Mistoqsijiet Frekwenti
Sempliċement għal Kumpless minn Milligrammi għal Kilogrammi
Custom Quote Request
How to store peptides?
Peptidi lajofilizzati
Għal ħażna fit-tul ta 'peptidi, nirrakkomandaw li jaħżnuhom bħala trab solidu. Peptidi lajofilizzati jistgħu jinħażnu f'-20 ° C jew inqas b'degradazzjoni minima. Il-klijenti huma avżati biex jerġgħu jispezzjonaw peptidi personalizzati kull wieħed 2 snin mid-data tar-rilaxx tal-kontroll tal-kwalità.
Peptidi f'soluzzjoni
Peptidi fis-soluzzjoni huma inqas stabbli u suxxettibbli għad-degradazzjoni. Soluzzjonijiet milwiema użati biex jinħall il-peptidi għandhom ikunu sterili u puri.
F'soluzzjoni, ċertu ammont ta 'peptide jista' jiġi degradat, skond l-aċidi amminiċi preżenti fis-sekwenza. Xi eżempji huma elenkati hawn taħt:
– Peptidi li fihom methionine, residwi ta' cysteine jew tryptophan għandu jkollhom żmien limitat ta' ħażna fis-soluzzjoni minħabba l-ossidazzjoni. Dawn il-peptidi għandhom jiġu maħlula f'solvent mingħajr ossiġnu. –
Glutamine u asparagine jistgħu jiġu deamidated għal aċidu glutamiku u aċidu aspartiku, rispettivament. –
Iċ-ċisteina jista' jgħaddi minn ċiklizzazzjoni ossidattiva biex jifforma rabta disulfide cysteine-cysteine (li jistgħu jiġu ffurmati fi ħdan jew bejn bonds disulfide). –
Ir-residwi ċċarġjati (aċidu aspartiku, aċidu glutamiku, lisina, arginina, istidina) huma igroskopiċi (jassorbi l-ilma mill-arja) u għandhom tendenza li jiffurmaw viskuż, żejt ċar. Din il-bidla fiżika tista 'ma taffettwax in-natura tal-peptide. Huwa rakkomandat li tali peptidi jiġu lajofilizzati biex jitneħħew traċċi ta 'ilma, imbagħad degassed bin-nitroġenu biex jiġi żgurat li ma jkunx hemm fwar tal-ilma fil-kunjett, u mbagħad malajr limitu.
Biex tevita ħsara mill-iffriżar u tidwib ripetuti, nirrakkomandaw li l-utenti jdubu biss l-ammont ta 'peptide meħtieġ għall-esperiment attwali. Excess solution should be stored at ≥ -20 o C until needed.
Avoid moisture.
Since moisture significantly reduces the long-term stability of peptides, we recommend equilibrating the peptides in a desiccator to room temperature before opening the vials. Upon completion of peptide dispensing, the remaining peptides in the tube should be gently purged with anhydrous nitrogen, then the container should be capped, sealed with a sealing film, and stored at -20°C.
The solubility characteristics of different peptides vary considerably. Residues such as alanine (Ala), ċisteina (Cys), isoleucine (Ile), lewċina (Leu), methionine (Met), phenylalanine (Phe), and valine (Val) add to the peptide’s hydrophobicity and solubility in aqueous solutions, and it is recommended that the customer follow these guidelines when customizing peptides.
Proprjetajiet tas-Solubbiltà
Is-solubilità tal-peptidi tiddependi ħafna fuq is-sekwenza tal-aċidu amminiku. Peptidi idrofobiċi naturali (A, F, G, V, L, I, M, W, P bi propensità ogħla) jeħtieġu solventi organiċi għas-solubilizzazzjoni. Peptidi aċidużi (tendenza ogħla għal D, E fis-sekwenza tal-peptidi) jeħtieġu buffers akwei bażiċi għas-solubilizzazzjoni, filwaqt li peptidi bażiċi (tendenza ogħla għal K, H, u R) jeħtieġu buffers akwei aċidużi għas-solubilizzazzjoni.
Għażla tas-Solvent
Minħabba l-limitazzjonijiet tal-assaġġ tiegħek, nirrakkomandaw li tuża l-linji gwida li ġejjin biex tiddetermina l-aħjar solvent għas-solubilizzazzjoni tal-peptidi
Peptidi idrofobiċi
Biex jirrisolubilizza l-peptidi idrofobiċi, żid 100 µL ta' DMSO u ssebbaħ sakemm tiġi ffurmata soluzzjoni omoġenja. Li jmiss, żid il-buffer tal-għażla tiegħek biex tagħmel a 1 soluzzjoni mg/mL (iktar ma tkun għolja l-konċentrazzjoni tal-peptide, l-akbar l-ammont ta 'DMSO meħtieġ).
Idrofiliku (Aċidu) Peptidi
Biex jirrisolubilizza l-peptidi aċidużi, żid 100 µL ta' 1% NH 4 OH biex 1 mg ta' peptide u vortex. Ladarba s-soluzzjoni tkun ċara, żid il-buffer tal-għażla tiegħek biex tagħmel a 1 soluzzjoni mg/mL.
Idrofiliku (Bażiku) Peptidi
Biex tirrikostitwixxi peptide bażiku, żid ilma distillat 1 mg ta' peptide u vortex.
X'inhi d-differenza bejn il-piż nett vs gross tal-peptide?
L-istandard tal-industrija huwa li jagħti peptidi f'forma lajofilizzata bħala piż Gross. Piż gross tal-peptide huwa l-piż totali tal-komponenti kollha preżenti fit-trab lajofilizzat. Dan jinkludi l-peptide ta 'interess, kwalunkwe impuritajiet tal-peptidi, ilma, solventi residwi, u counterion.
Għall-kuntrarju Net piż tal-peptide, ikkalkulat mill- Kontenut nett tal-peptidi, huwa l-piż ta il-peptide biss komponent preżenti fit-trab lajofilizzat. Dan joffri konċentrazzjonijiet aktar preċiżi tas-soluzzjonijiet ta 'peptidi sussegwenti tiegħek. Għalhekk, aħna rrakkomandati ammonti ta 'piż nett ta' peptide għal Peptide tad-dwana ordnijiet.
Kontenut Net Peptide il-kejl isir permezz ta 'analiżi ta' aċidu amminiku (AAA; preċiżjoni limitata iżda teħtieġ ammont materjali baxx) jew analiżi elementali (CHN; teħtieġ milligrammi ta 'peptide iżda hija aktar preċiża). Iż-żewġ metodi jagħtu valur perċentwali (ie., 75% kontenut nett ta' peptidi).
Il-Kontenut Nett tal-Peptide jiddependi fuq l-ammont ta' counterion preżenti*, li hija dipendenti fuq is-sekwenza tal-peptidi. Essenzjalment, iktar ma jkun għoli l-piż tal-peptide, iktar ma jkun baxx il-kontenut tal-peptide
*Nota: L-element użat biex jiġi kkalkulat il-kontenut nett tal-peptide huwa bbażat fuq il-kontro-jone tal-peptide. Dan isir biex jiġi żgurat li l-kontro-jone ma jikkontribwixxix għall-ammont tal-kontenut tal-peptide. Per eżempju, meta TFA jew aċetat huma l-kontro-jone, in-nitroġenu jintuża minħabba li jinsab fil-peptide iżda mhux fit-TFA jew l-aċetat. Karbonju jew Nitroġenu jistgħu jintużaw meta klorur huwa l-kontro-jone għall-istess raġuni.
Kalkoli tal-Piż Nett Peptide:
Kwantità netta tal-peptidi (peptide totali) — metodu li nużaw għal ordnijiet ta’ peptidi personalizzati netti.
Immoltiplika l-Perċentwal tal-Kontenut Nett tal-Peptide (forma deċimali) mill-Piż Gross tal-Peptide, biex tikseb l-ammont ta 'Kwantità Netta Peptide (peptide totali).
Per eżempju:
Għal 5 mg gross peptide/kunjett:
Il-kontenut nett tal-peptidi huwa 84%.
Ammont eżatt ta 'peptide totali = 0.84*5 mg=4.2 mg peptide totali
Kwantità netta ta 'Peptide ta' Interess—l-aktar preċiż — il-klijent jista 'juża dan il-metodu waħdu biex jikkalkula l-peptide ta' interess.
Immoltiplika Perċentwal tal-Kontenut Nett tal-Peptide bil-Piż Gross tal-Peptide, u l-Purità tal-Peptide (mill-HPLC), biex tikkalkula l-ammont eżatt tal-peptide ta 'interess li għandek. Il-perċentwali nett tal-peptide (forma deċimali) hija mmultiplikata bil-purità tal-peptide (forma deċimali).
Per eżempju:
Għal 5 mg gross peptide/kunjett bi:
Il-kontenut nett tal-peptidi huwa 84%.
L-ammont eżatt ta 'peptide ta' interess huwa = 0.84*0.96*5 mg=4.03 mg
Bidliet MOL tutilizza kimika Fmoc ta 'fażi solida aktar milli kimika BOC. Il-kimika Fmoc tippermetti t-tneħħija ta 'gruppi protettivi bl-użu ta' kundizzjonijiet ħfief waqt it-titwil tal-peptidi, filwaqt li l-kimika BOC teħtieġ l-użu ta 'aċidu qawwi biex tneħħi l-gruppi protettivi waqt it-titwil tal-peptidi. Barra minn hekk, Il-kimika Fmoc tutilizza l-aċidu trifluoroacetic (TFA) biex tneħħi l-peptide mir-reżina, filwaqt li l-kimika BOC tutilizza l-aċidu idrofluworiku (HF). HF huwa bla kulur, korrużivi ħafna, u velenu ta' kuntatt.
Għalhekk, MOL Changes timpjega l-kimika Fmoc peress li hija aktar ħafifa, flessibbli, u versatili meta mqabbla mal-kimika BOC.
Kif nikkalkula l-molarità tal-peptide tiegħi?
Il-molarità tirreferi għall-konċentrazzjoni molari ta 'soluzzjoni, li huwa n-numru ta’ moli ta’ solut maħlul fi 1 litru ta’ soluzzjoni, espress bħala mol/L, jew M.
Molarità [M] = Quddiesa / (Volum x Massa Molari); Mole = Konċentrazzjoni (g/L) x Volum (L)/MW (g/mol)
Eżempju:
Mogħtija: 1mg ta 'trab tal-peptide niexef b'MW: 20KDa (Il-massa molari tal-peptide hija 20 g/mol)
Biex tiddetermina l-molarità b'massa magħrufa u volum magħruf
Għal soluzzjoni ta '1ml ta' dan il-peptide:
Molarità = Massa (0.001g) / (volum (0.001L) x Massa Molari (MW 20,000) = 50 µM
Biex tiddetermina l-massa biex tinkiseb ċerta molarità:
Jekk għall-assaġġ tiegħek, għandek bżonn ta 'soluzzjoni ta' peptide ta 'ħidma ta' 0.01mM f'1ml ta 'ilma, imbagħad ikkalkula l-massa meħtieġa kif ġej:
Massa = Molarità x Volum x Massa Molari
Massa = 0.01mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0.0002g
Għalhekk, ser ikollok bżonn 0.2mg/ml ta 'peptide biex ikollok soluzzjoni ta' ħidma ta '0.01mM.
F'liema forma jitwasslu l-peptidi?
Aħna nwasslu bħala trab lajofilizzat jew mhux maħdum u soluzzjoni tal-peptidi.
Kif inkun naf jekk il-peptide tiegħi hux se jinħall?
Is-solubilità ta’ peptide f’solvent partikolari tiddependi fuq is-sekwenza ta’ aċidi amminiċi u ħafna drabi diffiċli biex titbassar. Fil-każ ta 'peptidi katalogu, l-informazzjoni dwar is-solubilità hija elenkata fuq id-datasheet tal-QC. Għal peptidi tad-dwana, jekk jogħġbok ara t-taqsima intitolata “Kif għandi solubilizza l-peptide tiegħi”.
X'inhi d-differenza bejn il-kontenut tal-peptidi u l-purità tal-peptidi?
Il-kontenut tal-peptidi mhuwiex indikazzjoni tal-purità tal-peptidi peress li dawn huma żewġ kejl separati. Il-purità hija determinata minn HPLC analitiku u tindika l-preżenza/assenza ta' kontaminanti peptidiċi oħra (i.e. peptidi maqtugħin).
Il-kontenut nett tal-peptide jiddetermina l-ammont attwali tal-peptide (peptide ta' interess kif ukoll il-kontaminanti tal-peptidi) preżenti fil-kampjun. Il-kontenut nett ta 'peptidi huwa tradizzjonalment imkejjel permezz ta' analiżi ta 'aċidu amminiku (AAA; preċiżjoni limitata iżda teħtieġ ammont baxx ta 'materjal) jew analiżi elementali (CHN; teħtieġ milligrammi ta 'peptide iżda hija aktar preċiża).
Kif ġeneralment tippurifika l-peptidi tiegħek?
Il-peptidi MOL Changes huma ġeneralment ippurifikati b'HPLC preparattiv b'fażi inversa, bl-użu 2 buffers li fihom 0.1% aċidu trifluworoaċetiku (TFA). L-ewwel buffer (Buffer A) huwa magħmul minn 0.1 % TFA f'ilma dejonizzat u t-tieni buffer (Buffer B) huwa magħmul minn 0.1 % TFA fl-aċetonitrile (ACN).
Ġeneralment, peptidi mhux raffinati huma l-ewwel maħlula f'soluzzjoni ta' jew Buffer A, xi ammont ta' Buffer B, jew solvent polari organiku bħal DMSO. Jekk intuża solvent polari organiku jew Buffer B, din is-soluzzjoni ċara l-ewwel tiġi dilwita bil-Buffer A. Li jmiss, is-soluzzjoni peptidika hija ffiltrata u mgħobbija fuq is-sistema preparattiva HPLC. Jutilizzaw gradjent metodu ottimizzat, frazzjonijiet imbagħad jinġabru abbażi tal-qari tal-assorbiment. Kull frazzjoni mbagħad tiġi analizzata permezz ta’ HPLC analitiku biex jiġi żgurat li l-purità ta’ kull frazzjoni tilħaq l-ispeċifikazzjoni tal-purità meħtieġa.
Dawn il-frazzjonijiet "puri" imbagħad jinġabru flimkien u lajofilizzati. It-trab "pur" imbagħad jiġi ttestjat kemm għall-purità kif ukoll għall-identità biex jiġi żgurat li l-peptide korrett ikun ġie manifatturat.
Fl-aħħarnett, grupp QC indipendenti f'AnaSpec jerġa' jittestja l-peptide biex jiżgura li l-attributi kollha tal-ittestjar jissodisfaw l-ispeċifikazzjonijiet meħtieġa.
Kif nikteb it-termini tas-sekwenza tal-peptidi tiegħi?
In-nomenklatura internazzjonali użata għat-termini tas-sekwenza hija kif ġej:
– N-terminal: H tfisser amina ħielsa (NH2-), Ac tfisser acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr tfisser aċidu piroglutamiku
– C-terminal: OH tfisser aċidu ħieles (-COOH), NH2 tfisser amide [-CONH2]
– Modifiki fuq il-katina tal-ġenb tal-aċidi amminiċi huma murija fil-parentesi wara l-aċidu amminiku korrispondenti. Per eżempju; serina fosforilata = S(PO3H2) jew epsilon-N-acetylated lysine = K(Ac)
Matul il-produzzjoni tal-peptide, joni fis-soluzzjonijiet ta' sinteżi u purifikazzjoni jingħaqdu mal-ktajjen tal-ġenb tal-aċidu amminiku ċċarġjati tal-peptide, li jiffurmaw melħ. Dawn il-jonji huma magħrufa bħala counterions tal-peptidi u jgħinu biex jibbilanċjaw il-ħlas tal-peptide.
Aċidu trifluoroacetic (TFA) huwa komunement użat fis-sinteżi u l-purifikazzjoni tal-peptidi.
Jifforma melħ tat-trifluworoaċetat b'aċidi amminiċi bażiċi (eż., lisina, arginina, istidina) u l-amina ħielsa N-terminal. Għalhekk, trifluoroacetate huwa tipikament il-kontrojon default.
In-numru minimu ta' molekuli TFA marbuta ma' peptide huwa proporzjonali għan-numru ta' residwi bażiċi f'sekwenza ta' peptide partikolari. Għalhekk, l-aktar residwi bażiċi preżenti f'peptide, aktar ma jkun baxx il-kontenut nett ta 'peptidi tat-trab lajofilizzat. Biex tagħti kont tat-TFA jew il-kontenut ta' ilma preżenti fil-kampjun, nirrakkomandaw li twettaq analiżi tal-kontenut tal-peptide għal kull peptide tad-dwana.
Ilma u aċidu trifluworoaċetiku (TFA) huma prodotti sekondarji tal-proċess ta’ purifikazzjoni. Madankollu, It-TFA jista' jqajjem tħassib dwar it-tossiċità għal ħaj u studji prekliniċi. Għalhekk, MOL Changes joffri aċetat mhux tossiku, klorur, jew skambjaturi tal-melħ tal-ammonju.
hy huma peptidi li fihom Cys, Met, jew Trp diffiċli biex jiġu sintetizzati?
Peptidi li fihom Cys, Met, jew Trp huma ta 'sfida biex jissintetizzaw u jiksbu prodotti ta' purità għolja. Dan huwa prinċipalment minħabba l-instabilità u s-suxxettibilità għall-ossidazzjoni ta 'dawn il-gruppi funzjonali. Attenzjoni speċjali hija meħtieġa għall-użu u l-ħażna ta’ dawn il-peptidi biex jiġi evitat il-ftuħ ripetut tal-kunjetti.
Tlift il-mistoqsija tiegħek? Waqqa lilna linja u aħna se
terġa’ lura ġewwa 24 sigħat.
