Često postavljana pitanja
Jednostavno do kompleksa od miligrama do kilograma
Custom Quote Request
How to store peptides?
Liofilizirani peptidi
Za dugotrajno skladištenje peptida, preporučamo ih čuvati kao čvrsti prah. Liofilizirani peptidi mogu se pohraniti na -20°C ili niže uz minimalnu razgradnju. Kupcima se savjetuje da svaki put ponovno pregledaju prilagođene peptide 2 godina od datuma puštanja kontrole kvalitete.
Peptidi u otopini
Peptidi u otopini manje su stabilni i skloni razgradnji. Vodene otopine koje se koriste za otapanje peptida moraju biti sterilne i čiste.
U otopini, određena količina peptida može se razgraditi, ovisno o aminokiselinama prisutnim u nizu. Neki primjeri navedeni su u nastavku:
– Peptidi koji sadrže metionin, ostaci cisteina ili triptofana trebali bi imati ograničeno vrijeme skladištenja u otopini zbog oksidacije. Ove peptide treba otopiti u otapalu bez kisika. –
Glutamin i asparagin mogu se deamidirati u glutaminsku kiselinu i asparaginsku kiselinu, odnosno. –
Cistein se može podvrgnuti oksidativnoj ciklizaciji da bi se stvorila cistein-cistein disulfidna veza (koji mogu nastati unutar ili između disulfidnih veza). –
Nabijeni ostaci (asparaginska kiselina, glutaminska kiselina, lizin, arginin, histidin) su higroskopni (upijajući vodu iz zraka) i teže stvaranju viskoznog, bistro ulje. Ova fizička promjena ne mora utjecati na prirodu peptida. Preporuča se da se takvi peptidi liofiliziraju kako bi se uklonile vode u tragovima, zatim degazirati dušikom kako bi se osiguralo da u bočici nema vodene pare, a zatim brzo začepi.
Kako biste spriječili štetu od opetovanog smrzavanja i odmrzavanja, preporučujemo da korisnici otope samo onu količinu peptida potrebnu za trenutni eksperiment. Višak otopine treba pohraniti na ≥ -20 o C do potrebe.
Izbjegavajte vlagu.
Budući da vlaga značajno smanjuje dugotrajnu stabilnost peptida, preporučujemo ekvilibriranje peptida u eksikatoru na sobnu temperaturu prije otvaranja bočica. Po završetku izdavanja peptida, preostale peptide u epruveti treba lagano pročistiti bezvodnim dušikom, tada posudu treba začepiti, zapečaćena folijom za brtvljenje, i čuvati na -20°C.
Karakteristike topljivosti različitih peptida znatno variraju. Ostaci kao što je alanin (Ala), cistein (Cys), izoleucin (S), leucin (Leu), metionin (Met), fenilalanin (Phe), i valin (Val) povećati hidrofobnost i topljivost peptida u vodenim otopinama, te se preporučuje da kupac slijedi ove smjernice prilikom prilagođavanja peptida.
Svojstva topljivosti
Topljivost peptida jako ovisi o slijedu aminokiselina. Prirodno hidrofobni peptidi (A, F, G, V, L, ja, M, W, P s većom sklonošću) zahtijevaju organska otapala za solubilizaciju. Kiseli peptidi (veća sklonost D, E u peptidnoj sekvenci) zahtijevaju bazične vodene pufere za solubilizaciju, dok osnovni peptidi (veća sklonost K, H, i R) zahtijevaju kisele vodene pufere za solubilizaciju.
Odabir otapala
S obzirom na ograničenja vašeg testa, preporučujemo korištenje sljedećih smjernica za određivanje najboljeg otapala za solubilizaciju peptida
Hidrofobni peptidi
Za ponovnu solubilizaciju hidrofobnih peptida, dodati 100 µL DMSO-a i sonicirati dok ne nastane homogena otopina. Sljedeći, dodajte međuspremnik po svom izboru kako biste napravili a 1 mg/mL otopine (veća je koncentracija peptida, potrebna je veća količina DMSO-a).
Hidrofilan (kiselo) Peptidi
Za ponovnu solubilizaciju kiselih peptida, dodati 100 µL od 1% NH 4 OH da 1 mg peptida i vorteks. Nakon što je otopina bistra, dodajte međuspremnik po svom izboru kako biste napravili a 1 mg/mL otopine.
Hidrofilan (Osnovno) Peptidi
Za rekonstituciju bazičnog peptida, dodajte destiliranu vodu 1 mg peptida i vorteks.
Koja je razlika između neto i bruto težine peptida??
Industrijski standard je isporuka peptida u liofiliziranom obliku kao bruto težina. Bruto težina peptida je ukupna težina svih komponenti prisutnih u liofiliziranom prahu. Ovo uključuje peptid od interesa, sve peptidne nečistoće, voda, zaostala otapala, i protuion.
Naprotiv Neto težina peptida, izračunato iz Neto sadržaj peptida, je težina od samo peptid komponenta prisutna u liofiliziranom prahu. To nudi točnije koncentracije vaših sljedećih otopina peptida. Stoga, preporučili smo iznose neto težine peptida za Prilagođeni peptid narudžbe.
Neto sadržaj peptida mjerenje se provodi analizom aminokiselina (AAA; ograničena točnost, ali zahtijeva malu količinu materijala) ili elementarna analiza (CHN; zahtijeva miligrama peptida, ali je točniji). Obje metode daju postotnu vrijednost (tj., 75% neto sadržaj peptida).
Neto sadržaj peptida ovisi o količini prisutnog protuiona*, što ovisi o sekvenci peptida. U biti, veći je naboj peptida, manji je sadržaj peptida
*Bilješka: Element koji se koristi za izračunavanje neto sadržaja peptida temelji se na peptidnom protuionu. Ovo se radi kako bi se osiguralo da protuion ne pridonosi količini sadržaja peptida. Na primjer, kada su TFA ili acetat protuion, koristi se dušik jer se nalazi u peptidu, ali ne i u TFA ili acetatu. Ugljik ili dušik mogu se koristiti kada je klorid protuion iz istog razloga.
Izračuni neto težine peptida:
Neto količina peptida (ukupni peptid) — metoda koju koristimo za neto prilagođene narudžbe peptida.
Pomnožite neto postotak sadržaja peptida (decimalni oblik) prema bruto težini peptida, kako bi se dobila količina neto količine peptida (ukupni peptid).
Na primjer:
Za 5 mg bruto peptida/bočica:
Neto sadržaj peptida je 84%.
Točna količina ukupnog peptida = 0.84*5 mg=4,2 mg ukupnog peptida
Neto količina peptida od interesa—najtočnija — korisnik može sam koristiti ovu metodu za izračunavanje peptida od interesa.
Pomnožite neto postotak sadržaja peptida s bruto težinom peptida, i čistoću peptida (pomoću HPLC), kako biste izračunali točnu količinu peptida od interesa koji imate. Neto postotak peptida (decimalni oblik) se množi s čistoćom peptida (decimalni oblik).
Na primjer:
Za 5 mg bruto peptida/bočica sa:
Neto sadržaj peptida je 84%.
Točna količina peptida od interesa je = 0.84*0.96*5 mg = 4,03 mg
MOL Changes koristi Fmoc kemiju čvrste faze umjesto BOC kemije. Fmoc kemija omogućuje uklanjanje zaštitnih skupina korištenjem blagih uvjeta tijekom produljenja peptida, dok BOC kemija zahtijeva upotrebu jake kiseline za uklanjanje zaštitnih skupina tijekom produljenja peptida. Dodatno, Fmoc kemija koristi trifluorooctenu kiselinu (TFA) za uklanjanje peptida iz smole, dok BOC kemija koristi fluorovodičnu kiselinu (HF). HF je bezbojan, vrlo korozivno, i kontaktni otrov.
Stoga, MOL Changes koristi Fmoc kemiju jer je blaža, fleksibilan, i svestran u usporedbi s BOC kemijom.
Kako mogu izračunati molarnost svog peptida?
Molarnost se odnosi na molarnu koncentraciju otopine, što je broj molova otopljene tvari u 1 litra otopine, izraženo kao mol/L, ili M.
Molaritet [M] = Masa / (Volumen x molarna masa); Krtica = koncentracija (g/L) x Volumen (L)/MW (g/mol)
Primjer:
S obzirom: 1mg suhog peptidnog praha s MM: 20KDa (Molarna masa peptida je 20 g/mol)
Za određivanje molarnosti s poznatom masom i poznatim volumenom
Za 1 ml otopine ovog peptida:
Molarnost = masa (0.001g) / (volumen (0.001L) x Molarna masa (MW 20,000) = 50 uM
Za određivanje mase za postizanje određenog molariteta:
Ako je za vašu analizu, potrebna vam je 0,01 mM otopina radnog peptida u 1 ml vode, zatim izračunajte potrebnu masu na sljedeći način:
Masa = Molarnost x Volumen x Molarna masa
Masa = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20 000 g/mol = 0,0002 g
Stoga, trebat će vam 0,2 mg/ml peptida da biste dobili radnu otopinu od 0,01 mM.
U kojem obliku se isporučuju peptidi?
Isporučujemo kao liofilizirani ili sirovi prah i otopinu peptida.
Kako mogu znati hoće li moj peptid biti topiv??
Topivost peptida u danom otapalu ovisi o sekvenci aminokiselina i često ju je teško predvidjeti. U slučaju kataloških peptida, informacije o topljivosti navedene su u podatkovnoj tablici za kontrolu kvalitete. Za prilagođene peptide, pogledajte odjeljak pod naslovom “Kako bih trebao otopiti svoj peptid”.
Koja je razlika između sadržaja peptida i čistoće peptida?
Sadržaj peptida nije pokazatelj čistoće peptida jer su to dva odvojena mjerenja. Čistoća je određena analitičkom HPLC i ukazuje na prisutnost/odsutnost drugih peptidnih kontaminanata (tj. skraćeni peptidi).
Neto sadržaj peptida određuje stvarnu količinu peptida (peptid od interesa kao i peptidne kontaminante) prisutan u uzorku. Neto sadržaj peptida tradicionalno se mjeri analizom aminokiselina (AAA; ograničena točnost, ali zahtijeva malu količinu materijala) ili elementarna analiza (CHN; zahtijeva miligrama peptida, ali je točniji).
Kako općenito čistite svoje peptide?
Peptidi MOL Changes općenito se pročišćavaju preparativnom HPLC reverzne faze, korištenjem 2 puferi koji sadrže 0.1% trifluorooctena kiselina (TFA). Prvi međuspremnik (Međuspremnik A) sastoji se od 0.1 % TFA u deioniziranoj vodi i drugi pufer (Međuspremnik B) sastoji se od 0.1 % TFA u acetonitrilu (ACN).
općenito, sirovi peptidi se prvo otope u otopini pufera A, određena količina pufera B, ili organsko polarno otapalo kao što je DMSO. Ako je korišteno organsko polarno otapalo ili pufer B, ova bistra otopina prvo će se razrijediti puferom A. Sljedeći, peptidna otopina se filtrira i unosi u preparativni HPLC sustav. Korištenje optimiziranog gradijenta metode, frakcije se zatim prikupljaju na temelju očitanja apsorbancije. Svaka se frakcija zatim analizira pomoću analitičke HPLC kako bi se osiguralo da čistoća svake frakcije zadovoljava traženu specifikaciju čistoće.
Ove "čiste" frakcije se zatim spajaju i liofiliziraju. "Čisti" prah se zatim testira na čistoću i identitet kako bi se osiguralo da je proizveden ispravan peptid.
Konačno, neovisna skupina za kontrolu kvalitete u AnaSpec ponovno testira peptid kako bi osigurala da svi atributi testiranja zadovoljavaju tražene specifikacije.
Kako da napišem svoje završetke peptidne sekvence?
Međunarodna nomenklatura koja se koristi za završetke niza je sljedeća:
– N-kraj: H znači slobodni amin (NH2-), Ac znači acetil [CH3C(O)-NH-], Pyr znači piroglutaminska kiselina
– C-terminal: OH znači slobodna kiselina (-COOH), NH2 znači amid [-CONH2]
– Modifikacije na bočnom lancu aminokiselina prikazane su u zagradama nakon odgovarajuće aminokiseline. Na primjer; fosforilirani serin = S(PO3H2) ili epsilon-N-acetilirani lizin = K(Ac)
Tijekom proizvodnje peptida, ioni u otopinama za sintezu i pročišćavanje vežu se za nabijene bočne lance aminokiselina peptida, stvaranje soli. Ovi ioni poznati su kao peptidni protuioni i pomažu uravnotežiti naboj peptida.
Trifluorooctena kiselina (TFA) se obično koristi u sintezi i pročišćavanju peptida.
S bazičnim aminokiselinama stvara trifluoracetatne soli (npr., lizin, arginin, histidin) i slobodni N-terminalni amin. Stoga, trifluoroacetat je obično zadani protuion.
Minimalni broj molekula TFA vezanih na peptid proporcionalan je broju bazičnih ostataka u određenoj peptidnoj sekvenci. ovako, bazičniji ostaci prisutni u peptidu, niži je neto sadržaj peptida liofiliziranog praha. Da bi se uzela u obzir TFA ili sadržaj vode prisutan u uzorku, preporučujemo provođenje testa sadržaja peptida za svaki prilagođeni peptid.
Voda i trifluoroctena kiselina (TFA) su nusprodukti procesa pročišćavanja. Međutim, TFA može izazvati zabrinutost zbog toksičnosti za živ i pretkliničke studije. Stoga, MOL Changes nudi netoksični acetat, klorid, ili izmjenjivači amonijevih soli.
hy su peptidi koji sadrže Cys, Met, ili Trp teško sintetizirati?
Peptidi koji sadrže Cys, Met, ili Trp je izazovno sintetizirati i dobiti proizvode visoke čistoće. To je uglavnom zbog nestabilnosti i osjetljivosti na oksidaciju ovih funkcionalnih skupina. Potrebna je posebna pozornost pri uporabi i skladištenju ovih peptida kako bi se izbjeglo ponovno otvaranje bočica.
Jesmo li propustili vaše pitanje? Javite nam se a mi ćemo
vratiti se unutra 24 sati.
