදුකම)
සාහිත්ය උපුටා දැක්වීම් සහ පර්යේෂණ සම්පත් හඳුනාගැනීම් (RRIDs)
පත්‍රිකාවක් නාමාවලි අංකයක් හෝ පර්යේෂණ සම්පත් හඳුනාගැනීමක් ලැයිස්තුගත කරන විට (මට අවශ්යය), එය ප්‍රකාශිත දත්ත සඳහා සොයා ගැනීමේ හැකියාව තහවුරු කරයි. ප්‍රමිතිගත උපුටා දැක්වීම් පරිචයන් මගින් සත්යාපනය සහ ආනුභවික ප්රතිනිෂ්පාදනය පෝෂණය කිරීම මගින් අධ්‍යයන හරහා සම්පත් ප්‍රභවයන් නිරීක්ෂණය කිරීමට පාඨකයන්ට ඉඩ සලසයි., දී උද්දීපනය කර ඇති පරිදි සත්යාපනය සහ දත්ත උපුටා දැක්වීම් පිළිබඳ NIH ප්රකාශන මාර්ගෝපදේශය.
CiteAb වැනි පෙළ පතල් කැණීම් වේදිකා මෙම උපුටා දැක්වීම් වෙළඳපල සම්මත කිරීම සහ භාවිතයේ ප්රවණතා මැනීම සඳහා එකතු කරයි., වෙළෙන්දා පැමිණීම පිළිබඳ වටිනා අවබෝධයක් ලබා දීම, දක්වා ඇති පරිදි CiteAb හි ජීවිත විද්‍යා නිෂ්පාදන උපුටා දැක්වීම් විශ්ලේෂණය. නිශ්චිත නිෂ්පාදන නාමාවලි අංක උපුටා දක්වමින්, ගොඩක් අංක, සහ RRIDs මගින් විද්යාත්මක මිතුරන්ට යටින් පවතින ද්රව්ය හඳුනාගත හැකි බව සහතික කරයි, විස්තර කර ඇති පරිදි RRID නිෂ්පාදන උපුටා දැක්වීම් පිළිබඳ StressMarq හි මාර්ගෝපදේශය.
කෙසේ වෙතත්, සාහිත්ය උපුටා දැක්වීමක් කලින් පර්යේෂන කණ්ඩායමක් මිලදී ගත් දේ වාර්තා කරයි - එය ඔවුන්ගේ අත්හදා බැලීම් ප්‍රකාශයට පත් කිරීමට පෙර ප්‍රතික්‍රියාකාරකය ස්වාධීනව වලංගු කර ඇති බව තහවුරු නොවේ.
ප්රධාන රැගෙන යාම: ප්‍රකාශිත අධ්‍යයනයක දී නිශ්චිත විකුණුම් සම්පතක් භාවිතා කර ඇති බව සම-සමාලෝචනය කරන ලද උපුටා දැක්වීමක් සනාථ කරයි, නමුත් එය බොහෝ විශේෂිත භෞතික ආදේශ නොකරයි, අනුපිළිවෙල, හෝ ඔබේම රසායනාගාරයේ ක්රියාකාරී සත්යාපනය.
වාණිජ සිදුවීම් අනුග්රහය සහ සන්නාම දෘශ්‍යතාව
සිදුවීම් අනුග්රහය-ප්රධාන සම්මන්ත්‍රණවල විකුණුම් කුටි වැනි, අනුග්රහය දක්වන තාක්ෂණික වැඩමුළු, හෝ විද්යාත්මක සංචාරක ප්‍රදානයන් - සම්පූර්ණයෙන්ම වාණිජ දෘශ්‍යතා සංඥා ලෙස ක්‍රියා කරයි. අනුග්‍රාහකත්වය විකුණුම්කරුවෙකුගේ අලෙවිකරණ හැකියාව පිළිබිඹු කරයි, ඒවායේ ජීව විද්යාත්මක ප්රතික්රියාකාරකවල විශ්ලේෂණාත්මක සංශුද්ධතාවය හෝ ක්රියාකාරී විශ්වාසවන්තභාවය නොවේ.
අභ්යන්තර තත්ත්ව පාලනය සඳහා ආදේශකයක් ලෙස වෙළෙන්දාගේ සන්නාම ප්‍රමුඛතාවය හෝ නිතර සාහිත්ය උපුටා දැක්වීම් මත යැපීම සැලකිය යුතු ජීව විද්යාත්මක අවදානමක් ඇති කරයි., විශේෂයෙන්ම MDM2/p53 සංඥා වැනි සංවේදී නියාමන මාර්ගවල.
සිද්ධි අධ්‍යයනය: GenScript pcDNA3 ප්රකාශනය MDM2/p53 සංඥා පර්යේෂණ තුළ ගොඩනැගේ
සාහිත්‍යය උපුටා දක්වන වාහකයන්ට පර්යේෂණාත්මක විචල්‍යතාවයක් හඳුන්වා දිය හැකි ආකාරය තේරුම් ගැනීමට, MDM2 පර්යේෂණයේදී GenScript pcDNA3 ප්රකාශන ඉදිකිරීම් භාවිතය සලකා බලන්න.
මූසිකය ද්විත්ව මිනිත්තු 2 (MDM2) p53 පිළිකා මර්දන ප්‍රෝටීනයේ ප්‍රාථමික සෘණ නියාමකය ලෙස ක්‍රියා කරන E3 ubiquitin ligase වේ. වල් ආකාරයේ p53 පද්ධති තුළ, MDM2 p53 හි N-පර්යන්ත පරිවර්තන වසම බැඳ තබයි, දැඩි සෘණ-ප්‍රතිපෝෂණ පුඩුවක් තුළ ප්‍රෝටිසෝම පරිහානිය සඳහා එය ඉලක්ක කරයි, විස්තර කර ඇති පරිදි වත්මන් ඖෂධ සැලසුම් පිළිබඳ පුළුල් සමාලෝචනයක්. MDM2 අධි ප්‍රකාශනයට සෘජු ජාන විකෘතියකින් තොරව p53 ක්රියාකාරකම් යටපත් කළ හැකි බැවිනි, පර්යේෂකයන් සෛල චක්‍ර අත් අඩංගුවට ගැනීම තක්සේරු කිරීම සඳහා ප්‍රතිසංයෝජක MDM2 ප්ලාස්මිඩ නිතර මාරු කරයි, ඇපොප්ටෝසිස්, හෝ කුඩා අණු MDM2-p53 inhibitors.
pcDNA3 ප්රකාශන දෛශික බැක්බෝන් CMV ප්‍රවර්ධකය → එපිටොප් ටැගය → MDM2 ඇතුළු කිරීම → BGH PolyA (p53 මගින් මර්දනය කරන ලදී) (E3 වෙනස් කළ හැක) (RING වසම) (පිටපත් ස්ථායිතාව)
pcDNA3 MDM2 WT වැනි ප්ලාස්මිඩ ශාස්ත්‍රීය ගබඩාවල බහුලව ලැයිස්තුගත කර ඇත., ඇතුළුව Addgene pcDNA3 MDM2 WT ගබඩා දත්ත ගබඩාව, සහ GenScript වැනි වාණිජ වෙළෙන්දන් විසින් නැවත සංස්ලේෂණය කර හෝ වෙනස් කර ඇත. pcDNA3 දෛශික කොඳු නාරටිය (5.4 kb) මානව සයිටෝමෙගෙලෝ වයිරසය භාවිතා කරයි (CMV) ඉහළ මට්ටමේ ක්ෂීරපායී ප්රකාශනය සඳහා ක්ෂණික-මුල් ප්‍රවර්ධකයා, SV40 විශාල T-ප්‍රතිදේහජනක ප්රකාශන ධාරක සෛලවල එපිසෝමල් ප්‍රතිනිර්මාණය සඳහා SV40 සම්භවයක් (HEK293T වැනි), සහ neomycin/G418 තේරීම් සලකුණක්.
පර්යේෂණාත්මක කෞතුක වස්තුව 1: වල්-වර්ගය p53 මගින් CMV ප්‍රවර්ධක මර්දනය
MDM2 ප්රකාශන අධ්‍යයනයන්හි ප්රධාන අන්තරායක් ප්‍රවර්ධක නියාමනය ඇතුළත් වේ. pcDNA3 හි CMV ප්‍රවර්ධකයා ප්‍රබල ව්‍යුහාත්මක ප්‍රවර්ධකයෙකු ලෙස සලකන අතර, ආනුභවික අධ්‍යයනයන් පෙන්නුම් කරන්නේ CMV ප්‍රවර්ධක ක්රියාකාරකම් ඉහළ වල්-වර්ග p53 මට්ටම් මගින් සක්‍රීයව මර්දනය කරන බවයි., තුළ පෙන්නුම් කර ඇති පරිදි ජීව විද්යාත්මක රසායන විද්යාව පිළිබඳ ජර්නලයේ ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද අධ්‍යයනයක්. රස පර්යේෂණ පෙප්ටයිඩ සැපයුම්කරු
පර්යේෂකයන් pcDNA3-MDM2 නොවෙනස්ව p53 සංඥා සහිත සෛල වෙත මාරු කරන විට, p53 මට්ටම් ඉහල යාම CMV ප්‍රවර්ධකය යටපත් කරයි, රේඛීය නොවන ප්රතිඵලය, ස්වයං-සීමිත MDM2 ප්රකාශනය. පර්යේෂණ කණ්ඩායමක් සාහිත්ය උපුටා දැක්වීම් මත පමණක් පදනම්ව නිරන්තර ප්‍රවර්ධක ක්රියාකාරකම් උපකල්පනය කරන්නේ නම්, MDM2 ප්‍රෝටීන බහුලතාවයේ වෙනස්වීම් ප්‍රවර්ධක මර්දනයට වඩා පරීක්ෂණ සංයෝග කාර්යක්ෂමතාව හෝ පශ්චාත් පරිවර්තන පරිහානියට වැරදි ලෙස ආරෝපණය කළ හැක..
විනිසුරු මඩුල්ල නඩු සටහන (MOL තත්ත්ව පාලන රසායනාගාරය වෙනස් කරයි): සාහිත්ය-මූලාශ්ර pcDNA3 ප්ලාස්මිඩ් නිර්මිතවල සාමාන්‍ය විකලාංග හරස් වලංගුකරණයේදී, ප්‍රවර්ධක ඇතුළු කරන හන්දි හරහා ද්විපාර්ශ්වික සැන්ගර් අනුක්‍රමණය සිතියම්ගත නොකළ තනි-නියුක්ලියෝටයිඩ ප්‍රභේද හඳුනාගෙන ඇත (SNVs) CMV ක්ෂණික-මුල් ප්‍රවර්ධක කලාපය තුළ. මෙම සුළු අනුක්‍රමික ප්ලාවිතයන් කැනොනිකල් NCBI විමර්ශන සිතියම් හා සසඳන විට වල්-වර්ගයේ සෛල ආකෘතිවල මූලික ප්‍රවර්ධක ක්රියාකාරකම් ~35% කින් අඩු කිරීමට හේතු විය-පහළ සෙලියුලර් විශ්ලේෂණයන් ක්‍රියාත්මක කිරීමට පෙර ජාන අනුක්‍රමික සත්යාපනය අනිවාර්ය වන්නේ මන්දැයි පෙන්නුම් කරයි..
පර්යේෂණාත්මක කෞතුක වස්තුව 2: Epitope Tagging සහ RING-Finger Domain Alterations
ප්‍රතිසංයෝජක MDM2 නිරීක්ෂණය කිරීමට, වාණිජ දෛශික බොහෝ විට N-පර්යන්ත හෝ C-පර්යන්ත එපිටොප් ටැග් එකතු කරයි (Myc වැනි, කොඩිය, හෝ GFP). MDM2 E3 ubiquitin ligase ක්රියාකාරකම් සහ homodimerization සඳහා එහි C-terminal RING-finger domain මත රඳා පවතී.. ස්ටේප්ල්ඩ් පෙප්ටයිඩ
වාණිජ වෙළෙන්දෙක් ක්ලෝන හන්දිය වෙනස් කරන්නේ නම් හෝ දැඩි ව්‍යුහාත්මක වලංගුකරණයකින් තොරව RING-ඇඟිලි වසම අසල ටැගයක් ඇතුළු කරන්නේ නම්, ප්‍රකාශිත විලයන ප්‍රෝටීනය අඩු වූ E3 ligase ක්රියාකාරකම් හෝ වෙනස් කරන ලද උපස්ථර විශේෂත්වය පෙන්විය හැක. ටැගය ක්රියාකාරී වසම් නැමීමට බාධා කර නොමැති බව තහවුරු කිරීමට ඇතුළත් කිරීමේ සන්ධිවල සැන්ගර් අනුක්‍රමණය සහ විකලාංග ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය අවශ්‍ය වේ..
සාහිත්ය-භාවිත ප්රතික්රියාකාරකවල සැඟවුණු අවදානම්: අනුපිළිවෙල ප්ලාවිතය, ටැග් මැදිහත්වීම, සහ කණ්ඩායම් වෙනස්කම්
සත්‍යාපනයකින් තොරව සාහිත්ය උපුටා දක්වන ප්රතික්රියාකාරක භාවිතා කිරීම ප්රධාන තාක්ෂණික අසාර්ථක ක්‍රම තුනක් හඳුන්වා දෙයි:
- සිතියම්ගත නොකළ විකෘති සහ අනුක්‍රමික ප්ලාවිතය: ධාරක බැක්ටීරියා වික්‍රියා හරහා ප්‍රචාරණය කරන ලද ප්ලාස්මිඩ ලක්ෂ්ය විකෘති සමුච්චය කළ හැක, ඇතුල් කිරීම්, හෝ transposon මූලද්රව්ය. ඇතුළත් කිරීමේ සීමාවන් අනුක්‍රමණය නොකර ප්ලාස්මිඩ් ප්‍රෙප්ස් ගමන් කිරීමෙන් ප්‍රවර්ධක ශක්තිය වෙනස් කිරීමට හෝ කේතීකරණ රාමුව තුළ නිහඬ/මිස්සෙන්ස් විකෘති හඳුන්වා දීමට හැකිය..
- පෙප්ටයිඩ සහ ප්රතික්රියාකාරක අපද්රව්ය: පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණයේදී (MDM2-බන්ධන හෙලික්සීය පෙප්ටයිඩ හෝ p53-ව්‍යුත්පන්න ට්‍රේසර් පෙප්ටයිඩ වැනි), වාණිජ සැපයුම්කරුවන් විසින් කප්පාදු කරන ලද මකාදැමීමේ අනුපිළිවෙල අඩංගු ද්රව්ය ලබා දිය හැක ((n-1) හෝ (n-2) සමාවයවික) පිරිසිදු කිරීම ප්රමාණවත් නොවේ නම්. පිරිසිදු නොකළ කෘතිම පෙප්ටයිඩ මතුපිට ප්ලාස්මෝන අනුනාදයේ ව්‍යාජ-ධනාත්මක බන්ධන චාලක ඇති කළ හැක. (SPR) හෝ ප්රතිදීප්ත ධ්රැවීකරණය (එෆ්පී) තක්සේරු කරයි.
- CoA විෂමතා සහ කොටස් අස්ථාවරත්වය: විශ්ලේෂණ සහතික (CoAs) සැපයුම්කරුවන් විසින් සපයනු ලබන ඔබේ රසායනාගාරයට ලබා දෙන විශේෂිත කුප්පියට වඩා ඓතිහාසික කණ්ඩායම් පරීක්ෂාව නියෝජනය කළ හැකිය. ගොඩක් සොයාගැනීමේ හැකියාව සහ ගබඩා ස්ථායිතාව පරීක්ෂා කිරීමකින් තොරව, විශාල වශයෙන් සංශුද්ධතාවයේ වෙනස්කම් ප්‍රමාණාත්මක ප්‍රතිනිෂ්පාදනයට බාධා කළ හැකිය.
ඉඟිය සඳහා: වාණිජ විශ්ලේෂණ සහතිකයක් සංක්‍රමණයෙන් පසු ප්‍රතික්‍රියාකාරකයක වත්මන් භෞතික තත්ත්වය පිළිබිඹු කරයි යැයි කිසිවිටක නොසිතන්න. ලැබීමෙන් පසු සෑම විටම අභ්යන්තර අනන්‍යතාවය සහ සංශුද්ධතාවය පරීක්ෂා කරන්න.
සාහිත්ය මූලාශ්ර ප්රතික්රියාකාරක සඳහා 3-අදියර ස්වාධීන වලංගු කිරීමේ ප්‍රොටෝකෝලය
තහවුරු නොකළ ප්රතික්රියාකාරක කෞතුක වස්තු වලින් පර්යේෂණ ව්‍යාපෘති ආරක්ෂා කිරීම, රසායනාගාර ප්‍රමිතිගත කළ යුතුයි, තුන්-අදියර විකලාංග වලංගුකරණ කාර්ය ප්‍රවාහය.
වේදිකාව 1: පෙළපත් විගණනය → අදියර 2: අනුපිළිවෙල & භෞතික QC → අදියර 3: ක්රියාකාරී පාලන
(CoA & මට චෙක් කරන්න ඕන) (ගායකයා/එන්ජීඑස් & RP-HPLC/MS) (p53-null & ප්‍රෝටිසෝම විශ්ලේෂණය)
වේදිකාව 1: පෙළපත් විගණනය සහ කැබලි අක්ෂර සොයාගැනීමේ හැකියාව
නව දෛශික ඉදිකිරීමක් හෝ කෘතිම පෙප්ටයිඩයක් කැටි කිරීමට හෝ මාරු කිරීමට පෙර, එහි සම්පූර්ණ ලියකියවිලි තහවුරු කරන්න:
- ද්රව්ය පාරදත්ත වාර්තා කරන්න: විකුණුම්කරුගේ නම ලේඛනගත කරන්න, නිශ්චිත නාමාවලි අංකය, ක්ලෝන හැඳුනුම්පත, කණ්ඩායම/කොටස් අංකය, සහ RRID.
- විකුණුම්කරු සිතියම සහ CoA විගණනය කරන්න: වෙළෙන්දා විසින් සපයන ලද ප්ලාස්මිඩ් සිතියම හෝ සසඳන්න
පෙප්ටයිඩ වලින් අධිශීතකරණ පෙළපත ස්ථාපිත කරන්න: ප්ලාස්මිඩ් සඳහා, ධාරක බැක්ටීරියා වික්‍රියාව නිරීක්ෂණය කරන්න, ප්රතිජීවක තෝරාගැනීමේ සාන්ද්රණය, සහ ප්‍රාථමික පරිවර්තනයෙන් ගමන් අංකය.
ප්රතිජීවක තෝරාගැනීමේ සාන්ද්රණය, සහ ප්‍රාථමික පරිවර්තනයෙන් ගමන් අංකය.
වේදිකාව 2: විකලාංග අනුපිළිවෙල සහ භෞතික ලක්ෂණ
ජීව විද්යාත්මක පරීක්ෂණ ක්‍රියාත්මක කිරීමට පෙර භෞතික හා ජානමය වලංගුකරණය සිදු කළ යුතුය:
- සැන්ගර් අනුක්‍රමණය: සියලුම ප්‍රවර්ධක ඇතුළු කරන හන්දි හරහා ද්විපාර්ශ්වික සැන්ගර් අනුක්‍රමණය සිදු කරන්න, epitope ටැග්, සහ ඉංජිනේරුමය විකෘති අඩවි.
- ඊළඟ පරම්පරාවේ අනුපිළිවෙල (එන්ජීඑස්): සංකීර්ණ සඳහා, දිගු, හෝ බහු-සිස්ට්රොනික් දෛශික, දිගු කියවන අනුපිළිවෙල භාවිතා කරන්න (Oxford Nanopore හෝ PacBio වැනි) සැන්ගර් අනුක්‍රමණය මග හැරිය හැකි අඩු සංඛ්‍යාත අර්ධ විශේෂයන් හෝ කොඳු ඇට පෙළ නැවත සකස් කිරීම් හඳුනා ගැනීමට.
- RP-HPLC සහ Mass Spectrometry (මෙනෙවිය) පෙප්ටයිඩ සඳහා: කෘතිම පෙප්ටයිඩ ප්රතික්රියාකාරක භාවිතා කරන විට, විශ්ලේෂණ C18 Reverse-Phase HPLC භාවිතයෙන් නියැදිය විශ්ලේෂණය කරන්න (0.1% H₂O/ACN ශ්‍රේණියේ TFA) උපරිම විභේදනය සහතික කිරීමට (Rₛ ≥ 1.5) සහ පිරිසිදුකම (≥ 98%). අධි-විභේදන විද්‍යුත් ඉසින අයනීකරණ ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය භාවිතයෙන් අණුක බර තහවුරු කරන්න (ESI-MS) යටතේ ස්කන්ධ දෝෂයක් සමඟ 5 ppm.
විශ්වාසනීය අභිරුචි සංස්ලේෂණය සහ සත්යාපනය අපේක්ෂා කරන රසායනාගාර සඳහා, a භාවිතා කිරීම අභිරුචි පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණ වේදිකාව විස්තීර්ණ විසින් පිටුබලය විශ්ලේෂණාත්මක HPLC සහ ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂ පරීක්ෂණ සේවා ලබා දෙන සෑම අනුපිළිවෙලක්ම භාවිතයට පෙර දැඩි ගුනාංගීකරනයකට භාජනය වන බව සහතික කරයි.
වේදිකාව 3: ක්රියාකාරී මාර්ග පාලන
ප්‍රකාශිත ප්‍රෝටීන් හෝ සංස්ලේෂණය කරන ලද පෙප්ටයිඩය ඉලක්කගත සෛලීය සන්දර්භය තුළ නිවැරදිව ක්‍රියා කරන බව ජීව විද්යාත්මක වලංගුකරණය තහවුරු කරයි.:
- ප්රකාශනය සහ ප්රමාණය තහවුරු කිරීම: අනපේක්ෂිත ක්ෂයවීම් නිෂ්පාදන නොමැතිව ප්‍රකාශිත නිර්මිතය පුරෝකථනය කරන ලද අණුක බරට ගැලපෙන බව තහවුරු කිරීමට Western blot හෝ immunoprecipitation විශ්ලේෂණය සිදු කරන්න..
- සෛලීය ජාන පසුබිම් පාලන: MDM2 ඉදිකිරීම් ඇගයීමේදී, p53-null සෛල රේඛා ඇතුළත් වේ (Saos-2 හෝ H1299 වැනි) p53-wildtype රේඛා සමඟ (MCF-7 හෝ U2OS වැනි) ඉලක්කගත දෛශික බලපෑම් වලින් p53 මත රඳා පවතින විෂ බව වෙන්කර හඳුනා ගැනීමට.
- ප්‍රෝටිසෝම නිෂේධන පරීක්ෂණ: ප්‍රෝටිසෝම නිෂේධක සමඟ මාරු කළ සෛල වලට ප්‍රතිකාර කරන්න (MG132 වැනි) MDM2-මැදිහත් වූ p53 පිරිහීම ගලවා ගත හැකි බව තහවුරු කිරීමට, ක්රියාකාරී E3 ligase ක්රියාකාරකම් ස්ථාපිත කිරීම.
වගු රාමුව: ප්රතික්රියාකාරක වලංගුකරණය සහ අනුකරණය සඳහා රසායනාගාර පිරික්සුම් ලැයිස්තුව
පහත ඇගයුම් පිරික්සුම් ලැයිස්තුව ව්‍යුහගත රාමුවක් සපයයි
වලංගුකරණය විශ්වාසනීය පෙප්ටයිඩ සමාගම් කර්මාන්ත ශාලාව වේදිකාව
පර්යේෂණාත්මක ක්‍රියාත්මක කිරීමට පෙර උපුටා දක්වන ලද දෛශික සහ අභිරුචි පෙප්ටයිඩ ප්රතික්රියාකාරක:
| වලංගු කිරීමේ අදියර | පරාමිතිය / පරීක්ෂණය | පිළිගැනීමේ නිර්ණායක | ප්‍රාථමික කෞතුක වස්තු වලක්වා ඇත |
|---|---|---|---|
| වේදිකාව 1: පෙළපත | ගොඩක් සොයාගැනීමේ හැකියාව & CoA විගණනය | ගැළපෙන කාණ්ඩ අංකය
Liraglutide Api සැපයුම්කරු නිෂ්පාදකයා 100% ප්‍රවර්ධකයා හරහා අනුක්‍රමික අනන්‍යතාවය, ටැග්, සහ මායිම් ඇතුල් කරන්න > වැරදි ප්ලාස්මිඩ් සමස්ථානික හෝ වෙනස් කළ නාමාවලි අයිතම ලබා ගැනීම |
|
| වේදිකාව 2: අනුපිළිවෙල | සැන්ගර් / NGS හන්දිය අනුපිළිවෙල | 100% ප්‍රවර්ධකයා හරහා අනුක්‍රමික අනන්‍යතාවය, ටැග්, සහ මායිම් ඇතුල් කරන්න | රාමු-මාරු විකෘති, ලක්ෂ්ය විකෘති, සහ හන්දි මකාදැමීම් |
| වේදිකාව 2: භෞතික QC | RP-HPLC සංශුද්ධතාවය විශ්ලේෂණය | තනි තියුණු වර්ණදේහ උච්චය, සංශුද්ධතාවය ≥ 98%, Rₛ ≥ 1.5 | කප්පාදු කළ මකාදැමීමේ අනුපිළිවෙල (n-1) සහ සංශ්ලේෂණ අතුරු නිෂ්පාදන |
| වේදිකාව 2: ස්කන්ධ QC | අධි-විභේදන ESI-MS පෙප්ටයිඩ සංශ්ලේෂණය | ඇතුළත මොනොයිසොටොපික් ස්කන්ධ නිරවද්‍යතාවය < 5 න්‍යායාත්මක ස්කන්ධයේ ppm | වැරදි ඇමයිනෝ අම්ල ආදේශන හෝ අසම්පූර්ණව ඉවත් කිරීම |
| වේදිකාව 3: ක්රියාකාරී | බටහිර බ්ලොට් & ප්රකාශන සත්යාපනය | නිවැරදි අණුක බර පටිය; අනපේක්ෂිත බෙදීම් නිෂ්පාදන නොමැත | ප්‍රෝටීන වැරදි ලෙස නැමීම, වේගවත් පිරිහීම, හෝ නිහඬ ප්රකාශනය අසාර්ථක වීම |
| වේදිකාව 3: මාර්ගය | අයිසොජනික් & Null Cell Controls | p53-wildtype vs හි පැහැදිලි ක්රියාකාරී අවකලනය. p53-null සෛල | නිශ්චිත මාර්ග සංඥා වලට දෛශික විෂ වීම වැරදි ලෙස ආරෝපණය කිරීම |
අභිරුචි දෛශික සහ පෙප්ටයිඩ R හි පර්යේෂණාත්මක ප්රතිනිෂ්පාදනය ආරක්ෂා කිරීම&ඩී
සාහිත්ය උපුටා දැක්වීම් ප්රතික්රියාකාරක තේරීම සඳහා ආරම්භක ලක්ෂ්‍යයක් සපයයි, නමුත් ඔවුන්ට අභ්යන්තර තත්ත්ව පාලනය සඳහා ආදේශ කළ නොහැක. ජෛව වෛද්‍ය පර්යේෂණ දත්ත ප්රතිනිෂ්පාදනය පිළිබඳ වැඩෙන පරීක්ෂාවට මුහුණ දෙන බැවින්, සෑම දෛශික ඉදිකිරීම් සහ පෙප්ටයිඩ කාණ්ඩයක් ස්වාධීනව වලංගු කරන රසායනාගාර ඔවුන්ගේ බංකු ආයෝජන ආරක්ෂා කරයි, නාස්ති කරන පර්යේෂණ පැය වලක්වන්න, සහ ප්‍රකාශිත නිගමන ශක්තිමත්ව පවතින බවට සහතික වන්න.
විශේෂිත ද්රව්ය ලබා ගැනීමේදී හෝ අභිරුචි අනුපිළිවෙලවල් පරිමාණය කිරීමේදී, ඇතුළත ක්‍රියාත්මක වන විශ්ලේෂණාත්මක හවුල්කරුවෙකු සමඟ වැඩ කිරීම පන්තිය 100 වඳ පිරිසිදු කාමර පහසුකම් හරස් දූෂණය සහ පාරිසරික එන්ඩොටොක්සින් නිෂ්පාදනයෙන් ඉවත් කිරීම සහතික කරයි. තව ද, උත්තෝලනය විශේෂිත පෙප්ටයිඩ CRO විසඳුම් තනි තනි HPLC chromatograms මගින් සහය වන සම්පුර්ණ ලේඛනගත ද්රව්ය ලබා ගැනීමට පර්යේෂණ කණ්ඩායම්වලට ඉඩ ලබා දේ, ESI-MS වර්ණාවලි, සහ බොහෝ-විශේෂිත CoAs - විවේචනාත්මක සෛල විශ්ලේෂණයන් ආරම්භ කිරීමට පෙර.
දැඩි 3-අදියර වලංගු කිරීමේ ප්‍රොටෝකෝලයක් සමඟ විවේචනාත්මක සාහිත්ය විශ්ලේෂණය ඒකාබද්ධ කිරීමෙන්, පර්යේෂණ රසායනාගාරවලට ඔවුන්ගේ විද්යාත්මක ප්‍රතිදානයේ අඛණ්ඩතාව සහ ප්රතිනිෂ්පාදනය ආරක්ෂා කරන අතරම සාහිත්ය උපුටා ගත් මෙවලම් විශ්වාසයෙන් යුතුව භාවිතා කළ හැකිය..
R සඳහා ඊළඟ පියවර&ඩී කණ්ඩායම්
ඔබේ පර්යේෂණ නල මාර්ගය සඳහා ස්වාධීන ගුනාංගීකරනය හෝ අධි-පිරිසිදු අභිරුචි පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණය අවශ්‍ය වේ? තාක්ෂණික ඇගයීමක් ඉල්ලා සිටීමට MOL වෙනස්කම් හි විශ්ලේෂණ විශේෂඥයින් අමතන්න, විශ්ලේෂණාත්මක පරීක්ෂණ පරාමිතීන් සමාලෝචනය කරන්න, හෝ ඔබේ පර්යේෂණාත්මක අවශ්‍යතාවලට ගැලපෙන අභිරුචි සංස්ලේෂණ විසඳුම් ගවේෂණය කරන්න.
විද්යාත්මක විචාරකයින් ගැන
මෙම තාක්ෂණික මාර්ගෝපදේශය සම්පාදනය කර සමාලෝචනය කරන ලදී MOL විද්යාත්මක උපදේශක මණ්ඩලය වෙනස් කරයි & පර්යේෂණ කණ්ඩායම- ජ්‍යෙෂ්ඨ පෙප්ටයිඩ රසායනඥයින්ගේ ඒකාබද්ධ කණ්ඩායමක්, අණුක ජීව විද්යාඥයන්, සහ විශ්ලේෂණ QC විශේෂඥයින්. පන්තිය තුළ ක්‍රියාත්මක වේ 100 වඳ පිරිසිදු කාමර පහසුකම්, MOL Changes කණ්ඩායම අභිරුචි පෙප්ටයිඩ අනුක්‍රමික නිර්මාණය පිළිබඳ විශේෂීකරණය කරයි, ක්ෂුද්ර ජීවී / ඝන-අදියර සංශ්ලේෂණය, සහ දැඩි බොහෝ-විශේෂිත විශ්ලේෂණ වලංගුකරණය (RP-HPLC, ESI-MS, සහ වඳ පරීක්ෂාව) ප්රතිනිෂ්පාදනය කළ හැකි විද්යාත්මක පර්යේෂණ සඳහා සහාය වීම.
