적절한 용해 방법은 펩타이드 실험의 성공을 위한 중요한 요소입니다.. 부적절한 용해는 펩타이드의 손실 및 실험 실패의 원인이 됩니다.. 하지만, 이상적인 용해 방법을 찾는 것이 때로는 매우 어려운 일입니다.. MOL Changes의 두 기술 그룹이 제안하는 용해 방법은 다음과 같습니다.. 방법
MOL 변화 기술그룹 해산 안내
펩타이드 용해의 주요 문제점은 2차 구조의 형성입니다..
소수성 펩타이드 사슬의 2차 구조 형성이 더 분명하지만, 가장 짧은 펩타이드 사슬을 제외하고, 이 현상은 거의 모든 펩타이드 사슬에서 발생합니다., 극성에 관계없이. 그러므로, 폴리펩티드를 녹이는 첫 번째 원리는 멸균 증류수 또는 탈이온수를 사용하는 것입니다. (또는 조건이 허락한다면 무산소 물).
펩타이드 용액은 박테리아 분해를 겪을 수 있습니다.. 이런 현상을 방지하려면, 펩타이드는 멸균 증류수에 용해되어야 합니다., 또는 기공 크기가 다음과 같은 필터막으로 여과됩니다. 0.45 또는 0.2 멸균용 μm. Cys를 함유한 폴리펩티드, 만난, Trp는 특히 산화되기 쉽습니다., 그래서 산소가 없는 물에 녹여야 합니다.. 불활성 가스를 주입하여 감압하에 탈기하면 무산소수를 얻을 수 있습니다. (질소, 헬륨, 아르곤).
펩타이드가 순수한 물에 녹지 않는 경우, 초음파 처리는 입자를 분해하고 용해도를 높이는 데 도움이 될 수 있습니다.. 메모: 초음파 처리로 인해 용액이 가열되고 펩타이드가 분해됩니다..
펩타이드에 여러 개의 염기성 아미노산이 포함되어 있는 경우, 1~10% 아세트산 수용액을 사용; 매우 소수성인 펩타이드의 경우, 사용 50% 아세트산.
폴리펩티드에 산성 아미노산이 많이 포함되어 있는 경우, 그것은에 녹일 수 있습니다 1 에게 10% 암모니아 용액 또는 에틸 모르핀 아세테이트 또는 중탄산염과 같은 휘발성 알칼리 완충액. 크로마토그래피 전에 pH 값을 조정해야 합니다..
펩타이드를 컬럼에 로딩하려는 경우, 유기용매의 양이 매우 적어야 함, 그렇지 않으면 보존 시간이 심각한 영향을 받습니다..
폴리펩티드에 Val과 같은 방향족 탄화수소 측쇄가 포함되어 있어 소수성이 높은 경우, 레우, 만난, 페, 티르, 알라, 등., 아니면 중성 펩타이드인가요?, DMF 또는 DMSO와 같은 막 변성제를 사용하면 폴리펩티드를 용해하는 데 도움이 될 수 있습니다.:
에이. 고농도 막 변성제는 폴리펩티드의 2차 구조를 파괴하여 폴리펩티드의 용해를 돕습니다..
비. 막 변성제는 펩타이드 분석 용액 제조에 적합합니다., 그러나 생물학적 활동에 대한 연구를 방해할 수 있습니다..
기음. DMF는 최고의 변성제이다 (가장 높은 농도에 도달할 수 있습니다. 30%), 펩타이드가 용해될 때까지 한 방울씩 첨가합니다..
디. 역상 크로마토그래피 중, DMF는 용리액의 앞쪽 피크와 함께 흘러나옵니다.. 주입량에 따라, 피크 값이 매우 높을 수 있습니다.. 대부분의 펩타이드는 다량의 DMF가 용출된 후 몇 분 내에 용출될 수 있습니다.. 펩타이드 사슬이 작고 너무 일찍 용출되는 경우, 펩타이드의 양이 줄어들게 됩니다..
MOL 변경 기술 그룹 II 해산 가이드
아미노산이 중성인지 구별하는 방법, 산성 또는 알칼리성, 그리고 용해방법을 계산한다.:
1. 아스파르트산 Asp를 포함하는 폴리펩티드 서열의 각 산성 아미노산을 지정합니다. (디), 글루탐산 Glu (이자형) 및 C-말단 카르복실-COOH -1; 아르기닌 Arg를 포함한 각 기본 아미노산 ( 아르 자형), 라이신리스 (케이), 히스티딘 그의 (시간) N-말단 아미노-NH2에는 다음 값이 할당됩니다. +1; 중성 아미노산은 0. 이를 바탕으로, 전체 폴리펩티드의 값이 계산됩니다., 점수는 양성입니다. 점수가 음수인 펩타이드를 기본 펩타이드라고 합니다., 음수 점수를 받은 것을 산성 펩타이드라고 합니다., 점수가 0인 것을 중성 펩타이드라고 합니다..
2. 알칼리성 펩타이드인 경우, 먼저 물로 녹여보세요; 용해될 수 없는 경우, 사용해 보세요 10% – 30% 아세트산; 펩타이드가 여전히 불용성인 경우, 순수한 아세트산과 트리플루오로아세트산 TFA를 사용해 보십시오. (<50 μl) 그것을 녹이려고, 그런 다음 펩타이드 용액을 원하는 농도로 희석합니다..
3. 산성 펩타이드인 경우, 먼저 물로 녹여보세요; 물에 녹지 않는 경우, 사용해 보세요 13% 암모니아수 (v/v) 그것을 녹이려고, 펩타이드 용액을 필요한 농도로 희석합니다.. 펩타이드 서열에 시스테인 Cys가 포함되어 있는 경우 (기음), 알칼리성 용액에는 녹지 않는다.. 아래 방법을 시도해 보세요..
4. 중성 펩타이드는 일반적으로 유기용매에 용해됩니다.. 첫 번째, 아세토니트릴을 사용해 보세요 (아세토니트릴), 또는 메탄올 (메탄올) 또는 이소프로판올 (이소프로판올) 용해하다; 매우 소수성인 펩타이드의 경우, 먼저 소량의 디메틸설폭사이드를 넣어 녹입니다. (DMSO) 필요 농도까지 물로 희석합니다.; 펩타이드 서열에 시스테인 Cys가 포함되어 있는 경우 (기음), 디메틸포름아미드를 사용하세요 (DMF) 또는 N-메틸피롤리돈 (NMP) 해산을 위해. 응집되기 쉬운 펩타이드의 경우, 먼저 6M 구아니딘·HCl 또는 8M 요소를 추가합니다. (요소) 그들을 녹이려고, 그런 다음 필요한 농도로 희석하십시오..
설명하다:
1. 보관과 추후 사용을 용이하게 하기 위해, 펩타이드를 약 농도로 용해시키는 것이 좋습니다. 1-2 mg/ml.
2. 일반 펩타이드 동결건조 분말은 -20°C에서 1년 이상 보관 가능합니다.. 용해된 펩타이드의 경우, 분취하여 -20°C에 보관하는 것이 좋습니다.; 펩타이드 서열에 Met 메티오닌이 포함된 경우 (중), 시스테인산 Cys (기음) 또는 티로신 티르 (와이) 산화를 방지하기 위해 무산소 환경에 보관하는 것이 좋습니다..
첨부 아미노산 목록:
1.중성 아미노산: 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 시스테인, 메티오닌, 트레오닌, 세린, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판산, 프롤린, 아스파라긴과 글루타민
에프음식: 이 유형의 아미노산 분자는 단 하나의 아미노기와 하나의 카르복실기를 포함합니다.
2.산성 아미노산: 글루탐산, 아스파르트산
특징: 이 유형의 아미노산 분자는 하나의 아미노 그룹과 두 개의 카르복실 그룹을 포함합니다.
3.기본 아미노산: 라이신, 아르기닌, 히스티딘
특징: 이 유형의 아미노산은 분자 내에 디아미노카르복실기를 포함합니다.; 히스티딘은 질소고리를 가지고 있으며 약알칼리성이다., 그리고 염기성 아미노산이기도 하다..
