Apta dissolutio methodi momenti factor est pro successu experimentorum peptidis. Impropria dissolutio damnum peptidum et defectum experimenti causat. tamen, solutione methodum inveniendo specimen est interdum satis challenging. Sequuntur methodi dissolutionis propositae a duobus technicis coetibus MOL Mutationum. methodo
MOL Changes Technology Group Dissolution Guide
Praecipua dissolutionis quaestio in peptide est formatio structurae secundariae.
Licet formatio structurarum secundarum catenulis peptidis hydrophobici manifestior sit, excepto brevissimo peptide catenis, hoc fit in omnibus fere peptide catenis, id verticitatem. ergo, primum principium polypeptidis dissolvendi utatur aqua sterili destillata vel aqua Deionizata (aut oxygeni libero aqua si conditiones permiserit).
Peptide solutio occurrant bacterial degradatio. Ad hoc evitare phaenomenon, peptide dissolvi debet in sterili aqua decocta, aut percolantur membrana filtrum cum magnitudine porum 0.45 or * 0.2 μm pro sterilitate. Polypeptides continens Cys, Met, et Trp sunt valde obnoxiae oxidationis, ita dissolvi oxygeni libero aqua. Oxygeni gratis aqua obtineri potest degassing sub pressura reducta immisso gasorum inertes (nitrogen, helium, et argonis).
Si peptide insolubilis est in aqua pura, ultrasonic curationem iuvare possunt particulas dissolvere et solutionem augere. Nota: Curatio ultrasonica calefacere solutionem et degradationem peptide.
Si peptide habet multa basic amino acida, uti I ~ X% acetic acid solutionem aqueam; valde hydrophobic peptides, usus 50% acetic acidum.
Si polypeptide acidic amino acida continet multum, potest dissolvi 1 to 10% solutio ammoniae vel quiddam alcalini volatile ut ethyl morphinum acetatis vel bicarbonatae. PH valorem componi debet antequam in fina.
Si peptide oneratur in columnam, moles organicum solvendo esse minima, secus retentione tempus graviter afficitur.
Si polypeptidis valde hydrophobica est, quia hydrocarbonum aromaticum continet enotatum enotatum ut Val, Leu, Met, Phe, Tyr, Ala, etc., aut neutrum est peptide, usus membranae denaturantis ut DMF vel DMSO auxilium polypeptidum dissolvere potest:
a. Summus concentratio membranae denaturantes adiuvant polypeptidem dissolvere destruendo eius structuram secundariam.
b. Membranae denaturantes aptae sunt ad solutiones analyseos praeparandas, sed potest impedire investigationem in actione biologica.
c*. DMF est optimus denaturant (summa intentio perveniat 30%), et additur dropwise donec peptide dissolvitur.
d*. Per tempus reversed fina, DMF una cum anteriori cacumine eluent. Fretus in infusione voluminis, ad apicem valorem sit valde altus. Plerique peptides paucis minutis post magnam quantitatem DMF elutes eludere possunt. Si peptide catena parva est et elutes immaturum, moles peptide reducetur.
MOL Mutationes Technical Group II Dissolutione Guide
Quomodo amino acida sint neutra?, acidic vel alkaline, et rationem solutionis modum:
1. Amino acido acidico quemlibet in polypeptide seriei aspartici asp (D), acidum glutamicum Glu (E) and C-terminal carboxyl-COOH as -1; inter basic acid comprehendo arginine Arg ( R), lysine Lys (K), histidine his (H) and the N-terminal amino-NH2 are assigned value of . +1; neutrum amino acida sunt 0. Ex hoc, valorem totius polypeptide computatur, et score positivus Peptides cum negativo, principales vocantur peptides, illi cum negativo nomine peptides acidic vocantur, et qui cum nulla sit, peptides vocantur neutrae.
2. Si est alcalina peptide, primum aqua conantur dissolvere; si non potest dissolvi, experior ut 10% - 30% acetic acidum; si peptide adhuc insolubilis, uti conantur acido puro acetico et acido trifluoroacetico TFA (<50 μl) dissolvere, et deinde solutionem peptide ad desideravit concentration.
3. Si est acidic peptide, primum aqua conantur dissolvere; si aqua dissolvi nequeat, experior ut 13% ammoniaci aquae (v/v) dissolvere, et solve peptide solutionem requiritur intentio. Si peptide series continet cysteinum Cys (C), non potest dissolvi alcalina solutione. Try modi infra.
4. Peptides Neutrales solent organici menstrua dissolvi. Primum, acetonitrile uti conantur (acetonitrile), aut methanolum (methanolum) aut isopropanol (isopropanol) dissolvere; valde hydrophobic peptides, Primum solve cum parva amino sulfoxide (DMSO) et diluto aqua requiritur intentio; si peptide series continet cysteinum Cys (C), uti dimethylformamide (DMF) vel N-methylpyrrolidone (NMP) ad dissolutionem. Nam peptides quae prona sunt ad aggregationem, primum adde 6M guanidinem·HCl vel 8M urea (Urea) dissolvere eos, tum extenuant, ut requiritur intentio.
illustrare:
1. Ut ad faciliorem repono usum et subsequentem, commendatur dissolvere peptide ad collationem circiter 1-2 mg/ml.
2. Ordinarius peptide duratus pulveris in -20°C condi potest plus quam uno anno. Nam dissolvitur peptides, commendatur aliquot et reponunt apud -20°C; si consecutio peptide methionine Met (M), cysteine Acidum cys (C) aut tyrosine Tyr (Y) commendatur ne oxidatio in oxygeni libero elit condi.
Amino coniuncta album acidum:
1.Neutralia amino acida: glycine, alanine, leucine, isoleucine, valine, cysteine, methionine, Threonine, serine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan Acidum, proline, asparagine et glutamine
Features: Hoc genus moleculi acidi amino tantum continet unam globi amino et unum globi carboxyl
2.Acidi amino acida: glutamicum acidum, aspartic acid
Features: Hoc genus moleculi acidi amino continet unam amino globi et coetus carboxyl duos
3.Basic amino acida: lysine, arginine, histidine
Features: Hoc genus amino acid continet globus diaminocarboxyl in suo moleculo; histidine anulum NITROGENIUM habet et debiliter alkaline ., et est etiam amino acid.
