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लियोफिलाइज्ड पेप्टाइड्स

पेप्टाइड्स के दीर्घकालिक भंडारण के लिए, हम उन्हें ठोस पाउडर के रूप में संग्रहीत करने की सलाह देते हैं. लियोफिलाइज्ड पेप्टाइड्स को न्यूनतम गिरावट के साथ -20 डिग्री सेल्सियस या उससे कम तापमान पर संग्रहित किया जा सकता है. ग्राहकों को सलाह दी जाती है कि वे हर बार अनुकूलित पेप्टाइड्स का दोबारा निरीक्षण करें 2 गुणवत्ता नियंत्रण जारी होने की तिथि से वर्ष.

समाधान में पेप्टाइड्स

समाधान में पेप्टाइड्स कम स्थिर होते हैं और क्षरण की संभावना होती है. पेप्टाइड्स को घोलने के लिए उपयोग किया जाने वाला जलीय घोल निष्फल और शुद्ध होना चाहिए.

मिश्रण में, पेप्टाइड की एक निश्चित मात्रा का क्षरण हो सकता है, अनुक्रम में मौजूद अमीनो एसिड पर निर्भर करता है. कुछ उदाहरण नीचे सूचीबद्ध हैं:
– मेथियोनीन युक्त पेप्टाइड्स, ऑक्सीकरण के कारण सिस्टीन या ट्रिप्टोफैन अवशेषों का घोल में भंडारण समय सीमित होना चाहिए. इन पेप्टाइड्स को ऑक्सीजन मुक्त विलायक में घोलना चाहिए. –
ग्लूटामाइन और शतावरी को ग्लूटामिक एसिड और एसपारटिक एसिड में विघटित किया जा सकता है, क्रमश:. –
सिस्टीन एक सिस्टीन-सिस्टीन डाइसल्फ़ाइड बंधन बनाने के लिए ऑक्सीडेटिव चक्रण से गुजर सकता है (जो डाइसल्फ़ाइड बांड के भीतर या उनके बीच बन सकता है). –
आवेशित अवशेष (एसपारटिक अम्ल, ग्लुटामिक एसिड, लाइसिन, arginine, हिस्टडीन) हीड्रोस्कोपिक हैं (हवा से पानी को अवशोषित करना) और एक चिपचिपा पदार्थ बनाने की प्रवृत्ति रखते हैं, साफ़ तेल. यह भौतिक परिवर्तन पेप्टाइड की प्रकृति को प्रभावित नहीं कर सकता है. यह अनुशंसा की जाती है कि पानी की थोड़ी मात्रा को हटाने के लिए ऐसे पेप्टाइड्स को लियोफिलाइज़ किया जाए, फिर यह सुनिश्चित करने के लिए कि शीशी में कोई जलवाष्प न हो, नाइट्रोजन से विघटित किया गया, और फिर जल्दी से बंद कर दिया गया.

बार-बार जमने और पिघलने से होने वाले नुकसान को रोकने के लिए, हम अनुशंसा करते हैं कि उपयोगकर्ता केवल वर्तमान प्रयोग के लिए आवश्यक पेप्टाइड की मात्रा को ही घोलें. अतिरिक्त घोल को ≥ पर संग्रहित किया जाना चाहिए -20 o C आवश्यकता पड़ने तक.

नमी से बचें.
चूंकि नमी पेप्टाइड्स की दीर्घकालिक स्थिरता को काफी कम कर देती है, हम शीशियों को खोलने से पहले पेप्टाइड्स को डेसीकेटर में कमरे के तापमान पर संतुलित करने की सलाह देते हैं. पेप्टाइड वितरण पूरा होने पर, ट्यूब में शेष पेप्टाइड्स को निर्जल नाइट्रोजन से धीरे से शुद्ध किया जाना चाहिए, फिर कंटेनर को ढक देना चाहिए, सीलिंग फिल्म से सील किया गया, और -20°C पर संग्रहित किया जाता है.

आप पेप्टाइड्स को कैसे घोलते हैं?

विभिन्न पेप्टाइड्स की घुलनशीलता विशेषताएँ काफी भिन्न होती हैं. अलैनिन जैसे अवशेष (अला), सिस्टीन (सीआईएस), आइसोल्यूसीन (साथ), ल्यूसीन (लियू), मेथिओनिन (मिले), फेनिलएलनिन (पीएचई), और वेलिन (वैल) जलीय घोल में पेप्टाइड की हाइड्रोफोबिसिटी और घुलनशीलता को जोड़ें, और यह अनुशंसा की जाती है कि ग्राहक पेप्टाइड्स को अनुकूलित करते समय इन दिशानिर्देशों का पालन करें.

घुलनशीलता गुण

पेप्टाइड्स की घुलनशीलता अमीनो एसिड अनुक्रम पर अत्यधिक निर्भर है. स्वाभाविक रूप से हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स (ए, एफ, जी, वी, एल, मैं, एम, डब्ल्यू, उच्च प्रवृत्ति वाले पी) घुलनशीलता के लिए कार्बनिक विलायकों की आवश्यकता होती है. अम्लीय पेप्टाइड्स (डी के प्रति उच्च प्रवृत्ति, पेप्टाइड अनुक्रम में ई) घुलनशीलता के लिए बुनियादी जलीय बफ़र्स की आवश्यकता होती है, जबकि बुनियादी पेप्टाइड्स (K के प्रति उच्च प्रवृत्ति, एच, और आर) घुलनशीलता के लिए अम्लीय जलीय बफ़र्स की आवश्यकता होती है.

विलायक चयन

आपके परख की सीमाओं को देखते हुए, हम पेप्टाइड्स को घुलनशील बनाने के लिए सर्वोत्तम विलायक निर्धारित करने के लिए निम्नलिखित दिशानिर्देशों का उपयोग करने की सलाह देते हैं

हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स

हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स को फिर से घुलनशील बनाने के लिए, जोड़ना 100 एक सजातीय समाधान बनने तक डीएमएसओ और सोनिकेट का μL. अगला, बनाने के लिए अपनी पसंद का बफ़र जोड़ें 1 एमजी/एमएल समाधान (पेप्टाइड सांद्रता जितनी अधिक होगी, डीएमएसओ की मात्रा जितनी अधिक होगी).

हाइड्रोफिलिक (अम्लीय) पेप्टाइड्स

अम्लीय पेप्टाइड्स को पुनः घुलनशील बनाने के लिए, जोड़ना 100 μL का 1% राष्ट्रीय राजमार्ग 4 ओह से 1 पेप्टाइड और भंवर के मिलीग्राम. एक बार समाधान स्पष्ट हो जाए, बनाने के लिए अपनी पसंद का बफ़र जोड़ें 1 एमजी/एमएल समाधान.

हाइड्रोफिलिक (बुनियादी) पेप्टाइड्स

एक बुनियादी पेप्टाइड का पुनर्गठन करना, इसमें आसुत जल मिलाएं 1 पेप्टाइड और भंवर के मिलीग्राम.

शुद्ध बनाम सकल पेप्टाइड भार के बीच क्या अंतर है??

उद्योग का मानक पेप्टाइड्स को सकल वजन के रूप में लियोफिलाइज्ड रूप में वितरित करना है. सकल पेप्टाइड वजन लियोफिलाइज्ड पाउडर में मौजूद सभी घटकों का कुल वजन है. इसमें ब्याज का पेप्टाइड शामिल है, कोई भी पेप्टाइड अशुद्धियाँ, पानी, अवशिष्ट विलायक, और प्रतिवाद.

इसके विपरीत जाल पेप्टाइड वजन, से गणना की गई नेट पेप्टाइड सामग्री, का वजन है केवल पेप्टाइड लियोफिलाइज्ड पाउडर में मौजूद घटक. यह आपके बाद के पेप्टाइड समाधानों की अधिक सटीक सांद्रता प्रदान करता है. इस तरह, हमने शुद्ध पेप्टाइड वजन मात्रा की अनुशंसा की है कस्टम पेप्टाइड आदेश.

नेट पेप्टाइड सामग्री माप अमीनो एसिड विश्लेषण द्वारा किया जाता है (एएए; सीमित सटीकता लेकिन कम सामग्री मात्रा की आवश्यकता होती है) या तात्विक विश्लेषण (सीएचएन; इसके लिए मिलीग्राम पेप्टाइड की आवश्यकता होती है लेकिन यह अधिक सटीक है). दोनों विधियों से प्रतिशत मान प्राप्त होता है (यानी., 75% शुद्ध पेप्टाइड सामग्री).

नेट पेप्टाइड सामग्री मौजूद काउंटरियन की मात्रा पर निर्भर करती है*, जो पेप्टाइड अनुक्रम पर निर्भर है. अनिवार्य रूप से, पेप्टाइड चार्ज जितना अधिक होगा, पेप्टाइड सामग्री जितनी कम होगी

*टिप्पणी: शुद्ध पेप्टाइड सामग्री की गणना करने के लिए उपयोग किया जाने वाला तत्व पेप्टाइड काउंटर-आयन पर आधारित है. यह सुनिश्चित करने के लिए किया जाता है कि काउंटर-आयन पेप्टाइड सामग्री मात्रा में योगदान नहीं करता है. उदाहरण के लिए, जब टीएफए या एसीटेट प्रति-आयन हों, नाइट्रोजन का उपयोग किया जाता है क्योंकि यह पेप्टाइड में पाया जाता है लेकिन टीएफए या एसीटेट में नहीं. जब क्लोराइड इसी कारण से प्रतिआयन हो तो कार्बन या नाइट्रोजन का उपयोग किया जा सकता है.

शुद्ध पेप्टाइड वजन गणना:

नेट पेप्टाइड मात्रा (कुल पेप्टाइड) - वह विधि जिसका उपयोग हम नेट कस्टम पेप्टाइड ऑर्डर के लिए करते हैं.

नेट पेप्टाइड सामग्री प्रतिशत को गुणा करें (दशमलव रूप) पेप्टाइड सकल वजन द्वारा, नेट पेप्टाइड मात्रा की मात्रा प्राप्त करने के लिए (कुल पेप्टाइड).

उदाहरण के लिए:
के लिए 5 एमजी सकल पेप्टाइड/शीशी:
पेप्टाइड शुद्ध सामग्री है 84%.
कुल पेप्टाइड की सटीक मात्रा = 0.84*5 मिलीग्राम=4.2 मिलीग्राम कुल पेप्टाइड

ब्याज की शुद्ध पेप्टाइड मात्रा-सबसे सटीक - ब्याज के पेप्टाइड की गणना के लिए ग्राहक स्वयं इस पद्धति का उपयोग कर सकते हैं.

शुद्ध पेप्टाइड सामग्री प्रतिशत को पेप्टाइड सकल वजन से गुणा करें, और पेप्टाइड शुद्धता (एचपीएलसी द्वारा), आपकी रुचि के पेप्टाइड की सटीक मात्रा की गणना करने के लिए. शुद्ध पेप्टाइड प्रतिशत (दशमलव रूप) पेप्टाइड शुद्धता से गुणा किया जाता है (दशमलव रूप).

उदाहरण के लिए:
के लिए 5 एमजी सकल पेप्टाइड/शीशी के साथ:
पेप्टाइड शुद्ध सामग्री है 84%.
ब्याज के पेप्टाइड की सटीक मात्रा = है 0.84*0.96*5 मिलीग्राम=4.03 मिलीग्राम

आप किस प्रकार की रसायन शास्त्र का उपयोग करते हैं?

एमओएल परिवर्तन बीओसी रसायन शास्त्र के बजाय ठोस चरण एफएमओसी रसायन शास्त्र का उपयोग करता है. एफएमओसी रसायन पेप्टाइड बढ़ाव के दौरान हल्की स्थितियों का उपयोग करके सुरक्षात्मक समूहों को हटाने की अनुमति देता है, जबकि बीओसी रसायन विज्ञान को पेप्टाइड बढ़ाव के दौरान सुरक्षा समूहों को हटाने के लिए एक मजबूत एसिड के उपयोग की आवश्यकता होती है. इसके अतिरिक्त, Fmoc रसायन शास्त्र ट्राइफ्लूरोएसेटिक एसिड का उपयोग करता है (टीएफए) राल से पेप्टाइड निकालने के लिए, जबकि बीओसी रसायन विज्ञान हाइड्रोफ्लोरिक एसिड का उपयोग करता है (एचएफ). एचएफ रंगहीन है, अत्यधिक संक्षारक, और एक संपर्क जहर.

इसलिए, एमओएल परिवर्तन एफएमओसी रसायन विज्ञान को नियोजित करता है क्योंकि यह अधिक हल्का है, लचीला, और बीओसी रसायन विज्ञान की तुलना में बहुमुखी है.

मैं अपने पेप्टाइड की मोलरता की गणना कैसे करूँ??

मोलरिटी किसी घोल की मोलर सांद्रता को संदर्भित करती है, जो कि घुले हुए विलेय के मोलों की संख्या है 1 घोल का लीटर, mol/L के रूप में व्यक्त किया गया, या एम.

मोलरिटी [एम] = द्रव्यमान / (आयतन x मोलर द्रव्यमान); तिल = एकाग्रता (जी/एल) x वॉल्यूम (एल)/मेगावाट (जी/मोल)

उदाहरण:
दिया गया: 1मेगावाट के साथ मिलीग्राम सूखा पेप्टाइड पाउडर: 20केडीए (पेप्टाइड का मोलर द्रव्यमान है 20 जी/मोल)
ज्ञात द्रव्यमान और ज्ञात आयतन के साथ मोलरता निर्धारित करना
इस पेप्टाइड के 1 मिलीलीटर समाधान के लिए:
मोलरिटी = द्रव्यमान (0.001जी) / (आयतन (0.001एल) x मोलर द्रव्यमान (मेगावाट 20,000) = 50 µM

एक निश्चित दाढ़ प्राप्त करने के लिए द्रव्यमान का निर्धारण करना:
यदि आपके परख के लिए, आपको 1ml पानी में 0.01mM कार्यशील पेप्टाइड घोल की आवश्यकता है, फिर निम्नानुसार आवश्यक द्रव्यमान की गणना करें:

द्रव्यमान = मोलरता x आयतन x मोलर द्रव्यमान
द्रव्यमान = 0.01mM x (1/1000 एल) x 20,000 ग्राम/मोल = 0.0002 ग्राम

इस तरह, 0.01mM का कार्यशील समाधान प्राप्त करने के लिए आपको 0.2mg/ml पेप्टाइड की आवश्यकता होगी.

पेप्टाइड्स किस रूप में वितरित किये जाते हैं??

हम लियोफिलिज्ड या कच्चे पाउडर और पेप्टाइड समाधान के रूप में वितरित करते हैं.

मुझे कैसे पता चलेगा कि मेरा पेप्टाइड घुलनशील होगा??

किसी दिए गए विलायक में पेप्टाइड की घुलनशीलता अमीनो एसिड अनुक्रम पर निर्भर होती है और अक्सर भविष्यवाणी करना कठिन होता है. कैटलॉग पेप्टाइड्स के मामले में, घुलनशीलता जानकारी QC डेटाशीट पर सूचीबद्ध है. कस्टम पेप्टाइड्स के लिए, कृपया शीर्षक वाला अनुभाग देखें “मुझे अपने पेप्टाइड को कैसे घुलनशील बनाना चाहिए?”.

पेप्टाइड सामग्री और पेप्टाइड शुद्धता के बीच क्या अंतर है?

पेप्टाइड सामग्री पेप्टाइड शुद्धता का संकेत नहीं है क्योंकि ये दो अलग-अलग माप हैं. शुद्धता विश्लेषणात्मक एचपीएलसी द्वारा निर्धारित की जाती है और अन्य पेप्टिडिक संदूषकों की उपस्थिति/अनुपस्थिति को इंगित करती है (यानी. कटे हुए पेप्टाइड्स).

शुद्ध पेप्टाइड सामग्री पेप्टाइड की वास्तविक मात्रा निर्धारित करती है (रुचि के पेप्टाइड के साथ-साथ पेप्टाइड संदूषक भी) नमूने में मौजूद है. शुद्ध पेप्टाइड सामग्री पारंपरिक रूप से अमीनो एसिड विश्लेषण द्वारा मापी जाती है (एएए; सीमित सटीकता लेकिन कम मात्रा में सामग्री की आवश्यकता होती है) या तात्विक विश्लेषण (सीएचएन; इसके लिए मिलीग्राम पेप्टाइड की आवश्यकता होती है लेकिन यह अधिक सटीक है).

आप आम तौर पर अपने पेप्टाइड्स को कैसे शुद्ध करते हैं??

एमओएल परिवर्तन पेप्टाइड्स को आम तौर पर रिवर्स-चरण प्रारंभिक एचपीएलसी द्वारा शुद्ध किया जाता है, का उपयोग करते हुए 2 बफ़र्स युक्त 0.1% ट्री फ्लुओरो असेटिक अमल (टीएफए). पहला बफ़र (बफ़र ए) से बना है 0.1 % विआयनीकृत पानी में टीएफए और दूसरा बफर (बफ़र बी) से बना है 0.1 % एसीटोनिट्राइल में टीएफए (एसीएन).

आम तौर पर, क्रूड पेप्टाइड्स को पहले बफ़र ए के घोल में घोला जाता है, बफ़र बी की कुछ मात्रा, या डीएमएसओ जैसा कार्बनिक ध्रुवीय विलायक. यदि कार्बनिक ध्रुवीय विलायक या बफर बी का उपयोग किया गया था, इस स्पष्ट घोल को पहले बफ़र ए के साथ पतला किया जाएगा. अगला, पेप्टिडिक समाधान को फ़िल्टर किया जाता है और प्रारंभिक एचपीएलसी प्रणाली पर लोड किया जाता है. एक अनुकूलित विधि ग्रेडिएंट का उपयोग करना, फिर अवशोषण रीडिंग के आधार पर अंश एकत्र किए जाते हैं. फिर प्रत्येक अंश का एक विश्लेषणात्मक एचपीएलसी के माध्यम से विश्लेषण किया जाता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि प्रत्येक अंश की शुद्धता आवश्यक शुद्धता विनिर्देश को पूरा करती है.

फिर इन "शुद्ध" अंशों को एक साथ एकत्रित किया जाता है और लियोफ़िलाइज़ किया जाता है. यह सुनिश्चित करने के लिए कि सही पेप्टाइड का निर्माण किया गया है, "शुद्ध" पाउडर की शुद्धता और पहचान दोनों के लिए परीक्षण किया जाता है.

अंत में, एनास्पेक में एक स्वतंत्र क्यूसी समूह फिर से पेप्टाइड का परीक्षण करता है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि सभी परीक्षण विशेषताएँ आवश्यक विनिर्देशों को पूरा करती हैं.

मैं अपना पेप्टाइड अनुक्रम टर्मिनी कैसे लिखूं??

अनुक्रम टर्मिनी के लिए प्रयुक्त अंतर्राष्ट्रीय नामकरण इस प्रकार है:

– N- टर्मिनस: एच का मतलब फ्री अमीन है (NH2-), एसी का मतलब एसिटाइल है [CH3C(हे)-एनएच-], पीर का अर्थ है पायरोग्लुटामिक एसिड
– सी टर्मिनल: OH का अर्थ है मुक्त अम्ल (-कूह), NH2 का अर्थ है एमाइड [-CONH2]

– अमीनो एसिड की साइड चेन पर संशोधन को संबंधित अमीनो एसिड के बाद कोष्ठक में दर्शाया गया है. उदाहरण के लिए; फॉस्फोराइलेटेड सेरीन = एस(PO3H2) या एप्सिलॉन-एन-एसिटिलेटेड लाइसिन = के(ए.सी)

पेप्टाइड काउंटरन क्या है?

पेप्टाइड उत्पादन के दौरान, संश्लेषण और शुद्धिकरण समाधान में आयन पेप्टाइड के आवेशित अमीनो एसिड साइड चेन से जुड़ते हैं, लवण बनाना. इन आयनों को पेप्टाइड काउंटरऑन के रूप में जाना जाता है और पेप्टाइड के चार्ज को संतुलित करने में मदद करते हैं.

ट्री फ्लुओरो असेटिक अमल (टीएफए) आमतौर पर पेप्टाइड संश्लेषण और शुद्धिकरण में उपयोग किया जाता है.

यह मूल अमीनो एसिड के साथ ट्राइफ्लूरोएसेटेट लवण बनाता है (जैसे, लाइसिन, arginine, हिस्टडीन) और मुफ़्त एन-टर्मिनल अमीन. इसलिए, ट्राइफ्लूरोएसेटेट आमतौर पर डिफ़ॉल्ट काउंटरियन है.

पेप्टाइड से बंधे टीएफए अणुओं की न्यूनतम संख्या किसी दिए गए पेप्टाइड अनुक्रम में मूल अवशेषों की संख्या के समानुपाती होती है. इस प्रकार, पेप्टाइड में मौजूद अधिक बुनियादी अवशेष, लियोफिलिज्ड पाउडर की शुद्ध पेप्टाइड सामग्री जितनी कम होगी. नमूने में मौजूद टीएफए या पानी की मात्रा को ध्यान में रखना, हम प्रत्येक कस्टम पेप्टाइड के लिए पेप्टाइड सामग्री परख करने की अनुशंसा करते हैं.

पानी और ट्राइफ्लोरोएसिटिक एसिड (टीएफए) शुद्धिकरण प्रक्रिया के उप-उत्पाद हैं. तथापि, टीएफए विषाक्तता संबंधी चिंताएं बढ़ा सकता है जीवित और प्रीक्लिनिकल अध्ययन. इसलिए, एमओएल चेंजेस गैर विषैले एसीटेट प्रदान करता है, क्लोराइड, या अमोनियम नमक एक्सचेंजर्स.

Cys युक्त पेप्टाइड्स क्यों हैं?, मिले, या टीआरपी को संश्लेषित करना कठिन है?

Cys युक्त पेप्टाइड्स, मिले, या टीआरपी उच्च शुद्धता वाले उत्पादों को संश्लेषित करना और प्राप्त करना चुनौतीपूर्ण है. यह मुख्य रूप से इन कार्यात्मक समूहों की अस्थिरता और ऑक्सीकरण के प्रति संवेदनशीलता के कारण है. शीशियों को बार-बार खोलने से बचने के लिए इन पेप्टाइड्स के उपयोग और भंडारण पर विशेष ध्यान देने की आवश्यकता है.

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