Foire aux questions
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How to store peptides?
Peptides lyophilisés
Pour le stockage à long terme des peptides, nous vous recommandons de les conserver sous forme de poudre solide. Les peptides lyophilisés peuvent être conservés à -20 °C ou moins avec une dégradation minimale. Il est conseillé aux clients de réinspecter les peptides personnalisés chaque 2 ans à compter de la date de sortie du contrôle qualité.
Peptides en solution
Les peptides en solution sont moins stables et sujets à la dégradation. Les solutions aqueuses utilisées pour dissoudre les peptides doivent être stériles et pures.
En solution, une certaine quantité de peptide peut être dégradée, en fonction des acides aminés présents dans la séquence. Quelques exemples sont répertoriés ci-dessous:
– Peptides contenant de la méthionine, les résidus de cystéine ou de tryptophane doivent avoir une durée de stockage limitée en solution en raison de l'oxydation. Ces peptides doivent être dissous dans un solvant sans oxygène. –
La glutamine et l'asparagine peuvent être désamidées en acide glutamique et acide aspartique, respectivement. –
La cystéine peut subir une cyclisation oxydative pour former une liaison disulfure cystéine-cystéine (qui peut être formé à l'intérieur ou entre des liaisons disulfure). –
Les résidus chargés (acide aspartique, acide glutamique, lysine, arginine, histidine) sont hygroscopiques (absorber l'eau de l'air) et ont tendance à former un film visqueux, huile claire. Ce changement physique peut ne pas affecter la nature du peptide. Il est recommandé de lyophiliser ces peptides pour éliminer les traces d'eau., puis dégazé à l'azote pour s'assurer qu'il n'y a pas de vapeur d'eau dans le flacon, puis rapidement bouché.
Pour éviter les dommages dus au gel et au dégel répétés, nous recommandons aux utilisateurs de dissoudre uniquement la quantité de peptide requise pour l'expérience en cours. L'excès de solution doit être conservé à ≥ -20 o C jusqu'à ce que nécessaire.
Eviter l'humidité.
Puisque l’humidité réduit considérablement la stabilité à long terme des peptides, nous recommandons d'équilibrer les peptides dans un dessiccateur à température ambiante avant d'ouvrir les flacons. Une fois la distribution du peptide terminée, les peptides restants dans le tube doivent être doucement purgés avec de l'azote anhydre, alors le récipient doit être bouché, scellé avec un film d'étanchéité, et conservé à -20°C.
Comment dissoudre les peptides?
Les caractéristiques de solubilité des différents peptides varient considérablement. Des résidus tels que l'alanine (Hélas), cystéine (Cys), isoleucine (Avec), leucine (Leu), méthionine (Rencontré), phénylalanine (Phé), et valine (Val) ajouter à l’hydrophobicité et à la solubilité du peptide dans les solutions aqueuses, et il est recommandé au client de suivre ces directives lors de la personnalisation des peptides.
Propriétés de solubilité
La solubilité des peptides dépend fortement de la séquence d'acides aminés. Peptides naturellement hydrophobes (UN, F, G, V, L, je, M, W, P avec une propension plus élevée) nécessitent des solvants organiques pour la solubilisation. Peptides acides (propension plus élevée pour D, E dans la séquence peptidique) nécessitent des tampons aqueux basiques pour la solubilisation, tandis que les peptides basiques (propension plus élevée pour K, H, et R) nécessitent des tampons aqueux acides pour la solubilisation.
Sélection du solvant
Compte tenu des limites de votre test, nous vous recommandons d'utiliser les directives suivantes pour déterminer le meilleur solvant pour solubiliser les peptides
Peptides hydrophobes
Pour resolubiliser les peptides hydrophobes, ajouter 100 µL de DMSO et soniquer jusqu'à formation d'une solution homogène. Suivant, ajoutez le buffer de votre choix pour faire un 1 solution en mg/ml (plus la concentration en peptide est élevée, plus la quantité de DMSO requise est grande).
Hydrophile (Acide) Peptides
Pour resolubiliser les peptides acides, ajouter 100 µL de 1% NH 4 OH à 1 mg de peptide et vortex. Une fois la solution claire, ajoutez le buffer de votre choix pour faire un 1 solution en mg/ml.
Hydrophile (Basique) Peptides
Reconstituer un peptide basique, ajouter de l'eau distillée à 1 mg de peptide et vortex.
Quelle est la différence entre le poids net et brut du peptide?
La norme industrielle consiste à livrer les peptides sous forme lyophilisée en poids brut.. Poids brut du peptide est le poids total de tous les composants présents dans la poudre lyophilisée. Cela inclut le peptide d'intérêt, toute impureté peptidique, eau, solvants résiduels, et contre-ion.
Au contraire Filet poids des peptides, calculé à partir du Teneur nette en peptides, est le poids de seulement le peptide composant présent dans la poudre lyophilisée. Cela offre des concentrations plus précises de vos solutions peptidiques ultérieures. Ainsi, nous avons recommandé des quantités nettes de peptides pour Peptide personnalisé ordres.
Teneur nette en peptides la mesure est effectuée par analyse des acides aminés (AAA; précision limitée mais nécessite une faible quantité de matériau) ou analyse élémentaire (CHN; nécessite des milligrammes de peptide mais est plus précis). Les deux méthodes donnent une valeur en pourcentage (c'est à dire., 75% teneur nette en peptides).
La teneur nette en peptides dépend de la quantité de contre-ion présente*, qui dépend de la séquence peptidique. Essentiellement, plus la charge peptidique est élevée, plus la teneur en peptide est faible
*Note: L'élément utilisé pour calculer la teneur nette en peptides est basé sur le contre-ion peptidique. Ceci est fait pour garantir que le contre-ion ne contribue pas à la quantité de peptide contenue. Par exemple, lorsque le TFA ou l'acétate sont le contre-ion, l'azote est utilisé car il se trouve dans le peptide mais pas dans le TFA ou l'acétate. Le carbone ou l'azote peuvent être utilisés lorsque le chlorure est le contre-ion pour la même raison..
Calculs du poids net des peptides:
Quantité nette de peptides (peptide total) — méthode que nous utilisons pour les commandes nettes de peptides personnalisés.
Multipliez le pourcentage de teneur nette en peptides (forme décimale) par le poids brut du peptide, pour obtenir la quantité de quantité nette de peptide (peptide total).
Par exemple:
Pour 5 mg brut de peptide/flacon:
Le contenu net des peptides est 84%.
Quantité exacte de peptide total = 0.84*5 mg = 4,2 mg de peptide total
Quantité nette de peptide d’intérêt : la plus précise — le client peut utiliser cette méthode par lui-même pour calculer le peptide d'intérêt.
Multiplier le pourcentage de teneur nette en peptides par le poids brut des peptides, et la pureté des peptides (par HPLC), pour calculer la quantité exacte du peptide d'intérêt dont vous disposez. Le pourcentage net de peptides (forme décimale) est multiplié par la pureté du peptide (forme décimale).
Par exemple:
Pour 5 mg de peptide brut/flacon avec:
Le contenu net des peptides est 84%.
La quantité exacte de peptide d’intérêt est = 0.84*0.96*5 mg=4,03 mg
Quel type de chimie utilisez-vous?
MOL Changes utilise la chimie Fmoc en phase solide plutôt que la chimie BOC. La chimie Fmoc permet l'élimination des groupes protecteurs dans des conditions douces pendant l'élongation du peptide, tandis que la chimie BOC nécessite l'utilisation d'un acide fort pour éliminer les groupes protecteurs pendant l'élongation du peptide. En plus, La chimie Fmoc utilise de l'acide trifluoroacétique (ATF) pour retirer le peptide de la résine, tandis que la chimie BOC utilise de l'acide fluorhydrique (HF). HF est incolore, très corrosif, et un poison de contact.
Donc, MOL Changes utilise la chimie Fmoc car elle est plus douce, flexible, et polyvalent par rapport à la chimie BOC.
Comment calculer la molarité de mon peptide?
La molarité fait référence à la concentration molaire d'une solution, qui est le nombre de moles de soluté dissous dans 1 litre de solution, exprimé en mol/L, ou M.
Molarité [M] = Masse / (Volume x Masse molaire); Mole = Concentration (g/L) xVolume (L)/MW (g/mole)
Exemple:
Donné: 1mg de poudre de peptide sec avec MW: 20KDa (La masse molaire du peptide est 20 g/mole)
Pour déterminer la molarité avec une masse et un volume connus
Pour une solution de 1 ml de ce peptide:
Molarité = Masse (0.001g) / (volume (0.001L) x Masse molaire (MW 20,000) = 50 µM
Déterminer la masse pour atteindre une certaine molarité:
Si pour votre test, vous avez besoin d'une solution peptidique de travail de 0,01 mM dans 1 ml d'eau, puis calculez la masse requise comme suit:
Masse = Molarité x Volume x Masse molaire
Masse = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20 000 g/mole = 0,0002 g
Ainsi, vous aurez besoin de 0,2 mg/ml de peptide pour avoir une solution de travail de 0,01 mM.
Sous quelle forme les peptides sont-ils délivrés?
Nous livrons sous forme de poudre lyophilisée ou brute et de solution peptidique.
Comment savoir si mon peptide sera soluble?
La solubilité d'un peptide dans un solvant donné dépend de la séquence d'acides aminés et est souvent difficile à prédire.. Dans le cas des peptides du catalogue, les informations sur la solubilité sont répertoriées sur la fiche technique QC. Pour les peptides personnalisés, veuillez consulter la section intitulée “Comment dois-je solubiliser mon peptide”.
Quelle est la différence entre la teneur en peptides et la pureté des peptides?
La teneur en peptide n'est pas une indication de la pureté du peptide car il s'agit de deux mesures distinctes.. La pureté est déterminée par HPLC analytique et indique la présence/absence d'autres contaminants peptidiques (c'est à dire. peptides tronqués).
La teneur nette en peptide détermine la quantité réelle de peptide (peptide d'intérêt ainsi que les contaminants peptidiques) présent dans l'échantillon. La teneur nette en peptides est traditionnellement mesurée par analyse des acides aminés (AAA; précision limitée mais nécessite une faible quantité de matériau) ou analyse élémentaire (CHN; nécessite des milligrammes de peptide mais est plus précis).
Comment purifiez-vous généralement vos peptides?
Les peptides MOL Changes sont généralement purifiés par HPLC préparative en phase inverse, en utilisant 2 tampons contenant 0.1% acide trifluoroacétique (ATF). Le premier tampon (Tampon A) est composé de 0.1 % TFA dans l'eau déminéralisée et le deuxième tampon (Tampon B) est composé de 0.1 % TFA dans l'acétonitrile (ACN).
En général, les peptides bruts sont d’abord dissous dans une solution du tampon A, une certaine quantité de tampon B, ou un solvant organique polaire tel que le DMSO. Si un solvant polaire organique ou un tampon B a été utilisé, cette solution claire sera préalablement diluée avec le Tampon A. Suivant, la solution peptidique est filtrée et chargée sur le système HPLC préparatif. Utiliser un gradient de méthode optimisé, les fractions sont ensuite collectées sur la base des lectures d'absorbance. Chaque fraction est ensuite analysée via une HPLC analytique pour garantir que la pureté de chaque fraction répond aux spécifications de pureté requises..
Ces fractions « pures » sont ensuite regroupées et lyophilisées.. La poudre « pure » est ensuite testée pour sa pureté et son identité afin de garantir que le bon peptide a été fabriqué..
Enfin, un groupe de contrôle qualité indépendant d'AnaSpec teste à nouveau le peptide pour s'assurer que tous les attributs de test répondent aux spécifications requises.
Comment écrire les terminaisons de ma séquence peptidique?
La nomenclature internationale utilisée pour les terminaisons de séquence est la suivante:
– N-terminus: H signifie amine libre (NH2-), Ac signifie acétyle [CH3C(Ô)-NH-], Pyr signifie acide pyroglutamique
– Terminal C: OH signifie acide libre (-COOH), NH2 signifie amide [-CONH2]
– Les modifications sur la chaîne latérale des acides aminés sont représentées entre parenthèses après l'acide aminé correspondant.. Par exemple; sérine phosphorylée = S(PO3H2) ou lysine epsilon-N-acétylée = K(Ac)
Qu'est-ce qu'un contre-ion peptidique?
Pendant la production de peptides, les ions présents dans les solutions de synthèse et de purification se lient aux chaînes latérales d'acides aminés chargées du peptide, former des sels. Ces ions sont appelés contre-ions peptidiques et aident à équilibrer la charge du peptide..
Acide trifluoroacétique (ATF) est couramment utilisé dans la synthèse et la purification des peptides.
Il forme des sels de trifluoroacétate avec des acides aminés basiques (par ex., lysine, arginine, histidine) et l'amine N-terminale libre. Donc, le trifluoroacétate est généralement le contre-ion par défaut.
Le nombre minimum de molécules de TFA liées à un peptide est proportionnel au nombre de résidus basiques dans une séquence peptidique donnée.. Ainsi, plus il y a de résidus basiques présents dans un peptide, plus la teneur nette en peptides de la poudre lyophilisée est faible. Pour tenir compte de la teneur en TFA ou en eau présente dans l’échantillon, nous vous recommandons d'effectuer un test de teneur en peptide pour chaque peptide personnalisé.
Eau et acide trifluoroacétique (ATF) sont des sous-produits du processus de purification. Cependant, Le TFA peut soulever des problèmes de toxicité pour vivant et études précliniques. Donc, MOL Changes propose de l'acétate non toxique, chlorure, ou échangeurs de sel d'ammonium.
hy sont des peptides contenant du Cys, Rencontré, ou Trp difficile à synthétiser?
Peptides contenant du Cys, Rencontré, ou Trp sont difficiles à synthétiser et à obtenir des produits de haute pureté. Ceci est principalement dû à l'instabilité et à la susceptibilité à l'oxydation de ces groupes fonctionnels.. Une attention particulière est requise pour l'utilisation et le stockage de ces peptides afin d'éviter les ouvertures répétées des flacons..
Avons-nous raté votre question? Écrivez-nous et nous le ferons
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