Ke Hobane'ng ha Scaffold e le Tlhaloso
"Peptide ea moqapi" ha se hangata e leng khoele e bonolo. Lihlopha tse sebetsang tse laolang mocha le lingoliloeng tsa CNS li batla ka morero ka morero.
Li-block tsa ion-channel tse nkiloeng tlhahong hangata ke chefo e nang le disulfide e ngata. Li-peptide tsa Scorpion α-KTx, ka mohlala, tšoara lemeno le kopaneng le libonto tse tharo kapa tse nne tsa disulfide, mme moralo o thata oa cysteine ke oona o ba lumellang hore ba kene ka har'a pore ea potassium-channel e nang le khethollo e nyenyane.. Hlahisa moralo oo ka maiketsetso, 'me cysteine e 'ngoe le e' ngoe e fetoha bothata ba regioselectivity: Li-cysteine tse tšeletseng li ka kopana ho ea ho li-isomer tsa disulfide tse ka bang leshome le metso e mehlano, 'me ke tlhophiso e le' ngoe feela e kopanyang sebopeho se sebetsang.
Bakhethoa ba Neuroprotective ba lula pheletsong e 'ngoe empa ba phahamisa matšoenyeho a setšoantšo sa seipone. Tatelano ea tsona e sebetsang hangata e khuts'oane ebile e na le protease-sensitive, kahoo lihlopha li fihlella k'hemistri ea mokokotlo - cyclization le stapling ke litsela tse sebetsang ka ho fetisisa tsa ho notlela conformation e sebetsang le ho hanela ho senyeha, joalo ka ha mosebetsi oa nerinetide le li-peptide tse amanang le CNS li bontša. Theko ea maiketsetso ke ea sebele: macrocyclization kapa hydrocarbon staple e eketsa mehato ea ho arabela, e theha baahi ba bacha ba litšila, mme e batla hore o netefatse foromo e koetsoeng, eseng feela selelekela sa mola.
Se boleloang ke sena bakeng sa motsoako oa moetlo se otlolohile. Peptide ha e hlalosoe ka tatellano ea eona ea mantlha feela empa ka lemeno le reriloeng, cysteine topology ea eona, Li-Peptide tsa Synthetic sebaka sa eona sa cyclization, le li-tag tseo e li jereng. E 'ngoe le e' ngoe ea tsona ke qeto eo u lokelang ho e beha ka bokhutšoane ba motsoako pele ho kopano e le 'ngoe.
Aggregation ke mokhoa oa pele oa ho hloleha
Ha ho thepa ea peptide e senyang merero e mengata pele ho ho kopanya. Nakong ea kopano ea Fmoc solid-phase, ho hola liketane tse nang le hydrophobic kapa β-sheet-prone self-associate ka intermolecular hydrogen bonding ka kotloloho holim'a resin.. Ho putlama hoo ha on-bead ho thibela phihlello ea li-amino acid tse kenang, e hlahisa maqhama a sa fellang, 'me e ngola ho fokotsa le ho hlakola litšila ka tatellano pele tlhoekiso e qala.
Hona joale mochine o tsebahala hantle. Mosebetsi oa morao-rao ho Nature Chemistry o tiisa hore sebopeho sa amino acid se khanna ho kopanya nakong ea peptide synthesis., e bonts'a hore tatellano ka boeona - eseng bolelele ba eona feela - e laola hore na ketane e sirelelitsoeng e phutha sebopeho sa bobeli se thibelang tšehetso.. Sena se lumellana le histori e telele ea lipatlisiso mabapi le seo ho thoeng ke tatellano e thata,” eo lebala le latela sebopeho sa on-resin β-sheet e sitisang ho kopanya le ho sireletsa.
Lipontšo tse peli tse sebetsang li bolela esale pele mathata pele ho likepe tse latellanang:
-
Maqhubu a hydrophobic a kopaneng e ruileng Val, Ka, Leu, le Phe. Tsena ke li-driver tsa khale tsa ho putlama ha resin.
-
Chelete e batlang e sa nke lehlakore. Ntle le Coulombic repulsion ho tšoara liketane ka thoko ka tharollo, likhokahano tsa hydrophobic li laola 'me peptide e theoha kapa li-gel nakong ea ho qhekella le ho buffer ea assay..
Hobane channel-blocker le neuroprotective scaffolds lean hydrophobic mme hangata li sebetsa haufi le sebaka sa tsona sa isoelectric, kotsi ea bona ea ho bokellana ke ea sebopeho, eseng ka tšohanyetso. Ho e laola - ka ho kenya pseudoproline, solubilizing tags, tshireletso ya mokokotlo, ho kenya resin e tlase, kapa microwave-assisted coupling - ke karolo ea tsebo e behiloeng eo molekane oa motsoako a tlamehang ho e tlisa, eseng mohala oa litšebeletso tse akaretsang. Taba ea moreki ke ho tšoaea kotsi esale pele le ho qobella mofani oa thepa ho bolela hore na e tla laoloa joang.
Ho ngola le ho Fetola: Tag e 'ngoe le e' ngoe ke Qeto ea Moralo
Hoo e ka bang peptide e 'ngoe le e' ngoe e ikemiselitseng ho etsa lipatlisiso e qetella e nkile ntho e itseng: seqha sa biotin bakeng sa ho hapa, fluorophore bakeng sa ho nka litšoantšo kapa ho tlama, CPP bakeng sa ho amoheloa, PEG kapa lipid bakeng sa botsitso. Hangata leibole e nkuoa e le mohopolo o mocha. Ha se - ke molek'hule ea bobeli e hlomathiselelitsoeng ho ea pele.
Li-labels li fetola boitšoaro ka mokhoa o lekanyelitsoeng. A 2024 boithuto bo fumane hore ho ngola ha fluorescent ho fetotse peptide-protein dissociation constants ka tatellano ya boholo., ka phello e itšetlehileng ka bobeli fluorophore le molekane ea tlamang. Lidae tse nang le Hydrophobic le tse qosoang ke litlokotsebe tse mpe ka ho fetisisa hobane li fetola aggregation le adsorption e sa tobang.. Biotinylation e nyane empa e ntse e ferekanya molek'hule, ho eketsa hydrophobicity le ho fokotsa tefiso ka mekhoa e fetolang tsela eo peptide e itšoarang ka eona kholumong ea LC-MS le litekong tsa ho hapa..
Melao e latelang e fetisetsoa ho scaffold efe kapa efe e hlahang ho channel-to-CNS spectrum:
-
Boloka pharmacophore e hloekile. Beha tag sebakeng sa ho qetela se pepesitsoeng ka solvent kapa masalla a tsejoang hore ha a ame sepheo.
-
Arola leibole ho tsoa ho bioactive core e nang le spacer joalo ka aminocaproic acid (Ahhh) kapa sehokelo se sekgutshwane sa PEG ha di-sterics di bohlokwa.
-
Lekola libaka tse fetang bonngoe ha epitope e tlamang e sa tsitsa - peptide e feto-fetohang kapa e sa sebetseng hantle e ka mamella dae sebakeng se le seng eseng se seng..
-
Hlalosa mohaho o ngotsoeng e le molek'hule ea oona, ha ho mohla e le moemeli ea khutsitseng bakeng sa peptide e sa ngolisoang. Netefatsa kamano le ts'ebetso ea mefuta ka bobeli.
Bakeng sa li-scaffolds tse nang le disulfide tse ngata kapa tse tsamaeang ka libaesekele ho na le tšitiso e eketsehileng: ho beha li-label ha hoa tlameha ho sitisa k'hemistri ea ho mena kapa ea cyclization, kahoo li-handles tse khethehileng tsa sebaka (mohlala, lysine kapa cysteine e sirelelitsoeng) hangata li kenngoa holim'a resin pele ho ts'ireletso ea ho qetela.
Bohloeki Ke Qeto ea Kopo, Eseng Nomoro
Bohloeki boo u bo kopang bo lokela ho latela hore na tlhahlobo e hlile e hloka eng, mme "phahameng" ha se tlhaloso. Melemo ea bohlokoa e thehiloe hantle ho bafani ba thepa le lingoliloeng tsa tekheniki:
-
≥95% bohloeki ba HPLC e tšehetsa litlhahlobo tse ngata tsa in vitro bioassays, mosebetsi oa antibody, le lithuto tsa semi-quantitative.
-
≥98% ke sebaka se sebetsang bakeng sa palo, cell-based, le liteko tsa karabelo ea lethal dose moo a 2% motsoako oa litšila o ka fetola ho bala.
-
>98-99% e boloketsoe mosebetsi o bobebe oa ho sebetsa le bakeng sa lithuto tse lebisitsoeng ho likopo tsa sebopeho sa boemo ba phatlalatso.
Moo li-channel le neuro scaffolds li thatafatsang sena ho bonolo: peptide ea baesekele kapa stapled e hloekisitsoeng ho 98% bohloeki ba mela ha bo fele haeba karoloana e utloahalang e sa koalehe ka mokhoa o nepahetseng oa cyclic. Lintlha tse amehang tsa puree li tlameha ho kenyelletsa tse mennoeng hantle, mefuta ea libaesekele hantle, eseng palo e kopaneng e li kopanyang. Ke ka lebaka leo bareki ba nang le phihlelo ba botsang bafani ba thepa hore na bohloeki bo hlalosoa joang ka mokhoa o mong le o mong 'me ba tsitlella hore Setifikeiti sa Analysis se tlalehe sebopeho se reriloeng..
Tlhokahalo e tlase ea metsi e bohlokoa ka ho lekana. Bakeng sa litlhahlobo tse thehiloeng ho lisele, ho hloeka ka bohona ha ho sebetsane le sterility kapa boima ba endotoxin, ke ka lebaka leo litsamaiso tsa boleng li khethollang bohloeki ba chromatographic ho tloha ho likokoana-hloko le pyrogen content. Peptide e ka ba joalo 99% e hloekile ka HPLC mme e ntse e na le lipopolysaccharide e senyang tlhahlobo e hlokolosi. Hlalosa sete e felletseng ea litšoaneleho tsa boleng tseo u li hlokang, eseng peresente feela.
Assay-Ready Means Characterized, Eseng Feela Hloekileng
Poleloana "assay-ready" ke moo likamano tse ngata tsa barekisi li tšoarellang kapa li senyehang. Peptide e loketse baeloji e tšepahalang feela haeba boitsebiso ba eona, tatelano, mme dikahare di netefaditswe, eseng feela haeba tlhoro ea eona ea mantlha ea HPLC e shebahala e hloekile.
Pakete e ka tšeptjoang e fokolang bakeng sa ts'ebeliso ea ts'ebetso e kenyelletsa tlhahlobo ea RP-HPLC bakeng sa bohloeki ba sebaka se phahameng, mass spectrometry ho netefatsa boima ba molek'hule bo sa fetoheng, le — moo tatellano ea botšepehi kapa tokiso e tlamehang ho pakoa—’mapa oa MS/MS oa peptide. Bakeng sa mosebetsi o mongata, tlhahlobo ea amino acid e lokela ho sebelisoa ho lokisa litaba tsa 'nete tsa peptide, hobane ho theola boima ba 'mele ho e-na le li-peptide tsa' nete ke mohloli o khutsitseng oa phoso o hasang mahloriso a mang le a mang.. Tsena ke likarolo tataiso e shebaneng le liteko e khothaletsa ho kopanya Setifikeiti sa Tlhahlobo.
Ho na le lekhalo le ngotsoeng hantle leo tšimo e neng e lieha ho e koala. A 2019 tlhahlobo e hlokometse hore li-peptide tsa maiketsetso tsa masala a ka bang 20-100 hangata ha li na sebopeho sa ho phutha ha tsona le sebopeho sa mahlakore a mararo., le ha bohloeki le tatelano di tlalehoa. Bakeng sa blocker ea channel e nang le disulfide e ruileng kapa moemeli oa neuroprotective oa cyclized, ho netefatsa lemeno le nepahetseng le disulfide kapa cyclization topology ho bohlokoa joalo ka bohloeki - isomer e fosahetseng kapa selelekela se sa koaloang se ka khutsa kapa sa sebetsa ka tsela e thetsang.. Ho hlalosa mekhoa ena ea ho amohela ka pele, le ho botsa hore na ke mekhoa efe ea orthogonal (co-elution, 'Mapa oa MS/MS, CD, kapa liteko tsa conformational) e tla sebelisoa ho paka boemo bo reriloeng, ke potso e le 'ngoe e phahameng ka ho fetisisa eo moreki a ka e botsang.
Ho fumana Synthesis e Tloaelehileng ea Peptide bakeng sa li-scaffolds tse thata
Se kopanyang tsena tsohle ke hore mokhoa o ikhethileng oa peptide synthesis ha se taba ea ho sutumelletsa tatellano e le 'ngoe e ntle moleng o tloaelehileng.. E mabapi le mokhoa oa ho tsamaisana le scaffold - ho laola ho bokellana ka tatellano e thata ea hydrophobic., ho kenya li-labels tse ikhethileng sebakeng sa marang-rang ntle le ho roba moralo oa disulfide, ho palama baesekele le stapling ntle le ho siea lihlahisoa tse koetsoeng ka mokhoa o itseng, le ho tšehetsa tleleime e 'ngoe le e 'ngoe ka sehlopha se le seng sa HPLC, boima, nyopa, le lintlha tsa litaba. Ha bokhoni boo bo le teng, phetoho ea channel-to-neuroprotective e fetoha bothata ba k'hemistri ho e-na le ho becha ho mofani oa thepa. Tlhahiso ea Peptide
Bakeng sa lihlopha tse hahang li-scaffolds tsena tse boima, MOL E fetola sethala sa peptide synthesis ea tloaelo e tšehetsa motsoako oa mekhoa e joalo ea litlhoko tsa lipatlisiso - mokhahlelo o tiileng, metsi, le litsela tsa ho belisoa ha likokoana-hloko, fedile 300 phetoho ea lik'hemik'hale ho kenyeletsa cyclic, stapled, biotinylated, le li-peptide tse ngotsoeng, bohloeki ho fihlela 99%, le Sehlopha 100 tlhahiso e sa sebetseng ka HPLC le litokomane tse ikhethang ho tloha ho milligram ho isa ho kilogram. Ho buisana ka tatelano ya hao, lemeno la yona le reriloeng, 'me litlhoko tsa eona tsa tlhahlobo ka pele ke mokhoa o potlakileng oa ho fetola peptide ea moqapi ho tloha setšoantšong hore e be sehlopha seo u ka se tšepang lab..
