合适的溶出方法是肽实验成功的重要因素. 溶解不当会导致肽的损失，导致实验失败. 然而, 找到理想的溶解方法有时相当具有挑战性. 以下是MOL Changes两个技术组提出的溶解方法. 方法
MOL 改变技术集团解散指南
肽溶解的主要问题是二级结构的形成.
虽然疏水性肽链二级结构的形成比较明显, 除了最短的肽链, 这种现象几乎出现在所有肽链中, 不论极性. 所以, 溶解多肽的首要原则是使用无菌蒸馏水或去离子水 (或有条件的话无氧水).
肽溶液可能会遇到细菌降解. 为了避免这种现象, 肽应溶解在无菌蒸馏水中, 或用孔径为的滤膜过滤 0.45 或者 0.2 灭菌微米. 含Cys的多肽, 蛋氨酸, 和色氨酸特别容易被氧化, 所以它们应该溶解在无氧水中. 注入惰性气体减压脱气即可得到无氧水 (氮, 氦, 和氩气).
如果肽不溶于纯水, 超声波处理可以帮助破碎颗粒并增加溶解度. 笔记: 超声波处理会导致溶液加热和肽降解.
如果肽含有多个碱性氨基酸, 使用1~10%醋酸水溶液; 对于非常疏水的肽, 使用 50% 醋酸.
如果多肽含有大量酸性氨基酸, 它可以溶解在 1 到 10% 氨溶液或挥发性碱性缓冲液，例如吗啡乙酯或碳酸氢乙酯. 层析前必须调整pH值.
如果要将肽加载到柱上, 有机溶剂的用量必须很小, 否则会严重影响保留时间.
如果多肽由于含有芳香烃侧链（如 Val）而具有高度疏水性, 亮氨酸, 蛋氨酸, 苯丙氨酸, 提尔, 翼, ETC。, 或者是中性肽, 使用膜变性剂（例如 DMF 或 DMSO）可以帮助溶解多肽:
一个. 高浓度膜变性剂通过破坏其二级结构来帮助溶解多肽.
乙. 膜变性剂适用于制备肽分析溶液, 但可能会干扰对其生物活性的研究.
c. DMF是最好的变性剂 (最高浓度可达到 30%), 并逐滴添加直至肽溶解.
d. 反相色谱过程中, DMF将与洗脱液的前峰一起流出. 取决于注射量, 峰值可能非常高. 大量 DMF 洗脱后，大多数肽可在几分钟内洗脱. 如果肽链较小且洗脱过早, 肽的量将会减少.
MOL 更改技术组 II 溶出度指南
如何区分氨基酸是否中性, 酸性或碱性, 并计算溶出度方法:
1. 指定多肽序列中的每个酸性氨基酸，包括天冬氨酸 Asp (D), 谷氨酸Glu (乙) 和C端羧基-COOH为 -1; 包括精氨酸 Arg 在内的每种碱性氨基酸 ( 右), 赖氨酸Lys (K), 组氨酸 His (H) N 端氨基-NH2 的值为 +1; 中性氨基酸是 0. 基于此, 计算整个多肽的值, 得分为正 得分为负的肽称为碱性肽, 得分为负的称为酸性肽, 得分为零的称为中性肽.
2. 如果是碱性肽, 先尝试用水溶解它; 如果无法溶解, 尝试使用 10% – 30% 醋酸; 如果肽仍然不溶, 尝试使用纯乙酸和三氟乙酸TFA (<50 微升) 来溶解它, 然后将肽溶液稀释至所需浓度.
3. 如果是酸性肽, 先尝试用水溶解它; 如果不能与水溶解, 尝试使用 13% 氨水 (体积/体积) 来溶解它, 将肽溶液稀释至所需浓度. 如果肽序列含有半胱氨酸 Cys (C), 不溶于碱性溶液. 请尝试以下方法.
4. 中性肽通常溶解在有机溶剂中. 第一的, 尝试使用乙腈 (乙腈), 或甲醇 (甲醇) 或异丙醇 (异丙醇) 溶解; 对于非常疏水的肽, 先用少量二甲亚砜溶解 (二甲基亚砜) 并用水稀释至所需浓度; 如果肽序列含有半胱氨酸 Cys (C), 使用二甲基甲酰胺 (二甲基甲酰胺) 或N-甲基吡咯烷酮 (硝基苯磺酸) 解散. 对于容易聚集的肽, 先加入6M胍·HCl或8M尿素 (尿素) 来溶解他们, 然后稀释至所需浓度.
阐明:
1. 为了方便储存和后续使用, 建议将肽溶解至约浓度 1-2 毫克/毫升.
2. 普通肽冻干粉-20℃可保存一年以上. 对于溶解的肽, 建议分装并储存在-20°C; 如果肽序列含有蛋氨酸 Met (中号), 半胱氨酸 Cys (C) 或酪氨酸Tyr (是) 建议存放在无氧环境中，防止氧化.
附氨基酸列表:
1.中性氨基酸: 甘氨酸, 丙氨酸, 亮氨酸, 异亮氨酸, 缬氨酸, 半胱氨酸, 蛋氨酸, 苏氨酸, 丝氨酸, 苯丙氨酸, 酪氨酸, 色氨酸, 脯氨酸, 天冬酰胺和谷氨酰胺
F特色: 这类氨基酸分子仅含有一个氨基和一个羧基
2.酸性氨基酸: 谷氨酸, 天冬氨酸
特征: 这类氨基酸分子含有一个氨基和两个羧基
3.碱性氨基酸: 赖氨酸, 精氨酸, 组氨酸
特征: 此类氨基酸分子中含有二氨基羧基; 组氨酸有氮环，呈弱碱性, 也是一种碱性氨基酸.
