Тиҙ яуап
An eight-residue peptide — Ac-VCTLCSCY — was synthesized from the conserved metal-binding motif of cobalt nitrile hydratase, loaded with one equivalent of Co(I…
Фермент проблемаһы пептид урап үтергә уйлап сығарылған
Ацетил гексапептид 1 Күмәртәләп һатыу Пептид сығанаҡтары Co-типлы нитрил гидратаза актив урыны түбән спинлы Co тота.(III) N2S3 беренсе координация сфераһында: өс төрлө окисланыу хәлендә нигеҙҙән ике амидат азот һәм өс цистеиндан алынған көкөрт — тиолат, сульфенат һәм сульфинат. был 1.8 Å кристаллы төҙөлөшө Псевдонокардия термофила фермент (ПДБ 1ИРЕ) αCys111-ҙе цистеин-сульфин кислотаһы һәм αCys113-те цистеин-сульфин кислотаһы рәүешендә асыҡлай, тимер ферментында ла күренгән шул уҡ ҡалып.
Унда эләгеү үҙ-үҙенән йыйылған аҙым түгел .. Өлгөрөү өсөн активатор аҡһымы кәрәк ., һәм өсөн PtNHase Чжоу һәм хеҙмәттәштәре α-подъединицаларҙы алмаштырыу механизмын тәҡдим иткән: тәүҙә апо-α2β2 тетрамеры барлыҡҡа килә, бер α-подблок ике Co -ны бәйләй.(II)-составында ε аҡһымдар бар, кобальт индерелә һәм металл плюс экватор цистеиндары окислана, һәм хәҙер функциональ α-подберәмектәр апо-тетрамерға алмаштырыла. Сиктәр тикшеренеүе асыҡтан-асыҡ белдерә, был тураһында аҙ билдәле, нисек атом кимәлендә була ..
Бына бит интерпретациялау проблемаһы .. Голоферментта, металл индереү, цистеиндың окисланыуы, субъединица йыйыу һәм активатор ҡатнашыу бер урында ҡапланған ваҡытта була. Өлгөрөүсе фермент өлгөһөндәге спектроскопик үҙгәреште шул сәбәптәрҙең береһенә йөкмәтеп булмай ., сөнки башҡалар һаман да йүгерә. Ҡоролма ҡоролмаларын сисеп ташлау актуаллекте өҙөп ташламай; ул туған системаны бер үҙгәртеүсене бер тапҡыр уҡып булмаҫлыҡ иткән буталсыҡлыҡтарҙы бөтөрә.
Нимә “Мотив буйынса моделләштерелгән” ысынында билдәләй
Һаҡланған мотив — CXXCSCX ., һәм тикшеренеүҙең һүрәтләүе, уны NHases араһында универсаль. 1990 йылдан алынған конструкция. PtNHase мотивы — Ac-VCTLCSCY: һигеҙ ҡалдыҡ, молекуляр массаһы 933.13 Һәм, ацетил төркөмө менән N-осонда эретелгәнлекте арттырыу өсөн өҫтәлгән. Пептид лиофилизацияланған порошок рәүешендә бирелгән. >98.5% таҙалыҡ һәм бирелгәнсә ҡулланыла.
Һәр позицион элемент эшләй. Тиолаттар бер-береһенә ҡарата һәм металлға ҡарата ултырған цистеин арауығы йыйылмалары. Ser6 координациялаусы цистеиндар араһында ултыра, ә иҫәпләү моделдәрендә уның ян сылбырлы водород бәйләнештәре ике асыҡ тышҡы сфера һыуҙары аша бәйләнгән цистеин көкөрттәренә. С-терминаль тирозин эксперименталь пептидта бар, әммә ДФТ моделдәрендә метил төркөмөнә ҡыҫҡартылған, шулай уҡ Валдың координацияланмаған ян сылбырҙары, Тр һәм Леу; N-терминаль ацетил формил рәүешендә моделләштерелгән. Бөтә тиерлек нигеҙ атомдары плюс Cys2 ян сылбырҙары., Cys5., Ser6 һәм Cys7 һаҡланған.
Конструкция’намыҫлы сиге һығылмалылыҡ .. Һигеҙ ҡалдыҡлы пептид буферҙа бер координация геометрияһын тотмай; ул бер нисә өлгө, тап шуға күрә ЭПР спектры бер түгел, ә ике спин хәлен күрһәтә. Моделдәр шулай уҡ ҡыҫҡартылған һәм полярлаштырыла торған континуум менән сольватланған . (е = 80.4) плюс ике асыҡ һыуҙар — аҡыллы дауалау, әммә тулы пептид түгел.
Спецификация эҙемтәһе туранан-тура. Ацетил ҡапҡасы төшөрөп ҡалдырылған, ҡалдыҡ алмаштырылған, йәки цистеин өлгөһө скремблированный үҙгәртә лигандтар йыйылмаһы. Һис бер спектроскопия дөрөҫ булмаған лигандтар йыйылмаһы менән пептидтан тәғәйенләнгән тәжрибәне тергеҙә алмай.; ул ябай ғына бер үк яҡынса массалы икенсе молекула тураһында хәбәр итәсәк.
Ни өсөн ҡыҫҡа пептид контролдә тотола торған модель булып тора, Ябайлаштырылған фермент түгел
Авторҙар ҡуйған һорау тар ине .: Һаҡланған NHase металл бәйләүсе эҙмә-эҙлеклелектә үҙе лә Co -ны бәйләү өсөн етерлек химик мәғлүмәт бармы?(II) һәм диоксиген тәьҫирендә металл үҙәгендә һәм пептидта үҙгәрештәр кисерергә? Был эҙмә-эҙлеклелек тураһында һорау, ә эҙмә-эҙлеклелек — синтетик пептидтың ҡалған аҡһымһыҙ тапшырыуы.
Шул уҡ платформа инде металдар буйынса ҡулланылған .. Бер үк пептид юғары спинлы Fe -ны бәйләй.(II) үҙәге анаэроб, һәм O2 экспозицияһы тәүҙә арауыҡ-спин генерациялай (S = 3/2) Fe(III) үҙәге, ул түбән әйләнешле Fe -ға әйләнә(III) экватор цистеиндары окисланғанда. Тимер, һуңынан кобальт менән тейәп була торған конструкция, һәм шул уҡ спектроскопиялар менән уҡыла, бер тапҡыр ҡулланыла торған молекула түгел, ә күп тапҡыр ҡулланыла торған һынау карауаты булып тора.
Иң яҡын тышҡы сағыштырыу булып тора SODA пептид . (АЦДЛПЦГ), никель супероксиддисмутазаһынан ете ҡалдыҡлы эҙмә-эҙлеклелек. 2012 йылда. Броеринг һәм хеҙмәттәштәре’ өйрәнеү, Ко-СОДА ике хәл ителә торған этапта окисланған: секунд эсендә металл парамагнит булып ҡала (Co2+) ә көкөрт К-край XAS күрһәткән бер тиолат сульфинатҡа үҙгәртелә; бер нисә сәғәт эсендә, магнит һиҙгерлеге һәм Co K-край XAS металл Co3+ -ға барыуын күрһәтте.. Икенсе тиолат артабан окисланмай һәм каталитик әүҙем комплекс барлыҡҡа килмәй — ос тиолатының булмауына бәйле. Йәғни, төрлө окисланыу эҙмә-эҙлеге менән төрлө пептид, һәм уны Ac-VCTLCSCY һөҙөмтәләре менән берләштерергә ярамай; уның ҡиммәте бында прецедент булараҡ, нимә металлопептид хәл итә ала һәм хәл итә алмай.
Обзор әҙәбиәт ҡаршы ауырлыҡ менән тәьмин итә. Шалевтың металл-пептид ЯМР-ын тикшергән структура иҫәпләү ваҡытында пептидтар дөрөҫ булмаған геометрияларға ярашлы булыу өсөн етерлек һығылмалы булыуын билдәләй, хаталы структур һөҙөмтәләр сығарыу, һәм пептидтарҙан алынған модель түбән аффинлыҡ менән бәйләнә ала, сөнки бөтә бәйләүсе өлөштәр ҙә һаҡланмай. Был ҡаршы аргумент түгел, алым .; был сәбәп иҫәпләү моделдәре һәм күп спектроскопияларҙы бергә уҡырға тура килә. Билдәләнгән осраҡта дөрөҫ булмаған модель, тикшерелгән ысул һеҙгә күберәк һөйләй, тип голофермент, был дөрөҫ сәбәптәр буйынса бер кем дә изоляциялай алмай.
Кобальт ысынында нимә эшләгән: Координация һәм спин дәүләттәре
Анаэроб шарттарҙа А., УФ-күренгән спектр Co(II)–пептид комплексы лигандтан металлға заряд тапшырыу һыҙаттарын интенсив күрһәтте. 305 нм (е = 2800 М−1 см−1) һәм 355 нм (е = 2180 М−1 см−1), цистеин тиолат-Co-ға тәғәйенләнгән(II) заряд тапшырыу. Сөнки сағыштырмаса металлопептид тикшеренеүҙәре һәр тиолат ҡуйҙы–Co .(II) үҙ-ара тәьҫир итешеү яҡынса 900—1200 М−1 см−1, күҙәтелгән интенсивлыҡтар ике бәйләнгән тиолат менән тап килә, өсөнсө цистеинды көсһөҙ йәки координацияһыҙ ҡалдырыу. Яҡынса лиганд-ҡыр һыҙаттары көсһөҙөрәк. 615, 685 һәм 735 нм (ε ≈ 300–400 М−1 см−1) интенсивлығы буйынса октаэдрлы Co -ға ҡарағанда юғарыраҡ.(II) ғәҙәттә бирә, дүрт йәки биш координация һаны күрһәтеп.
Апо-пептидты Co менән титрлау(II) ~685 нм абсорбцияны күҙәткәндә бер пептидҡа яҡынса бер бәйләү урыны тура килә, күренеш менән Кг,ҡушымтаһы 0.45 мкМ. Авторҙар асыҡтан-асыҡ был һандың нимә күтәрә алыуы тураһында: сөнки пептид концентрацияһы тура килгән ҡиммәттән күпкә артып киткән, титрлау тығыҙ булдыра, яҡынса стехиометрик бәйләү, әммә субмикромоляр диссоциация константаһын ҡәтғи билдәләмәй. Ҡиммәте Co-NiSOD һәм Co-SODA пептид комплекстары өсөн хәбәр ителгәндәр менән сағыштырырлыҡ.
Х-диапазонлы ЭПР 10.00 сәғәтендә. 12 К ике сигналды хәл итте. Беренсеһе — бер аҙ ромб формаһындағы түбән әйләнешле Co .(II) функцияһы менән ж-ҡиммәттәре 2.30, 2.25 һәм 2.03; L-диапазон ЭПР 10.00 сәғәтендә. 1.3 ГГц тарҡалды. ж-көсөргәнеш етерлек хәл итеү өсөн Мин = 7/2 гипернәфис структура күпкә асығыраҡ. Икенсеһе — түбән амплитудалы юғары әйләнешле сигнал араһында 1,000 һәм 2,000 G -ла хәл ителгән боролош нөктәләре менән. g′ = 5.7 һәм 4.8, менән тап килә S = 3/2 система. Интеграция анаэроб шарттарҙа икеһе өсөн дә яҡынса тигеҙ сағыштырмаса интенсивлыҡ бирә.
ДФТ юғары спинлы төрҙәр өсөн боҙолған тетраэдрлы N2S2 геометрияһын һәм биш координаталы, түбән әйләнешле төрҙәр өсөн боҙолған квадрат-пирамида геометрияһы, нейтраль CysSH мөмкин булған өс позиция буйынса генерацияланған алты модель менән (Cys2., Cys5 йәки Cys7.). Иҫәпләнгән ж-биш координаталы модель өсөн ҡиммәттәр (1.98-2,57) 2,03–2,40 эксперименталь диапазон менән аҡыллы килешеп төшә, һәм Cys7-лә нейтраль тиоллы модель эксперименталь осор характерын тергеҙә. ж-тензор бигерәк тә яҡшы. Авторҙары’ интерпретацияһы — һығылмалы скелет эсендә булған бер нисә координация геометрияһы — был интерпретация иҫәпләү һәм спектроскопия бергә ярҙам итә ., үлсәү ҡоролошо түгел.
Окисланыу: Нимә үҙгәрҙе, Нимә һығымта яһалды, һәм нимә хәл ителмәне
Диоксиген тәьҫирендә Co һүндерелә.(II) ЭПР сигналдары тиҙ, юғары нисбәттәрендә кислородҡа бәйле үҙгәрештәр булмағанда- һәм сигналдар юҡҡа сыҡҡансы баһаланған түбән әйләнешле төрҙәр. Co менән сағыштырыу(II) буферҙа ике нәмә булдырылды: һыулы кобальттан алынған юғары әйләнешле сигнал комплекстағы сигналдан айырылып тора, һәм һауаға эләгеү кобальтты пептидтан азат итеү генә түгел. Сигналдың юғалыуы окисланыу менән тура килә ЭПР-тын түбән спинлы Co .(III), һәм УФ-күренгән спектр шуға ярашлы үҙгәргән — d-d күсеүҙәре араһында 1990 й. 600 һәм 750 нм кәмей һәм юҡҡа сыға, ә яңы һыҙаттар яҡынса 100 °C-та барлыҡҡа килә. 350, 465 һәм 620 нм, тиолат-Со характеристикаһы(III) заряд тапшырыу.
Пептид яғында, q-TOF LC–MS һауаға эләккәндән һуң өс кислород атомына тиклем индереү менән тап килгән сигналдарҙы күрһәтте. Кислородлы төрҙәрҙең сағыштырмаса интенсивлығы 100-ҙә артҡан. 10 һәм 15 һ, һәм юғары-м/з түбәләре, моғайын, һыу аддукттарына тура килә. Сменалар цистеиндың сульфен һәм сульфин кислотаһы сығарылыштарына окисланыуы менән тап килә., туған әүҙем сайтта табылған шул уҡ үҙгәрештәр.
Ике нәмә мәғлүмәттәр нигеҙләнмәй, ә ҡағыҙҙа шулай яҙылған. Масс-спектрометрия металл үҙәгенең окисланыу хәлен туранан-тура билдәләмәй .. Ә металл һәм лигандтар окисланыу тәртибен хәҙерге мәғлүмәттәрҙән билдәләп булмай — һөҙөмтәләр күрһәтеүенсә, ике процес та диоксиген менән реакция ваҡытында барлыҡҡа килә ., ҡайһыһы беренсе түгел.
Һөҙөмтә кеүек үк контроль мөһим. Пептид-тик иретмә һауала төҫһөҙ ҡала, әммә, ниһайәт, ҡойола, дисульфид барлыҡҡа килтереү аша ихтимал. Ваҡ кислородлы төрҙәр хатта кобальтһыҙ ҙа барлыҡҡа килгән ., өлгөләр менән эш итеү ваҡытында түбән кимәлдәге цистеин окисланыуы менән тап килә. Был тикшеренеүҙең үҙ дәлилдәре, тип көтөлә башланғыс окисланыу фоны түгел, ә гипотезалы ..
Авторҙар шулай уҡ алға ҡарап һаҡлыҡ тәртибен күтәрә .: оҙаҡ ваҡыт кислород тәьҫирендә киңерәк окисланған төрҙәр барлыҡҡа килергә мөмкин, потенциаль рәүештә бис-сульфин кислотаһы мөхитен үҙ эсенә ала, аналоглы артыҡ окисланған, әүҙем булмаған NHase. Инкубация ваҡытын оҙайтыусы һәр кем өсөн, был һынау өсөн фараз, хәл ителгән һөҙөмтә түгел.
Аналитик раҫлау: Ниндәй ысул ниндәй һорауға яуап бирә
Был тикшеренеүҙең һәр ысулы бер һорауға яуап бирә һәм һуҡыр Билдәләнгән пептидтар башҡалар .. Металлопептид ҡағыҙын уҡыу ҡайһыһы ҡайһыһы икәнен белергә тигәнде аңлата ..
УФ–күренеп торған абсорбция яуап бирә, тиолат металл менән бәйле һәм яҡынса нисә, аша LMCT диапазон интенсивлығы ҡаршы ~900-1200 М-1см-1 пер-тиолат эталон. Ул спин хәлен йәки геометрияны хәл итә алмай, һәм ул һеҙгә әйтә алмай, ниндәй цистеин бәйләнгән.
МКД һәм ЭПР ниндәй спин хәлдәре бар һәм ниндәй пропорцияла яуап бирә; интеграцияланған ЭПР интенсивлыҡтары яҡынса тигеҙ юғары/түбән спин нисбәтен бирҙе, һәм L-диапазонлы асыҡлыҡ гипернәфис структура аша түбән спинлы йөкләмәне раҫланы. Әммә ЭПР һуҡыр ЭПР-тын Co(III), тимәк, сигналдың юғалыуы окисланыу менән тура килә, уны туранан-тура үлсәү булмай.
LC-MS яуап бирә, күпме кислород пептид һәм нисек, тип ваҡыт менән алға бара. Уларҙы ниндәй көкөрт йөрөтөүе тураһында бер нәмә лә әйтелмәй ., һәм металл тураһында бер нәмә лә’окисланыу хәле. Окислитель-модификациялау масс-спектрометрияһының дөйөм сиктәре яҡшы документлаштырылған — модификацияға махсус эш ағымы иғтибар итегеҙ, аныҡ ҡалдыҡҡа модификация тәғәйенләү, ғәҙәттә, MS/MS интерпретацияһын талап итә, һәм экстракцияланған ион хроматограммаларынан окисланған һәм окисланмаған төрҙәрҙе һанлаштырыу сағыштырмаса ионлаштырыу һәм тапшырыу һөҙөмтәлелеген күҙ уңында тота..
ДФТ ниндәй координация моделдәре геометрик һәм энергетик яҡтан ышаныслы икәнлегенә яуап бирә, әммә тик ҡыҫҡартылған модель өсөн ысынында иҫәпләнгән — тулы пептид өсөн түгел, эретмәлә.
Синтез яғында ., Өйрәнеү’үҙ сығарыу тикшерелгән ғибрәтле: ирекле тиолдар 1990 й. 0.76 мМ апо-пептид запасы раҫланды Эллман’s анализ, һәм моляр һеңдерелеүсәнлеге 100-ҙә. 280 нм (1,096 М−1 см−1) стандарт ҡойроҡтан булдырылған, шулай итеп, концентрацияны фаразлау түгел, ә белергә мөмкин. Шулай уҡ металлопротеинға характеристика биреүҙең ысулы ла түгел., һәм икеһе лә бер өсөн алғы шарттар булып тора.
Ғәмәли ҡағиҙә .: был исемлектә бер генә техника ла етерлек түгел. Характеристика отчеты, тип тәҡдим итә, бер генә характеристика бирмәгән металлопептид.
Сафлыҡ ., Шәхсиәт, Йөкмәткеһе һәм окисланыу хәле дүрт төрлө һорау
Өлгө була ала. 98% таҙа ВЭЖХ һәм һаман да ҡулланыу өсөн яраҡһыҙ булырға Co(II) эксперимент. Пальмитоил пентапептид-4. Күренеп торған парадокс дүрт һорауҙы айырым тотҡандан һуң тарҡала.
Таҙалыҡ — ВЭЖХ буйынса сағыштырмаса майҙан проценты. Ул күпме УФ-һеңдергән материал элюировать төп пик булараҡ әйтә. Ул түбәнең нимә икәнен әйтмәйҙәр ., һәм ул инде окисланған цистеиндан кәметелгән цистеинды айырмай, әгәр икеһе лә бергә элюирланһа.
Үҙенсәлек — ортогональ структур раҫлау. Бында был масс-спектрометрия тигәнде аңлата, һәм тикшеренеүҙең үҙ LC–MS күрһәтә, ни өсөн бер масса үлсәү сиктәре бар .: бер тапҡыр кислород аддукттары массаны 100-гә күсерә. 16 Да кислородҡа, окисланған пептид һәм башҡа пептидты бутарға мөмкин, әгәр ҙә масса асыҡлығы һәм хроматографик контекст тейешле булмаһа.
Ҡәнәғәт, йәки таҙа пептид, масса балансы булып тора — пептид плюс контрион, һыу һәм тоҙ .. Был туранан-тура бында мөһим, сөнки бәйләүсе титрлау’стехиометрия белергә бәйле, күпме пептид ысынында кюветта .. Номиналь концентрацияһы иҫәпләнгән үлсәү порошок йөкмәткеһен билдәләүһеҙ етерлек һүндерелгән була ала, тип күсерергә тура килгән бәйләү ҡойроғо ..
Окисланыу хәле — цистеиндар һәм металлдың үҙенсәлеге, уларҙы ВЭЖХ ла, бөтөн масса ла таҙа хәбәр итмәй .. Лиофилизацияланған порошок, ул 98% таҙа ВЭЖХ ярҙамында цистеиндар инде окисланған сульфен йәки дисульфид формаларына эшкәрткән һәм лиофилизациянан мәғәнәле өлөшө булыуы мөмкин. Был бер аҙ юғарыраҡ масса булып күрһәтер ине, күсерелгән һаҡлау ваҡыты, йәки ябай ғына кәметелгән ирекле тиол титры Эллмандың. Тикшеренеүҙең’күҙәтеү ваҡ кислородлы төрҙәре булмағанда кобальт, өлгө менән эш итеүгә бәйле, был фондың ысын булыуына дәлил булып тора.
Ҡарар ҡағиҙәһе түбәндәгесә: окисланыуға һиҙгер металлопептид эше өсөн, ирекле тиол составын һәм окисланыу профилен сығарыу критерийҙары булараҡ күрһәтегеҙ, тик ВЭЖХ таҙалыҡ һәм масса тикшерергә түгел. Бындай спецификациялар артында аналитик принциптар 1990 йылда һалынған принциптар менән бер үк. I С2.(R2.), үҙенсәлекте дауалай, таҙалыҡ һәм анализ үҙ-ара алмаштырғыс түгел, ә айырым эшмәкәрлек үҙенсәлектәре булараҡ.
Металл менән эш итеү һәм кислородҡа һиҙгер эш ағымы
Нимә өйрәнеү отчеттары аныҡ һәм тора күсермәһе теүәл .. Бөтә пептид өлгөләре анаэроб шарттарҙа Coy йомшаҡ яҡлы бирсәткәләр йәшникендә әҙерләнгән .. Пептид газһыҙландырылған һыуҙа эретелгән 10 мМ N-этил морфолин (ТҮГЕЛ) рН-да буфер 8.0, төҫһөҙ биреү 0.76 мМ апо-пептид запасы, был иретелгән һәм ирекле тиолдар өсөн раҫланған Эллман анализы. Бер эквиваленты CoCl2·6H2O, бер үк буферҙа бер үк рН-да иретелә, буферлаштырылған пептидҡа өҫтәлгән.
Ҡағыҙҙан түгел, ә координация химияһынан нимә килеп сыға, был проектлау фекерләүе тип әйтергә лайыҡ. Ҡушыу тәртибе һәм металл-пептид нисбәте билдәләй, тип тәғәйенләнгән 1:1 ҡатмарлы формалар йәки ҡатнашма эшләй; был ни өсөн титрлау үткәрелгән, ә фаразланған. Буфер һайлау мөһим, сөнки координациялаусы буферҙар металл өсөн көрәшә, һәм НЭМ координацияланмаған морфолин буферы булараҡ һайланған. Ә пептид-тик яуым-төшөм һауаға эләгеү тигәнде аңлата дисульфид барлыҡҡа килтереүҙең конкурент юлы, был пептидты иретмәнән алып ташлау, ул кобальт бәйләй ала алдынан — юғалтыу каналы, масштабтар менән эш итеү ваҡыты .. Панкреатик полипептид
Намыҫлы арауыҡ: Ҡағыҙ металл нисбәтен системалы оптимизациялау тураһында хәбәр итмәй, ҡушыу тәртибе йәки буфер үҙенсәлеге. Уҡыусы масштаблау был ысулды киңәйтә, уны күсермәү, һәм был үҙгәртеүселәрҙең һәр береһен универсаль талап түгел, ә үҙ системаһында раҫлау өсөн нәмә тип ҡарарға тейеш.
Ниндәй Р&D ҡурғаш тейеш һорау алдынан файҙаланыуға тапшырыу окисланыу-һиҙгер металлопептид
Түбәндәге һорауҙар һатып алынған металлопептид тәжрибәне хуплаймы-юҡмы икәнлеген хәл итә.. Һәр береһе спецификация әңгәмәлә яуап бирә.
Эҙмә-эҙлеклелек һәм версия. Теүәл эҙмә-эҙлеклелек — шул иҫәптән N-терминаль ацетил һәм теләһә ниндәй стандарт булмаған ҡалдыҡтар — версия-контроль яҙма булараҡ теркәлгән ., һәм таныҡлыҡта был яҙылғанмы? Үҙгәрмәй торған версия эҙе булмаған эҙмә-эҙлеклелекте мөхәррирләү ҡабатланмаған металлопептид тәжрибәһенең иң таралған сәбәбе булып тора ..
Цистеин статусы. Ниндәй ирекле тиол составы сығарыу ваҡытында, ниндәй ысул менән?, һәм ниндәй окисланыу төрҙәре сиктәр булараҡ күрһәтелә? Был һорау өйрәнеү’үҙ эшкәртергә-окисланыу күҙәтеү яһай, һөйләшеүҙәр булмаған .. Ацетил гексапептид-1 етештереүсе
Шәхсиәт. Бер масса үлсәүҙән тыш ортогональ раҫлау бармы, һәм масс-спектрометрия кислород аддукттарын асыҡлаймы? Айырып ала алмаған ысул . +16 Да ата-әсәнән окисланыу профиле тураһында хәбәр итә алмай.
Ҡәнәғәт. Таҙа пептид содержаниеһы айырым хәбәр ителә ВЭЖХ таҙалыҡ, һәм ҡаршы ион формаһы әйтелгән? Бәйләүсе титрлауҙа стехиометрия беренсегә бәйле.; буфер тәртибе һәм металл конкуренцияһы икенсеһенә бәйле булыуы мөмкин.
Ҡулланыу. Материал анаэроб тергеҙеүҙе хуплаусы форма һәм ҡаплауҙа биреләме?, һәм документацияла шулай яҙылғанмы? Лиофилизацияланған порошок уңайлы, әммә тергеҙеү этабы - кислород инеү урыны.
Аналитик пакет. Сеймал хроматограммалар һәм спектрҙар ысул идентификаторҙары менән тәьмин ителәме — бағана, градиент, тулҡын оҙонлоғо, масса диапазоны — йыйнаҡ таблица түгел? Һөҙөмтә дөрөҫ булмағанда йыйнаҡ таблицаны ҡабаттан тикшереп булмай.
Мизан. Әгәр модель миллиграммдарҙан ҙурыраҡ партияларға тиклем тамамлай, Ҡайһы бер осраҡта был нигеҙ бармы, окисланыу профилен тотоу өсөн көтөү? Окисланыу-һиҙгер эҙмә-эҙлеклелек тап ҡайҙа процесы үҙгәрештәре күрһәтә беренсе.
Тәьмин итеүсе яуап бирә алмаған цистеин-статус һорау һеҙгә нимәлер тураһында һөйләй анализ мөмкинлектәре артында сертификат .. Был исемлектәге иң фәһемле яуаптың берҙән-бере.
Модель ҡайҙа туҡтай
Пептид фермент түгел .. Уға β-подблок етешмәй, активатор аҡһымы, икенсе координация сфераһы һәм субъединицаларҙы алмаштырыусы өлгөрөү юлы. Ғилми эштең туған системаһы менән сағыштырыу аналогияһы буйынса спин хәле һәм лигандтарҙы үҙгәртеү, каталитик эшмәкәрлек буйынса түгел — бында нитрил гидрацияһы үлсәнмәгән.
Был системала металлдың лигандтар менән окисланыу тәртибе хәл ителмәй ҡала, авторҙар билдәләүенсә. Бәйләү константаһы — ҡәтғи субмикромоляр билдәләү мөмкинлеген бирмәгән шарттарҙа үлсәнә торған күренешле ҡиммәт. ДФТ моделдәре ҡыҫҡартылған һәм континуум-солватланған. Ә окисланыу химияһы күҙәтелгән, нимә була айырымланған мотив буфер — тураһында белдереүҙе мотив’s эске реактивлыҡ ., күҙәнәк эсендәге өлгөрөү эҙмә-эҙлеге тураһында дәғүә түгел.
Быларҙың береһе лә һөҙөмтәне көсһөҙләндермәй .. Ул һөҙөмтәнең нимәне хуплауын билдәләй: тип, һаҡланған эҙмә-эҙлеклелек яңғыҙ етерлек химик мәғлүмәт йөрөтә, бәйләү өсөн Co .(II) һәм диоксиген тәьҫирендә металл һәм цистеиндың парлы окисланыуын үтергә.
Һығымта
Һигеҙ ҡалдыҡлы пептид мөһим, сөнки ул хәл ителмәгән өлгөрөү һорауын үлсәүле үҙгәртеүселәр йыйылмаһына әйләндерә — координация һаны ., спин хәле, кислород һаны, ирекле-тиол статусы — һәр техникаһы менән, был тураһында хәбәр итә һәм документлаштырылған һуҡыр нөктә. Һаҡланған мотивтың ғына Co-ны бәйләүе тураһында асыҡлау.(II) һәм һауаға эләгеүҙә металл һәм цистеиндың парлы окисланыуын кисерә эҙмә-эҙлеклелек тураһында белдереүҙең эске химик мәғлүмәте ..
Был тик ышаныслы өлгө кеүек’ эҙмә-эҙлеклелек тоғролоҡ ., окисланыу торошо һәм аналитик документация. Был төр модель буйынса төҙөлгән командалар өсөн, киләһе аҙым-был спецификация һөйләшеү түгел, ә һатып алыу заказы: ирекле тиол составын билдәләү, окисланыу сиктәре, таҙа пептид содержаниеһы һәм сеймал мәғлүмәт пакеты алдынан беренсе миллиграмм эшләнә. МОЛ үҙгәрештәре ВЭЖХ һәм МС документацияһы менән ҡулланыусылар өсөн пептидтар тәьмин итә, опциональ пептид составын билдәләү һәм контрион анализы, һәм анаэроб-совместимый эшкәртергә һорау буйынса; был мөмкинлектәр өҫтәге спецификация һорауҙарына ҡағыла, һәм уҡыусылар тейеш үлсәү, тип коммерция ҡыҙыҡһыныу баһалау ваҡытында тәьмин итеүсе-һайлау етәкселеге.
МОЛ Үҙгәрештәр — пептид фән R .&D ойоштороу һәм ҡулланыусылар өсөн пептидтар һәм аналитик тикшереү хеҙмәттәре менән тәьмин итеү. Уҡыусылар был коммерция ҡыҙыҡһыныуын үлсәргә тейеш, был мәҡәләлә тәьмин итеүсе-һайлау йүнәлешен баһалағанда.
Төп сығанаҡ: Тәүге кобальт металлопептидын өйрәнеү.
