Cara pembubaran sing cocog minangka faktor penting kanggo sukses eksperimen peptida. Pembubaran sing ora bener bakal nyebabake kelangan peptida lan gagal eksperimen. Nanging, nemokake cara pembubaran becik kadhangkala cukup tantangan. Ing ngisor iki minangka cara pembubaran sing diusulake dening rong klompok teknis Owah-owahan MOL. cara
MOL Changes Technology Group Dissolution Guide
Masalah utama ing pembubaran peptida yaiku pambentukan struktur sekunder.
Sanajan pambentukan struktur sekunder rantai peptida hidrofobik luwih jelas, kajaba ranté peptida sing paling cendhak, kedadean iki dumadi ing meh kabeh ranté peptida, preduli saka polaritas. Mulane, prinsip pisanan larut polipeptida yaiku nggunakake banyu suling steril utawa banyu deionisasi (utawa banyu tanpa oksigen yen kahanan ngidini).
Solusi peptida bisa ngalami degradasi bakteri. Kanggo ngindhari fenomena iki, peptida kudu dipun bibaraken ing banyu disaring resik, utawa disaring nganggo membran filter kanthi ukuran pori 0.45 utawa 0.2 μm kanggo sterilisasi. Polipeptida sing ngandhut Cys, Met, lan Trp utamané rentan kanggo oksidasi, supaya padha kudu dipun bibaraken ing banyu tanpa oksigen. Banyu tanpa oksigen bisa dipikolehi kanthi degassing kanthi nyuda tekanan kanthi nyuntikake gas inert (nitrogen, helium, lan argon).
Yen peptida ora larut ing banyu murni, perawatan ultrasonik bisa bantuan break munggah partikel lan nambah solubility. Cathetan: Perawatan ultrasonik bakal nyebabake pemanasan solusi lan degradasi peptida.
Yen peptida ngemot pirang-pirang asam amino dhasar, nggunakake solusi banyu asam asetat 1 ~ 10%.; kanggo peptida hidrofobik banget, nggunakake 50% asam asetat.
Yen polipeptida ngandhut akeh asam amino asam, bisa larut ing a 1 kanggo 10% larutan amonia utawa buffer alkalin molah malih kayata etil morfin asetat utawa bikarbonat. Nilai pH kudu diatur sadurunge kromatografi.
Yen peptida bakal dimuat menyang kolom, jumlah pelarut organik kudu cilik banget, digunakake wektu penylametan bakal akeh kena pengaruh.
Yen polipeptida hidrofobik banget amarga ngandhut rantai samping hidrokarbon aromatik kayata Val, Leu, Met, Phe, Tir, Ala, lsp., utawa minangka peptida netral, nggunakake denaturants membran kayata DMF utawa DMSO bisa bantuan dissolve polipeptida:
a. Denaturan membran konsentrasi dhuwur mbantu mbubarake polipeptida kanthi ngrusak struktur sekunder.
b. Denaturan membran cocok kanggo nyiapake solusi analisis peptida, nanging bisa ngganggu riset babagan aktivitas biologis.
c. DMF minangka denaturan sing paling apik (konsentrasi paling dhuwur bisa tekan 30%), lan ditambahake dropwise nganti peptida larut.
d. Sajrone kromatografi fase terbalik, DMF bakal mili metu bebarengan karo pucuk ngarep eluent. Gumantung ing volume injeksi, Nilai puncak bisa uga dhuwur banget. Umume peptida bisa elute sajrone sawetara menit sawise akeh elutes DMF. Yen chain peptida cilik lan elutes banget awal, jumlah peptida bakal suda.
MOL Owah-owahan Technical Group II Pandhuan Dissolution
Cara mbedakake apa asam amino netral, asam utawa alkalin, lan ngitung metode disolusi:
1. Nemtokake saben asam amino asam ing urutan polipeptida kalebu asam aspartat Asp (D), asam glutamat Glu (E) lan C-terminal karboksil-COOH minangka -1; saben asam amino dhasar kalebu arginine Arg ( R), lisin Lys (K), histidine Kang (H) lan N-terminal amino-NH2 diwenehi nilai saka +1; asam amino netral yaiku 0. Adhedhasar iki, regane kabeh polipeptida diitung, lan skor positif Peptida karo skor negatif disebut peptida dhasar, sing duwe skor negatif diarani peptida asam, lan sing kanthi skor nol diarani peptida netral.
2. Yen peptida alkalin, coba dibubarake nganggo banyu dhisik; yen ora bisa dibubarake, nyoba kanggo nggunakake 10% – 30% asam asetat; yen peptida isih ora larut, coba gunakake asam asetat murni lan asam trifluoroasetat TFA (<50 μl) kanggo mbubarake, banjur Dilute solusi peptida menyang konsentrasi sing dikarepake.
3. Yen peptida asam, coba dibubarake nganggo banyu dhisik; yen ora bisa larut karo banyu, nyoba kanggo nggunakake 13% banyu amonia (v/v) kanggo mbubarake, lan dilute solusi peptida menyang konsentrasi sing dibutuhake. Yen urutan peptida ngandhut Cys sistein (C), ora bisa larut ing larutan alkalin. Coba cara ing ngisor iki.
4. Peptida netral biasane larut ing pelarut organik. pisanan, coba gunakake asetonitril (asetonitril), utawa metanol (metanol) utawa isopropanol (isopropanol) kanggo dissolve; kanggo peptida hidrofobik banget, pisanan dissolve karo jumlah cilik saka dimethyl sulfoxide (DMSO) lan dilute karo banyu kanggo konsentrasi sing dibutuhake; yen urutan peptida ngandhut Cys sistein (C), nggunakake dimethylformamide (DMF) utawa N-methylpyrrolidone (NMP) kanggo pembubaran. Kanggo peptida sing rawan agregasi, pisanan nambah 6M guanidine · HCl utawa 8M urea (Urea) kanggo dissolve wong, banjur diencerke menyang konsentrasi sing dibutuhake.
ilustrasi:
1. Kanggo nggampangake panyimpenan lan nggunakake sakteruse, dianjurake kanggo dissolve peptida kanggo konsentrasi kira-kira 1-2 mg/ml.
2. Wêdakakêna beku peptida biasa bisa disimpen ing -20 ° C luwih saka setahun. Kanggo peptida sing larut, Disaranake kanggo aliquot lan disimpen ing -20 ° C; yen urutan peptida ngandhut methionine Met (M), Sistein Asam Cys (C) utawa tirosin Tyr (Y) dianjurake supaya disimpen ing lingkungan sing bebas oksigen kanggo nyegah oksidasi.
Dhaptar asam amino sing ditempelake:
1.Asam amino netral: glisin, alanin, leucine, isoleucine, valine, sistein, metionin, threonine, serine, fenilalanin, tirosin, Asam triptofan, prolin, asparagine lan glutamin
Features: Molekul asam amino jinis iki mung ngandhut siji gugus amino lan siji gugus karboksil
2.Asam amino asam: asam glutamat, asam aspartat
Fitur: Molekul asam amino jinis iki ngandhut siji gugus amino lan rong gugus karboksil
3.Asam amino dhasar: lisin, arginin, histidine
Fitur: Asam amino jinis iki ngandhut gugus diaminokarboksil ing molekulé; histidine nduweni cincin nitrogen lan lemah alkalin, lan uga minangka asam amino dhasar.
