Modifikacije peptida
Ispitivanje peptida
Uloga peptidnog testiranja
Testiranjem peptida utvrđuje se čistoća, molekularna težina, ispravnost slijeda, te prisutnost nečistoća peptida. Ovo je ključno za znanstvene istraživačke eksperimente, razvoj lijekova i kliničke primjene jer: peptidi visoke čistoće (npr. >95%) može smanjiti eksperimentalne smetnje i poboljšati pouzdanost podataka. Peptidi nečistoće mogu utjecati na biološku aktivnost ili čak potaknuti imunološki odgovor (npr. nečistoće u lijekovima mogu izazvati alergiju ili toksičnost).
Često korišteni testovi:
HPLC (Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti): analizira čistoću peptida i sastav nečistoća.
Masena spektrometrija (MS): Odredite molekularnu težinu i provjerite točnost slijeda.
Analiza aminokiselina (AAA): kvantitativno odrediti aminokiselinski sastav peptida.
Provjera biološke aktivnosti i funkcije peptida
Osigurajte stabilnost peptidnih reagensa
Osigurajte sterilnost i usklađenost s endotoksinom
Uobičajeno testiranje peptida
Uglavnom uključuje čistoću peptida; testiranje sadržaja; ispitivanje sterilnosti; PH vrijednost; ispitivanje vlage; ispitivanje topljivosti i drugi aspekti.
Sterilnost
Metoda izravne inokulacije: inokulirati u oba medija, inkubirati za 14 dana i promatrati rast mikroba.
Metoda membranske filtracije: Otopina je propuštena kroz sterilnu filtersku membranu (veličina pora 0.22 μm), mikroorganizmi su bili zarobljeni na membrani, koji je prenesen u medij kulture za inkubaciju.
ATP bioluminiscencija: Detekcija ATP-a proizvedenog metabolizmom mikroba, brza (sati) ali zahtijeva validaciju.
Čistoća
RP-HPLC: Na temelju razlike u hidrofobnosti peptida, odvajanje na C18/C8 koloni i detekcija UV ili MS.
MS: Određivanje molekulske mase peptida (MALDI-TOF ili ESI-MS), provjera slaganja s teorijskim vrijednostima i otkrivanje modifikacija ili nečistoća.
Princip analize aminokiselina: nakon kisele hidrolize peptida, kvantificirati sastav svake aminokiseline i provjeriti čistoću usporedbom s teoretskom vrijednošću.
SDS-STRANICA: Odvajanje elektroforezom i promatranje pojedinačnih traka bojanjem Caulmers Brilliant Blue ili Silver.
sadržaj
Analiza elemenata: Rastavljanjem složenih fizičkih procesa na mnogo sićušnih "meta-procesa", svaki "meta-proces" slijedi isti zakon, problem se pojednostavljuje analizom tih „meta-procesa“ i primjenom potrebnih matematičkih metoda.
Očuvanje mase: U bilo kojoj fizičkoj ili kemijskoj reakciji, zbroj masa tvari koje sudjeluju u reakciji jednak je ukupnoj masi produkata nakon reakcije.
Normalizacija područja:Ovo je metoda koja se matematički definira kao pretvaranje apsolutne vrijednosti fizičkog sustava u odnos relativne vrijednosti. Kroz normalizaciju, izračuni se mogu pojednostaviti i vrijednost se može učinkovito smanjiti.
Ispitivanje peptida
Dobijte ponude za testiranje peptida kako biste točno pratili izvedivost svog eksperimentalnog procesa.
