ለ peptide ሙከራዎች ስኬታማነት ተገቢው የመሟሟት ዘዴ አስፈላጊ ነገር ነው. ትክክል ያልሆነ መሟሟት የ peptides መጥፋት እና የሙከራው ውድቀት ያስከትላል. ቢሆንም, ትክክለኛውን የመፍታት ዘዴ ማግኘት አንዳንድ ጊዜ በጣም ፈታኝ ነው።. የሚከተሉት የ MOL ለውጦች ሁለቱ ቴክኒካል ቡድኖች ያቀረቡት የመፍቻ ዘዴዎች ናቸው።. ዘዴ
MOL የቴክኖሎጂ ቡድን መፍቻ መመሪያ
በፔፕታይድ መሟሟት ውስጥ ዋናው ችግር የሁለተኛ ደረጃ መዋቅር መፈጠር ነው.
ምንም እንኳን የሃይድሮፎቢክ peptide ሰንሰለቶች ሁለተኛ ደረጃ መዋቅሮች መፈጠር የበለጠ ግልጽ ነው, ከአጭር የፔፕታይድ ሰንሰለቶች በስተቀር, ይህ ክስተት በሁሉም የ peptide ሰንሰለቶች ማለት ይቻላል ይከሰታል, የፖላሪቲ ምንም ይሁን ምን. ስለዚህ, የ polypeptides ን የመፍታት የመጀመሪያው መርህ ንጹህ የተጣራ ውሃ ወይም ዲዮኒዝድ ውሃ መጠቀም ነው (ሁኔታዎች ከተፈቀዱ ወይም ከኦክስጅን ነፃ የሆነ ውሃ).
የፔፕታይድ መፍትሄ የባክቴሪያ መበላሸት ሊያጋጥመው ይችላል. ይህንን ክስተት ለማስወገድ, peptide በንፁህ ፈሳሽ ውሃ ውስጥ መሟሟት አለበት, ወይም የቀዳዳ መጠን ካለው የማጣሪያ ሽፋን ጋር ተጣርቶ 0.45 ወይም 0.2 μm ለማምከን. ሳይሲስ የያዙ ፖሊፔፕቲዶች, ተገናኘን።, እና Trp በተለይ ለኦክሳይድ የተጋለጡ ናቸው, ስለዚህ ኦክስጅን በሌለው ውሃ ውስጥ መሟሟት አለባቸው. ከኦክስጅን ነፃ የሆነ ውሃ በተቀነሰ ግፊት ምክንያት የማይነቃነቁ ጋዞችን በመርፌ በማፍሰስ ማግኘት ይቻላል። (ናይትሮጅን, ሂሊየም, እና አርጎን).
peptide በንጹህ ውሃ ውስጥ የማይሟሟ ከሆነ, የአልትራሳውንድ ህክምና ቅንጦቹን ለመስበር እና መሟሟትን ለመጨመር ይረዳል. ማስታወሻ: የ Ultrasonic ህክምና መፍትሄውን ማሞቅ እና የ peptide መበላሸት ያስከትላል.
peptide ብዙ መሰረታዊ አሚኖ አሲዶችን ከያዘ, 1 ~ 10% አሴቲክ አሲድ የውሃ መፍትሄን ይጠቀሙ; በጣም ሃይድሮፎቢክ peptides, መጠቀም 50% አሴቲክ አሲድ.
ፖሊፔፕታይድ ከፍተኛ መጠን ያለው አሲዳማ አሚኖ አሲዶች ከያዘ, በ a ውስጥ ሊሟሟ ይችላል 1 ወደ 10% የአሞኒያ መፍትሄ ወይም ተለዋዋጭ የአልካላይን ቋት እንደ ኤቲል ሞርፊን አሲቴት ወይም ባይካርቦኔት. የፒኤች ዋጋ ከ chromatography በፊት መስተካከል አለበት.
peptide በአምዱ ላይ የሚጫን ከሆነ, የኦርጋኒክ መሟሟት መጠን በጣም ትንሽ መሆን አለበት, አለበለዚያ የማቆያ ጊዜው በከፍተኛ ሁኔታ ይጎዳል.
እንደ ቫል ያሉ ጥሩ መዓዛ ያላቸው የሃይድሮካርቦን የጎን ሰንሰለቶች ስላሉት ፖሊፔፕታይድ ከፍተኛ ሃይድሮፎቢክ ከሆነ, ልኡ, ተገናኘን።, ፒ, ቲር, አላ, ወዘተ., ወይም ገለልተኛ peptide ነው, እንደ ዲኤምኤፍ ወይም ዲኤምኤስኦ ያሉ የሜምፕል ዲናተርተሮችን መጠቀም ፖሊፔፕቲድ እንዲሟሟት ይረዳል:
ሀ. ከፍተኛ-ማጎሪያ ሽፋን ዲናተርተሮች የሁለተኛ ደረጃ መዋቅሩን በማጥፋት ፖሊፔፕታይድ እንዲሟሟት ይረዳሉ.
ለ. Membrane denaturants የ peptide ትንተና መፍትሄዎችን ለማዘጋጀት ተስማሚ ናቸው, ነገር ግን በባዮሎጂካል ተግባራቸው ላይ ምርምር ላይ ጣልቃ ሊገባ ይችላል.
ሐ. ዲኤምኤፍ በጣም ጥሩው ዴንታራንት ነው። (ከፍተኛው ትኩረት ሊደርስ ይችላል 30%), እና peptide እስኪፈርስ ድረስ ጠብታ አቅጣጫ ይጨመራል.
መ. በተገላቢጦሽ-ደረጃ ክሮሞግራፊ ወቅት, ዲኤምኤፍ ከኤሉኤንት የፊት ጫፍ ጋር አብሮ ይወጣል. እንደ መርፌው መጠን ይወሰናል, ከፍተኛ ዋጋ በጣም ከፍተኛ ሊሆን ይችላል. ብዙ የዲኤምኤፍ ኢሌትስ ከጨመረ በኋላ አብዛኛዎቹ peptides በጥቂት ደቂቃዎች ውስጥ ሊጠፉ ይችላሉ።. የፔፕታይድ ሰንሰለቱ ትንሽ ከሆነ እና በጣም ቀደም ብሎ ይወጣል, የ peptide መጠን ይቀንሳል.
MOL የቴክኒክ ቡድን II መፍቻ መመሪያን ይለውጣል
አሚኖ አሲዶች ገለልተኛ መሆናቸውን እንዴት እንደሚለይ, አሲድ ወይም አልካላይን, እና የመፍቻውን ዘዴ ያሰሉ:
1. አስፓርቲክ አሲድ አስፕን ጨምሮ እያንዳንዱን አሲዳማ አሚኖ አሲድ በፖሊፔፕታይድ ቅደም ተከተል መድብ (ዲ), ግሉታሚክ አሲድ ግሉ (ኢ) እና C-terminal carboxyl-COOH እንደ -1; እያንዳንዱ መሠረታዊ አሚኖ አሲድ arginine Arg ን ጨምሮ ( አር), ሊሲን ሊስ (ኬ), histidine ሂስ (ኤች) እና N-terminal አሚኖ-ኤንኤች 2 እሴት ተሰጥቷቸዋል +1; ገለልተኛ አሚኖ አሲዶች ናቸው 0. በዚህ መሰረት, የጠቅላላው የ polypeptide ዋጋ ይሰላል, እና ውጤቱ አዎንታዊ ነው Peptides አሉታዊ ነጥብ ያላቸው መሰረታዊ peptides ይባላሉ, አሉታዊ ውጤት ያላቸው አሲዳማ peptides ይባላሉ, እና ዜሮ ነጥብ ያላቸው ገለልተኛ peptides ይባላሉ.
2. አልካላይን peptide ከሆነ, try to dissolve it with water first; if it cannot be dissolved, try to use 10% – 30% አሴቲክ አሲድ; if the peptide is still insoluble, try to use pure acetic acid and trifluoroacetic acid TFA (<50 μl) to dissolve it, and then Dilute the peptide solution to the desired concentration.
3. If it is an acidic peptide, try to dissolve it with water first; if it cannot be dissolved with water, try to use 13% ammonia water (ቪ/ቪ) to dissolve it, and dilute the peptide solution to the required concentration. If the peptide sequence contains cysteine Cys (ሲ), it cannot be dissolved in alkaline solution. Please try the methods below.
4. Neutral peptides are usually dissolved in organic solvents. አንደኛ, try to use acetonitrile (አሴቶኒትሪል), or methanol (methanol) or isopropanol (isopropanol) to dissolve; በጣም ሃይድሮፎቢክ peptides, first dissolve with a small amount of dimethyl sulfoxide (DMSO) and dilute with water to Required concentration; if the peptide sequence contains cysteine Cys (ሲ), use dimethylformamide (ዲኤምኤፍ) ወይም N-methylpyrrolidone (NMP) ለመሟሟት. ለመደመር የተጋለጡ ለ peptides, መጀመሪያ 6M ጓኒዲን · HCl ወይም 8M ዩሪያ ይጨምሩ (ዩሪያ) እነሱን ለማሟሟት, እና ከዚያም ወደ አስፈላጊው ትኩረት ያርቁዋቸው.
በምሳሌ አስረዳ:
1. ማከማቻ እና ቀጣይ አጠቃቀምን ለማመቻቸት, የፔፕታይድ ንጥረ ነገርን ወደ አካባቢ መጠን እንዲቀልጥ ይመከራል 1-2 mg/ml.
2. የተለመደው የፔፕታይድ በረዶ-ደረቅ ዱቄት በ -20 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ከአንድ አመት በላይ ሊከማች ይችላል. ለተሟሟት peptides, በ -20 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለማከማቸት እና ለማከማቸት ይመከራል; የ peptide ቅደም ተከተል methionine Met ከያዘ (ኤም), ሳይስቴይን አሲድ ሳይሲስ (ሲ) ወይም ታይሮሲን ቲር (ዋይ) ኦክሳይድን ለመከላከል ከኦክስጅን ነፃ በሆነ አካባቢ ውስጥ እንዲከማች ይመከራል.
የተያያዘ የአሚኖ አሲድ ዝርዝር:
1.ገለልተኛ አሚኖ አሲዶች: ግሊሲን, አላኒን, leucine, isoleucine, ቫሊን, ሳይስቴይን, ሜቲዮኒን, threonine, ሴሪን, ፌኒላላኒን, ታይሮሲን, tryptophan አሲድ, ፕሮላይን, አስፓራጂን እና ግሉታሚን
ኤፍይበላሉ: የዚህ አይነት የአሚኖ አሲድ ሞለኪውል አንድ የአሚኖ ቡድን እና አንድ የካርቦክሲል ቡድን ብቻ ይዟል
2.አሲድ አሚኖ አሲዶች: ግሉታሚክ አሲድ, አስፓርቲክ አሲድ
ባህሪያት: የዚህ አይነት የአሚኖ አሲድ ሞለኪውል አንድ የአሚኖ ቡድን እና ሁለት የካርቦክሲል ቡድኖችን ይዟል
3.መሰረታዊ አሚኖ አሲዶች: ላይሲን, arginine, ሂስቲዲን
ባህሪያት: የዚህ ዓይነቱ አሚኖ አሲድ በሞለኪውል ውስጥ የዲያሚኖካርቦክስ ቡድን ይዟል; histidine የናይትሮጅን ቀለበት አለው እና ደካማ አልካላይን ነው, እና እንዲሁም መሰረታዊ አሚኖ አሲድ ነው.
