적절한 용해 방법은 펩타이드 실험의 성공에 중요한 요소입니다. 부적절한 용해는 펩타이드의 손실과 실험의 실패를 초래할 수 있습니다. 그러나 이상적인 용해 방법을 찾는 것은 때때로 매우 어렵습니다. 다음은 두 개의 기술 그룹이 제안하는 용해 방법입니다.
MOL, 기술 그룹 해산 가이드 변경
펩타이드 용해의 주요 문제는 이차 구조의 형성입니다.
소수성 펩타이드 사슬의 이차 구조의 형성은 가장 짧은 펩타이드 사슬을 제외하고는 더 분명하지만, 이 현상은 극성에 관계없이 거의 모든 펩타이드 사슬에서 발생합니다. 따라서 폴리펩타이드를 용해하는 첫 번째 원칙은 멸균 증류수 또는 탈이온수(또는 조건이 허용되는 경우 무산소수)를 사용하는 것입니다.
펩타이드 용액은 박테리아에 의해 분해될 수 있습니다. 이러한 현상을 방지하려면 펩타이드를 멸균 증류수에 녹이거나 기공 크기가 0.45 또는 0.2μm인 필터 멤브레인으로 여과하여 멸균해야 합니다. Cys, Met, Trp가 포함된 폴리펩타이드는 특히 산화에 취약하므로 산소가 없는 물에 용해해야 합니다. 산소가 없는 물은 불활성 가스(질소, 헬륨, 아르곤)를 주입하여 감압으로 기체를 제거하면 얻을 수 있습니다.
펩타이드가 순수한 물에 녹지 않는 경우, 초음파 처리를 통해 입자를 분해하고 용해도를 높일 수 있습니다. 참고: 초음파 처리는 용액의 가열과 펩타이드의 분해를 유발합니다.
펩타이드에 여러 염기성 아미노산이 포함되어 있는 경우 1~10% 아세트산 수용액을 사용하고, 소수성이 강한 펩타이드의 경우 50% 아세트산을 사용합니다.
폴리펩타이드에 다량의 산성 아미노산이 포함된 경우 1 ~ 10% 암모니아 용액 또는 에틸 모르핀 아세테이트 또는 중탄산염과 같은 휘발성 알칼리성 완충액에 용해할 수 있습니다. 크로마토그래피 전에 pH 값을 조정해야 합니다.
펩타이드를 컬럼에 로드하려면 유기 용매의 양이 매우 적어야 하며, 그렇지 않으면 보존 시간에 심각한 영향을 미칩니다.
폴리펩타이드가 Val, Leu, Met, Phe, Tyr, Ala 등과 같은 방향족 탄화수소 측쇄를 포함하고 있어 소수성이 높거나 중성 펩타이드인 경우, DMF 또는 DMSO와 같은 막 변성제를 사용하면 폴리펩타이드를 용해하는 데 도움이 될 수 있습니다:
a. 고농도 막 변성제는 폴리펩타이드의 이차 구조를 파괴하여 폴리펩타이드의 용해를 돕습니다.
b. 막 변성제는 펩타이드 분석 용액의 제조에 적합하지만 생물학적 활성에 대한 연구를 방해할 수 있습니다.
c. DMF는 최고의 변성제이며(최고 농도는 30%에 도달할 수 있음), 펩타이드가 녹을 때까지 한 방울씩 첨가합니다.
d. 역상 크로마토그래피 중에 DMF는 용출액의 앞쪽 피크와 함께 흘러나옵니다. 주입량에 따라 피크 값이 매우 높을 수 있습니다. 대부분의 펩타이드는 다량의 DMF가 용출된 후 몇 분 이내에 용출될 수 있습니다. 펩타이드 사슬이 작고 너무 일찍 용출되면 펩타이드의 양이 감소합니다.
MOL 변경 기술 그룹 II 해산 안내서
아미노산이 중성인지, 산성인지, 알칼리성인지 구분하고 용해 방법을 계산하는 방법:
1. 폴리펩타이드 서열에서 아스파르트산 Asp(D), 글루탐산 Glu(E), C-말단 카르복실-COOH를 포함한 각 산성 아미노산은 -1로, 아르기닌 Arg(R), 라이신 Lys(K), 히스티딘 His(H), N-말단 아미노-NH2를 포함한 각 염기성 아미노산은 +1의 값을 할당하고 중성 아미노산은 0으로 지정합니다. 이를 바탕으로 전체 폴리펩타이드의 값이 계산되고 점수는 양수입니다. 점수가 음수인 펩타이드를 염기성 펩타이드, 점수가 음수인 펩타이드를 산성 펩타이드, 점수가 0인 펩타이드를 중성 펩타드라고 부릅니다.
2. 알칼리성 펩타이드인 경우 먼저 물로 녹이고, 녹지 않으면 10% - 30% 아세트산을 사용하고, 펩타이드가 여전히 불용성인 경우 순수 아세트산과 트리플루오로아세트산 TFA(<50μl)를 사용하여 용해한 다음 펩타이드 용액을 원하는 농도로 희석합니다.
3. 산성 펩타이드인 경우 먼저 물로 용해하고, 물에 용해할 수 없는 경우 13% 암모니아수(v/v)를 사용하여 용해한 후 펩타이드 용액을 필요한 농도로 희석합니다. 펩타이드 서열에 시스테인 Cys(C)가 포함된 경우 알칼리성 용액에 용해되지 않습니다. 아래 방법을 시도해 보세요.
4. 중성 펩타이드는 일반적으로 유기 용매에 용해됩니다. 먼저 아세토니트릴(아세토니트릴) 또는 메탄올(메탄올) 또는 이소프로판올(이소프로판올)을 사용하여 용해하고, 소수성이 강한 펩타이드의 경우 먼저 소량의 디메틸설폭사이드(DMSO)로 용해하고 물로 필요한 농도로 희석하고, 펩타이드 서열에 시스테인 Cys(C)가 포함된 경우 디메틸포름아마이드(DMF) 또는 N-methylpyrrolidone(NMP)을 사용하여 용해한다. 응집하기 쉬운 펩타이드의 경우, 먼저 6M 구아니딘-HCl 또는 8M 요소(우레아)를 첨가하여 용해한 다음 필요한 농도로 희석합니다.
설명합니다:
1. 보관 및 후속 사용을 용이하게 하기 위해 펩타이드를 약 1-2 mg/ml의 농도로 녹이는 것이 좋습니다.
2. 일반 펩타이드 동결 건조 분말은 -20°C에서 1년 이상 보관할 수 있습니다. 용해 펩타이드의 경우 -20°C에서 분주하여 보관하는 것이 좋으며, 펩타이드 서열에 메티오닌 메트(M), 시스테인산 시스(C) 또는 티로신 티르(Y)가 포함된 경우 산화를 방지하기 위해 산소가 없는 환경에 보관하는 것이 좋습니다.
첨부된 아미노산 목록:
1.중성 아미노산: 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 시스테인, 메티오닌, 트레오닌, 세린, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판 산, 프롤린, 아스파라긴 및 글루타민
F먹다: 이 유형의 아미노산 분자는 하나의 아미노기와 하나의 카르복실기만 포함합니다.
2.산성 아미노산: 글루탐산, 아스파르트산
특징: 이 유형의 아미노산 분자는 하나의 아미노기와 두 개의 카르복실기를 포함합니다.
3.기본 아미노산 : 라이신, 아르기닌, 히스티딘
특징: 이 유형의 아미노산은 분자에 디아미노 카르복실기를 포함하고 있으며, 히스티딘은 질소 고리가 있고 약 알칼리성이며 염기성 아미노산이기도 합니다.