Une méthode de dissolution appropriée est un facteur important pour le succès des expériences peptidiques. Une dissolution incorrecte entraînera la perte de peptides et l'échec de l'expérience. Cependant, trouver la méthode de dissolution idéale est parfois assez difficile. Voici les méthodes de dissolution proposées par les deux groupes techniques de MOL Changes. méthode
Guide de dissolution du groupe technologique MOL Changes
Le principal problème de la dissolution des peptides est la formation d’une structure secondaire.
Bien que la formation de structures secondaires de chaînes peptidiques hydrophobes soit plus évidente, sauf pour les chaînes peptidiques les plus courtes, ce phénomène se produit dans presque toutes les chaînes peptidiques, quelle que soit la polarité. Donc, le premier principe de dissolution des polypeptides est d'utiliser de l'eau distillée stérile ou de l'eau désionisée (ou de l'eau sans oxygène si les conditions le permettent).
La solution peptidique peut subir une dégradation bactérienne. Pour éviter ce phénomène, le peptide doit être dissous dans de l'eau distillée stérile, ou filtré avec une membrane filtrante avec une taille de pores de 0.45 ou 0.2 μm pour la stérilisation. Polypeptides contenant Cys, Rencontré, et Trp sont particulièrement sensibles à l'oxydation, ils doivent donc être dissous dans de l'eau sans oxygène. L'eau sans oxygène peut être obtenue par dégazage sous pression réduite par injection de gaz inertes (azote, hélium, et de l'argon).
Si le peptide est insoluble dans l'eau pure, le traitement par ultrasons peut aider à briser les particules et à augmenter la solubilité. Note: Le traitement par ultrasons provoquera un échauffement de la solution et une dégradation du peptide.
Si le peptide contient plusieurs acides aminés basiques, utiliser une solution aqueuse d'acide acétique à 1 ~ 10 %; pour les peptides très hydrophobes, utiliser 50% acide acétique.
Si le polypeptide contient une grande quantité d'acides aminés acides, il peut être dissous dans un 1 à 10% solution d'ammoniaque ou un tampon alcalin volatil tel que l'acétate ou le bicarbonate d'éthylmorphine. La valeur du pH doit être ajustée avant la chromatographie.
Si le peptide doit être chargé sur la colonne, la quantité de solvant organique doit être très faible, sinon le temps de rétention sera sérieusement affecté.
Si le polypeptide est hautement hydrophobe car il contient des chaînes latérales d'hydrocarbures aromatiques telles que Val, Leu, Rencontré, Phé, Tyr, Hélas, etc., ou est un peptide neutre, l'utilisation de dénaturants membranaires tels que le DMF ou le DMSO peut aider à dissoudre le polypeptide:
un. Les dénaturants membranaires à haute concentration aident à dissoudre le polypeptide en détruisant sa structure secondaire.
b. Les dénaturants membranaires conviennent à la préparation de solutions d’analyse peptidique, mais peut interférer avec la recherche sur leur activité biologique.
c. Le DMF est le meilleur dénaturant (la concentration la plus élevée peut atteindre 30%), et est ajouté goutte à goutte jusqu'à ce que le peptide soit dissous.
d. Pendant la chromatographie en phase inversée, Le DMF s'écoulera avec le pic avant de l'éluant. En fonction du volume injecté, la valeur maximale peut être très élevée. La plupart des peptides peuvent être élués quelques minutes après l'élution d'une grande quantité de DMF.. Si la chaîne peptidique est petite et élue trop tôt, la quantité de peptide sera réduite.
MOL modifie le guide de dissolution du groupe technique II
Comment distinguer si les acides aminés sont neutres, acide ou alcalin, et calculer la méthode de dissolution:
1. Attribuez chaque acide aminé acide dans la séquence polypeptidique, y compris l'acide aspartique Asp (D), acide glutamique Glu (E) et carboxyl-COOH C-terminal comme -1; chaque acide aminé basique dont l'arginine Arg ( R.), lysine Lys (K), histidine Son (H) et l'amino-NH2 N-terminal se voient attribuer une valeur de +1; les acides aminés neutres sont 0. Basé sur ceci, la valeur du polypeptide entier est calculée, et le score est positif. Les peptides avec un score négatif sont appelés peptides basiques., ceux avec un score négatif sont appelés peptides acides, et ceux avec un score de zéro sont appelés peptides neutres.
2. Si c'est un peptide alcalin, essayez d'abord de le dissoudre avec de l'eau; s'il ne peut être dissous, essayez d'utiliser 10% – 30% acide acétique; si le peptide est encore insoluble, essayez d'utiliser de l'acide acétique pur et de l'acide trifluoroacétique TFA (<50 µl) pour le dissoudre, puis diluez la solution peptidique à la concentration souhaitée.
3. Si c'est un peptide acide, essayez d'abord de le dissoudre avec de l'eau; s'il ne peut pas être dissous avec de l'eau, essayez d'utiliser 13% eau ammoniaquée (v/v) pour le dissoudre, et diluez la solution peptidique à la concentration requise. Si la séquence peptidique contient de la cystéine Cys (C), il ne peut pas être dissous dans une solution alcaline. Veuillez essayer les méthodes ci-dessous.
4. Les peptides neutres sont généralement dissous dans des solvants organiques. D'abord, essayez d'utiliser de l'acétonitrile (acétonitrile), ou du méthanol (méthanol) ou isopropanol (isopropanol) dissoudre; pour les peptides très hydrophobes, dissoudre d’abord avec une petite quantité de diméthylsulfoxyde (DMSO) et diluer avec de l'eau jusqu'à la concentration requise; si la séquence peptidique contient de la cystéine Cys (C), utiliser du diméthylformamide (DMF) ou N-méthylpyrrolidone (NMP) pour dissolution. Pour les peptides sujets à l'agrégation, ajoutez d'abord 6M de guanidine·HCl ou 8M d'urée (Urée) pour les dissoudre, puis diluez-les à la concentration requise.
illustrer:
1. Afin de faciliter le stockage et l'utilisation ultérieure, il est recommandé de dissoudre le peptide à une concentration d'environ 1-2 mg/ml.
2. La poudre lyophilisée de peptide ordinaire peut être conservée à -20 °C pendant plus d'un an.. Pour les peptides dissous, il est recommandé d'aliquoter et de conserver à -20°C; si la séquence peptidique contient de la méthionine Met (M), cystéine Acide Cys (C) ou tyrosine Tyr (Oui) il est recommandé de le stocker dans un environnement sans oxygène pour éviter l'oxydation.
Liste d'acides aminés ci-jointe:
1.Acides aminés neutres: glycine, alanine, leucine, isoleucine, valine, cystéine, méthionine, thréonine, sérine, phénylalanine, tyrosine, Acide tryptophane, proline, asparagine et glutamine
Fmanger: Ce type de molécule d'acide aminé ne contient qu'un seul groupe amino et un groupe carboxyle.
2.Acides aminés acides: acide glutamique, acide aspartique
Caractéristiques: Ce type de molécule d'acide aminé contient un groupe amino et deux groupes carboxyle
3.Acides aminés basiques: lysine, arginine, histidine
Caractéristiques: Ce type d'acide aminé contient un groupe diaminocarboxyle dans sa molécule; l'histidine a un cycle azoté et est faiblement alcaline, et est également un acide aminé basique.
