合适的溶出方法是肽实验成功的重要因素. 溶解不当会导致肽的损失，导致实验失败. 然而, 找到理想的溶解方法有时相当具有挑战性. 以下是MOL Changes两个技术组提出的溶解方法. 方法
MOL 改变技术集团解散指南
肽溶解的主要问题是二级结构的形成.
虽然疏水性肽链二级结构的形成比较明显, 除了最短的肽链, 这种现象几乎出现在所有肽链中, 不论极性. 所以, 溶解多肽的首要原则是使用无菌蒸馏水或去离子水 (或有条件的情况下使用无氧水).
肽溶液可能会遇到细菌降解. 为了避免这种现象, 肽应溶解在无菌蒸馏水中, 或用孔径为的滤膜过滤 0.45 或者 0.2 灭菌微米. 含Cys的多肽, 蛋氨酸, 和色氨酸特别容易被氧化, 所以它们应该溶解在无氧水中. 注入惰性气体减压脱气即可得到无氧水 (氮, 氦, 和氩气).
如果肽不溶于纯水, 超声波处理可以帮助破碎颗粒并增加溶解度. 笔记: 超声波处理会导致溶液加热和肽降解.
如果肽含有多个碱性氨基酸, 使用1~10%醋酸水溶液; 对于非常疏水的肽, 使用 50% 醋酸.
如果多肽含有大量酸性氨基酸, 它可以溶解在 1 到 10% 氨溶液或挥发性碱性缓冲液，例如吗啡乙酯或碳酸氢乙酯. 层析前必须调整pH值.
如果要将肽加载到柱上, 有机溶剂的用量必须很小, 否则会严重影响保留时间.
如果多肽由于含有芳香烃侧链（如 Val）而具有高度疏水性, 亮氨酸, 蛋氨酸, 苯丙氨酸, 提尔, 翼, ETC。, 或者是中性肽, 使用膜变性剂（例如 DMF 或 DMSO）可以帮助溶解多肽:
一个. 高浓度膜变性剂通过破坏其二级结构来帮助溶解多肽.
乙. 膜变性剂适用于制备肽分析溶液, 但可能会干扰对其生物活性的研究.
c. DMF是最好的变性剂 (最高浓度可达到 30%), 并逐滴添加直至肽溶解.
d. 反相色谱过程中, DMF将与洗脱液的前峰一起流出. 取决于注射量, 峰值可能非常高. Most peptides can elute within a few minutes after a large amount of DMF elutes. If the peptide chain is small and elutes too early, the amount of the peptide will be reduced.
MOL 更改技术组 II 溶出度指南
如何区分氨基酸是否中性, 酸性或碱性, 并计算溶出度方法:
1. Assign each acidic amino acid in the polypeptide sequence including aspartic acid Asp (D), glutamic acid Glu (乙) and C-terminal carboxyl-COOH as -1; each basic amino acid including arginine Arg ( 右), lysine Lys (K), histidine His (H) and the N-terminal amino-NH2 are assigned a value of +1; neutral amino acids are 0. Based on this, the value of the entire polypeptide is calculated, and the score is positive Peptides with a negative score are called basic peptides, those with a negative score are called acidic peptides, and those with a score of zero are called neutral peptides.
2. If it is an alkaline peptide, 先尝试用水溶解它; 如果无法溶解, 尝试使用 10% – 30% 醋酸; 如果肽仍然不溶, 尝试使用纯乙酸和三氟乙酸TFA (<50 微升) 来溶解它, 然后将肽溶液稀释至所需浓度.
3. 如果是酸性肽, 先尝试用水溶解它; 如果不能与水溶解, 尝试使用 13% 氨水 (体积/体积) 来溶解它, 将肽溶液稀释至所需浓度. 如果肽序列含有半胱氨酸 Cys (C), 不溶于碱性溶液. 请尝试以下方法.
4. 中性肽通常溶解在有机溶剂中. 第一的, 尝试使用乙腈 (乙腈), 或甲醇 (甲醇) 或异丙醇 (异丙醇) 溶解; 对于非常疏水的肽, 先用少量二甲亚砜溶解 (二甲基亚砜) 并用水稀释至所需浓度; 如果肽序列含有半胱氨酸 Cys (C), 使用二甲基甲酰胺 (二甲基甲酰胺) or N-methylpyrrolidone (硝基苯磺酸) for dissolution. For peptides that are prone to aggregation, first add 6M guanidine·HCl or 8M urea (Urea) to dissolve them, and then dilute them to the required concentration.
阐明:
1. In order to facilitate storage and subsequent use, it is recommended to dissolve the peptide to a concentration of about 1-2 mg/ml.
2. Ordinary peptide freeze-dried powder can be stored at -20°C for more than one year. For dissolved peptides, it is recommended to aliquot and store at -20°C; if the peptide sequence contains methionine Met (中号), cysteine Acid Cys (C) or tyrosine Tyr (是) is recommended to be stored in an oxygen-free environment to prevent oxidation.
附氨基酸列表:
1.Neutral amino acids: 甘氨酸, 丙氨酸, 亮氨酸, 异亮氨酸, 缬氨酸, 半胱氨酸, 蛋氨酸, 苏氨酸, 丝氨酸, 苯丙氨酸, 酪氨酸, tryptophan Acid, 脯氨酸, 天冬酰胺和谷氨酰胺
Features: This type of amino acid molecule contains only one amino group and one carboxyl group
2.Acidic amino acids: 谷氨酸, 天冬氨酸
Features: 这类氨基酸分子含有一个氨基和两个羧基
3.碱性氨基酸: 赖氨酸, 精氨酸, 组氨酸
Features: 此类氨基酸分子中含有二氨基羧基; 组氨酸有氮环，呈弱碱性, 也是一种碱性氨基酸.
