자주 묻는 질문
밀리그램에서 킬로그램까지 간단하게 복잡하게
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How to store peptides?
동결건조된 펩티드
펩타이드의 장기 보관용, 고체 분말로 보관하는 것이 좋습니다.. 동결건조된 펩타이드는 분해를 최소화하면서 -20°C 이하에서 보관할 수 있습니다.. 고객은 맞춤형 펩타이드를 매번 재검사하는 것이 좋습니다. 2 품질 관리 출시일로부터 년.
용액 내 펩티드
용액 내 펩타이드는 덜 안정적이고 분해되기 쉽습니다.. 펩타이드를 용해하는 데 사용되는 수용액은 멸균되고 순수해야 합니다..
용액에, 일정량의 펩타이드가 분해될 수 있습니다., 서열에 존재하는 아미노산에 따라. 몇 가지 예가 아래에 나열되어 있습니다.:
– 메티오닌을 함유한 펩타이드, 시스테인 또는 트립토판 잔류물은 산화로 인해 용액 내 저장 시간이 제한되어야 합니다.. 이 펩타이드는 무산소 용매에 용해되어야 합니다.. –
글루타민과 아스파라긴은 글루탐산과 아스파르트산으로 탈아미드화될 수 있습니다., 각기. –
시스테인은 산화적 고리화를 거쳐 시스테인-시스테인 이황화물 결합을 형성할 수 있습니다. (이황화 결합 내 또는 사이에 형성될 수 있음). –
충전된 잔류물 (아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 히스티딘) 흡습성이 있다 (공기 중의 물을 흡수하다) 그리고 점성을 형성하는 경향이 있습니다, 맑은 기름. 이러한 물리적 변화는 펩타이드의 특성에 영향을 미치지 않을 수 있습니다.. 이러한 펩타이드는 동결건조하여 미량의 물을 제거하는 것이 좋습니다., 그런 다음 바이알에 수증기가 없는지 확인하기 위해 질소로 가스를 제거합니다., 그리고는 빨리 막혔어.
반복되는 동결과 해동으로 인한 손상을 방지하기 위해, 사용자는 현재 실험에 필요한 양의 펩타이드만 용해하는 것이 좋습니다.. 초과 용액은 ≥에 보관해야 합니다. -20 o 필요할 때까지 C.
습기를 피하세요.
수분은 펩타이드의 장기 안정성을 크게 감소시키기 때문에, 바이알을 열기 전에 데시케이터에 있는 펩타이드를 실온으로 평형화하는 것이 좋습니다.. 펩타이드 분주 완료 시, 튜브에 남아 있는 펩타이드는 무수 질소로 부드럽게 제거해야 합니다., 그러면 용기의 뚜껑을 닫아야 합니다, 밀봉 필름으로 밀봉, -20°C에서 보관.
다양한 펩타이드의 용해도 특성은 상당히 다양합니다.. 알라닌과 같은 잔류물 (알라), 시스테인 (사이스), 이소류신 (와 함께), 류신 (레우), 메티오닌 (만난), 페닐알라닌 (페), 그리고 발린 (발) 수용액에서 펩타이드의 소수성과 용해도를 증가시킵니다., 고객이 펩타이드를 맞춤화할 때 다음 지침을 따르는 것이 좋습니다..
용해도 특성
펩타이드의 용해도는 아미노산 서열에 따라 크게 달라집니다.. 천연 소수성 펩타이드 (에이, 에프, G, 다섯, 엘, 나, 중, 여, P 성향이 더 높음) 가용화를 위해 유기용매가 필요함. 산성 펩타이드 (D에 대한 성향이 더 높음, 펩타이드 서열의 E) 가용화를 위해서는 기본 수성 완충액이 필요합니다., 기본 펩타이드 (K에 대한 성향이 더 높음, 시간, 그리고 R) 가용화를 위해 산성 수성 완충액이 필요함.
용매 선택
분석의 한계를 고려하여, 펩타이드 용해에 가장 적합한 용매를 결정하려면 다음 지침을 사용하는 것이 좋습니다.
소수성 펩티드
소수성 펩타이드를 재용해화하려면, 추가하다 100 균질한 용액이 형성될 때까지 DMSO의 μL 및 초음파 처리. 다음, 원하는 버퍼를 추가하여 1 mg/mL 용액 (펩타이드 농도가 높을수록, 필요한 DMSO의 양이 많을수록).
친수성 (산성) 펩티드
산성 펩타이드를 재용해화하려면, 추가하다 100 µL의 1% NH 4 오 1 mg의 펩타이드와 소용돌이. 해결책이 명확해지면, 원하는 버퍼를 추가하여 1 mg/mL 용액.
친수성 (기초적인) 펩티드
기본 펩타이드를 재구성하려면, 증류수를 첨가하다 1 mg의 펩타이드와 소용돌이.
순 펩타이드 중량과 총 펩타이드 중량의 차이점은 무엇입니까?
업계 표준은 총 중량으로 동결건조된 형태로 펩타이드를 전달하는 것입니다.. 총 펩타이드 중량 동결건조된 분말에 존재하는 모든 성분의 총 중량입니다.. 여기에는 관심 있는 펩타이드가 포함됩니다., 모든 펩타이드 불순물, 물, 잔류용매, 그리고 반대이온.
반대로 그물 펩타이드 무게, 에서 계산 순 펩티드 함량, 의 무게이다 펩타이드만 동결건조된 분말에 존재하는 성분. 이는 후속 펩타이드 솔루션의 보다 정확한 농도를 제공합니다.. 따라서, 우리는 순 펩타이드 중량을 권장합니다. 맞춤형 펩타이드 명령.
순 펩타이드 함량 측정은 아미노산 분석에 의해 수행됩니다. (AAA; 정확도는 제한되어 있지만 재료의 양이 적습니다.) 또는 원소 분석 (중국; 밀리그램의 펩타이드가 필요하지만 더 정확합니다.). 두 방법 모두 백분율 값을 생성합니다. (즉., 75% 순 펩티드 함량).
순 펩타이드 함량은 존재하는 반대이온의 양에 따라 달라집니다*, 이는 펩타이드 서열에 따라 달라집니다.. 본질적으로, 펩타이드 전하가 높을수록, 펩타이드 함량이 낮을수록
*메모: 순 펩타이드 함량을 계산하는 데 사용되는 요소는 펩타이드 반대 이온을 기반으로 합니다.. 이는 반대 이온이 펩타이드 함량에 영향을 미치지 않도록 하기 위해 수행됩니다.. 예를 들어, TFA 또는 아세테이트가 반대이온인 경우, 질소는 펩타이드에서 발견되지만 TFA나 아세테이트에서는 발견되지 않기 때문에 사용됩니다.. 같은 이유로 염화물이 반대이온인 경우 탄소나 질소를 사용할 수 있습니다..
순 펩타이드 중량 계산:
순 펩타이드 수량 (총 펩티드) — 순 맞춤형 펩타이드 주문에 사용하는 방법.
네트 펩타이드 함량 백분율을 곱하세요 (십진수 형태) 펩타이드 총중량 기준, 순 펩타이드 수량을 얻기 위해 (총 펩티드).
예를 들어:
을 위한 5 mg 총 펩티드/바이알:
펩타이드 순 함량은 84%.
총 펩타이드의 정확한 양 = 0.84*5 mg = 총 펩티드 4.2 mg
관심 순 펩타이드 수량 - 가장 정확함 — 고객은 이 방법을 직접 사용하여 관심 있는 펩타이드를 계산할 수 있습니다..
펩타이드 총 중량에 순 펩타이드 함량 백분율을 곱합니다., 그리고 펩타이드 순도 (HPLC로), 보유하고 있는 관심 펩타이드의 정확한 양을 계산하기 위해. 순 펩타이드 백분율 (십진수 형태) 펩타이드 순도를 곱합니다. (십진수 형태).
예를 들어:
을 위한 5 mg 총 펩티드/바이알 포함:
펩타이드 순 함량은 84%.
관심 있는 펩타이드의 정확한 양은 = 0.84*0.96*5 mg=4.03mg
MOL Changes는 BOC 화학이 아닌 고체상 Fmoc 화학을 활용합니다.. Fmoc 화학을 사용하면 펩타이드 신장 중 온화한 조건을 사용하여 보호 그룹을 제거할 수 있습니다., BOC 화학에서는 펩타이드 신장 과정에서 보호 그룹을 제거하기 위해 강산을 사용해야 합니다.. 추가적으로, Fmoc 화학은 트리플루오로아세트산을 사용합니다. (TFA) 레진에서 펩타이드를 제거하기 위해, BOC 화학은 불산을 사용하는 반면 (HF). HF는 무색이다, 부식성이 강한, 그리고 접촉 독.
그러므로, MOL Changes는 보다 온화한 Fmoc 화학을 사용합니다., 유연한, BOC 화학에 비해 다재다능함.
몰농도는 용액의 몰 농도를 나타냅니다., 이는 용해된 용질의 몰수이다. 1 리터의 용액, mol/L로 표시, 또는 M.
몰농도 [중] = 질량 / (부피 x 몰 질량); 두더지 = 농도 (g/L) x 볼륨 (엘)/MW (g/몰)
예:
주어진: 1MW가 포함된 건조 펩타이드 분말 mg: 20KDa (펩타이드의 몰 질량은 20 g/몰)
알려진 질량과 알려진 부피로 몰농도를 결정하려면
이 펩타이드 1ml 용액의 경우:
몰농도 = 질량 (0.001g) / (용량 (0.001엘) x 몰 질량 (MW 20,000) = 50 μM
특정 몰 농도를 달성하기 위해 질량을 결정하려면:
귀하의 분석을 위한 경우, 물 1ml에 0.01mM의 작동 펩타이드 용액이 필요합니다., 다음과 같이 필요한 질량을 계산합니다.:
질량 = 몰농도 x 부피 x 몰질량
질량 = 0.01mM x (1/1000 엘) x 20,000g/mol = 0.0002g
따라서, 0.01mM의 작동 용액을 얻으려면 0.2mg/ml의 펩타이드가 필요합니다..
동결건조 또는 원료 분말 및 펩타이드 용액으로 제공합니다..
주어진 용매에서 펩타이드의 용해도는 아미노산 서열에 따라 달라지며 종종 예측하기 어렵습니다.. 카탈로그 펩타이드의 경우, 용해도 정보는 QC 데이터시트에 나와 있습니다.. 맞춤형 펩타이드용, 제목이 붙은 섹션을 참조하세요. “펩타이드를 어떻게 용해시켜야 합니까?”.
펩타이드 함량은 두 가지 별도의 측정이므로 펩타이드 순도를 나타내는 것은 아닙니다.. 순도는 분석용 HPLC로 결정되며 다른 펩티드 오염물질의 존재 여부를 나타냅니다. (즉. 잘린 펩티드).
순 펩타이드 함량에 따라 펩타이드의 실제 양이 결정됩니다. (관심 펩타이드 및 펩타이드 오염물질) 샘플에 존재. 순 펩타이드 함량은 전통적으로 아미노산 분석으로 측정됩니다. (AAA; 정확도는 제한적이지만 재료의 양이 적습니다.) 또는 원소 분석 (중국; 밀리그램의 펩타이드가 필요하지만 더 정확합니다.).
MOL Changes 펩타이드는 일반적으로 역상 분취 HPLC로 정제됩니다., 사용하여 2 다음을 포함하는 버퍼 0.1% 트리플루오로아세트산 (TFA). 첫 번째 버퍼 (버퍼 A) 으로 구성되어 있다 0.1 % 탈이온수 내 TFA 및 두 번째 완충액 (버퍼 B) 으로 구성되어 있다 0.1 % 아세토니트릴의 TFA (ACN).
일반적으로, 조 펩타이드는 먼저 완충액 A 용액에 용해됩니다., 버퍼 B 약간, 또는 DMSO와 같은 유기 극성 용매. 유기 극성 용매 또는 Buffer B를 사용한 경우, 이 투명한 용액은 먼저 완충액 A로 희석됩니다.. 다음, 펩타이드 용액을 여과하고 분취용 HPLC 시스템에 로딩합니다.. 최적화된 Method Gradient 활용, 그런 다음 흡광도 판독값을 기준으로 분수를 수집합니다.. 그런 다음 각 분획의 순도가 필수 순도 사양을 충족하는지 확인하기 위해 분석 HPLC를 통해 각 분획을 분석합니다..
그런 다음 이러한 "순수한" 분획을 함께 모으고 동결건조합니다.. 그런 다음 "순수한" 분말의 순도와 동일성을 테스트하여 올바른 펩타이드가 제조되었는지 확인합니다..
마지막으로, AnaSpec의 독립적인 QC 그룹은 모든 테스트 속성이 필수 사양을 충족하는지 확인하기 위해 펩타이드를 다시 테스트합니다..
시퀀스 말단에 사용되는 국제 명명법은 다음과 같습니다.:
– N 말단: H는 유리 아민을 의미합니다. (NH2-), Ac는 아세틸을 의미합니다. [CH3C(영형)-NH-], Pyr는 피로글루탐산을 의미합니다.
– C-말단: OH는 유리산을 의미합니다. (-쿠오), NH2는 아미드를 의미합니다. [-CONH2]
– 아미노산 측쇄의 변형은 해당 아미노산 뒤의 괄호 안에 표시됩니다.. 예를 들어; 인산화된 세린 = S(PO3H2) 또는 엡실론-N-아세틸화 라이신 = K(교류)
펩타이드 생산 중, 합성 및 정제 용액의 이온은 펩타이드의 하전된 아미노산 측쇄에 결합합니다., 소금을 형성하다. 이러한 이온은 펩타이드 반대이온으로 알려져 있으며 펩타이드 전하의 균형을 맞추는 데 도움이 됩니다..
트리플루오로아세트산 (TFA) 펩타이드 합성 및 정제에 일반적으로 사용됩니다..
염기성 아미노산과 트리플루오로아세트산 염을 형성합니다. (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘) 및 유리 N-말단 아민. 그러므로, 트리플루오로아세테이트는 일반적으로 기본 반대이온입니다..
펩타이드에 결합된 TFA 분자의 최소 수는 주어진 펩타이드 서열의 기본 잔기 수에 비례합니다.. 따라서, 펩타이드에 존재하는 더 기본적인 잔기, 동결건조된 분말의 순 펩타이드 함량이 낮을수록. 샘플에 존재하는 TFA 또는 수분 함량을 설명하려면, 모든 맞춤형 펩타이드에 대해 펩타이드 함량 분석을 수행하는 것이 좋습니다..
물과 트리플루오로아세트산 (TFA) 정제과정의 부산물이다.. 하지만, TFA는 다음에 대한 독성 문제를 일으킬 수 있습니다. 살아 있는 및 전임상 연구. 그러므로, MOL Changes는 무독성 아세테이트를 제공합니다., 염화물, 또는 암모늄염 교환기.
hy는 Cys를 함유한 펩타이드입니다., 만난, 또는 합성이 어려운 Trp?
Cys를 함유한 펩타이드, 만난, 또는 Trp는 고순도 제품을 합성하고 얻기가 어렵습니다.. 이는 주로 이러한 작용기의 불안정성과 산화에 대한 민감성 때문입니다.. 바이알을 반복적으로 개봉하지 않도록 이러한 펩타이드의 사용 및 보관에 특별한 주의가 필요합니다..
귀하의 질문이 누락되었나요?? 우리에게 전화를 걸어 그리고 우리는 할 것이다
이내로 돌아가다 24 시간.
