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How to store peptides?
冻干肽
用于肽的长期储存, 我们建议将它们储存为固体粉末. 冻干肽可在 -20°C 或更低温度下保存，降解程度最低. 建议客户每隔一段时间重新检查定制的肽 2 自质量控制发布之日起的年数.
溶液中的肽
溶液中的肽不稳定且容易降解. 用于溶解肽的水溶液应无菌且纯净.
溶液中, 一定量的肽可能被降解, 取决于序列中存在的氨基酸. 下面列出了一些示例:
– 含有蛋氨酸的肽, 由于氧化，半胱氨酸或色氨酸残留物在溶液中的储存时间应有限. 这些肽应溶解在无氧溶剂中. –
谷氨酰胺和天冬酰胺可脱酰胺为谷氨酸和天冬氨酸, 分别. –
半胱氨酸可以发生氧化环化形成半胱氨酸-半胱氨酸二硫键 (它可以在二硫键内部或之间形成). –
带电残基 (天冬氨酸, 谷氨酸, 赖氨酸, 精氨酸, 组氨酸) 具有吸湿性 (从空气中吸收水分) 并且容易形成粘稠状, 清油. 这种物理变化可能不会影响肽的性质. 建议将此类肽冻干以除去微量的水, 然后用氮气脱气，确保小瓶内没有水蒸气, 然后迅速封顶.
防止反复冻融造成损坏, 我们建议用户仅溶解当前实验所需的肽量. 过量溶液应储存于≥ -20 o C 直到需要为止.
避免潮湿.
由于水分会显着降低肽的长期稳定性, 我们建议在打开小瓶之前将干燥器中的肽平衡至室温. 肽分配完成后, 应使用无水氮气轻轻吹扫管中剩余的肽, 然后容器应该盖上, 用密封膜密封, 并储存于-20°C.
不同肽的溶解度特性差异很大. 丙氨酸等残留物 (翼), 半胱氨酸 (半胱氨酸), 异亮氨酸 (和), 亮氨酸 (亮氨酸), 蛋氨酸 (蛋氨酸), 苯丙氨酸 (苯丙氨酸), 和缬氨酸 (瓦尔) 增加肽在水溶液中的疏水性和溶解度, 建议客户在定制多肽时遵循这些指南.
溶解度特性
肽的溶解度高度依赖于氨基酸序列. 天然疏水性肽 (一个, F, G, V, L, 我, 中号, 瓦, P 倾向较高) 需要有机溶剂来溶解. 酸性肽 (更高的 D 倾向, 肽序列中的E) 需要碱性水性缓冲液进行溶解, 而碱性肽 (更高的 K 倾向, H, 和R) 需要酸性水缓冲液来溶解.
溶剂选择
鉴于您的检测的局限性, 我们建议使用以下指南来确定溶解肽的最佳溶剂
疏水性肽
重新溶解疏水性肽, 添加 100 µL DMSO 并超声直至形成均匀溶液. 下一个, 添加您选择的缓冲区以制作 1 毫克/毫升溶液 (肽浓度越高, 所需的 DMSO 量越大).
亲水性 (酸性) 肽
重新溶解酸性肽, 添加 100 µL 的 1% NH 4 哦到 1 毫克肽和涡旋. 一旦解决方案明确, 添加您选择的缓冲区以制作 1 毫克/毫升溶液.
亲水性 (基本的) 肽
重建基本肽, 添加蒸馏水至 1 毫克肽和涡旋.
行业标准是以冻干形式提供肽作为总重. 肽总重 是冻干粉末中存在的所有成分的总重量. 这包括感兴趣的肽, 任何肽杂质, 水, 残留溶剂, 和抗衡离子.
相反 网 肽重量, 计算自 净肽含量, 是的重量 只有肽 冻干粉中存在的成分. 这为您的后续肽溶液提供了更准确的浓度. 因此, 我们推荐的净肽重量为 定制肽 订单.
净肽含量 通过氨基酸分析进行测量 (AAA; 精度有限，但需要的材料量较低) 或元素分析 (中国; 需要毫克肽但更准确). 两种方法都会产生百分比值 (IE。, 75% 净肽含量).
净肽含量取决于存在的抗衡离子的量*, 这取决于肽序列. 本质上, 肽电荷越高, 肽含量越低
*笔记: 用于计算净肽含量的元素基于肽抗衡离子. 这样做是为了确保抗衡离子不会影响肽含量. 例如, 当 TFA 或醋酸盐为反离子时, 使用氮是因为它存在于肽中，但不存在于 TFA 或乙酸盐中. 出于同样的原因，当氯离子是抗衡离子时，可以使用碳或氮.
肽净重计算:
净肽量 (总肽) — 我们用于净定制肽订单的方法.
乘以净肽含量百分比 (小数形式) 按肽总重, 获得净肽量 (总肽).
例如:
为了 5 毫克总肽/瓶:
肽净含量为 84%.
总肽的精确量= 0.84*5 mg=4.2 mg 总肽
感兴趣的净肽数量——最准确 — 客户可以自行使用此方法来计算感兴趣的肽.
将净肽含量百分比乘以肽总重量, 和肽纯度 (高效液相色谱法), 计算您感兴趣的肽的准确数量. 净肽百分比 (小数形式) 乘以肽纯度 (小数形式).
例如:
为了 5 毫克总肽/瓶:
肽净含量为 84%.
感兴趣的肽的精确量为 = 0.84*0.96*5 毫克=4.03毫克
MOL Changes 采用固相 Fmoc 化学而不是 BOC 化学. Fmoc 化学允许在肽延伸过程中使用温和条件去除保护基团, 而 BOC 化学则需要在肽延伸过程中使用强酸去除保护基团. 此外, Fmoc 化学利用三氟乙酸 (三氟乙酸) 从树脂中去除肽, 而 BOC 化学则使用氢氟酸 (高频). HF无色, 高腐蚀性, 和接触性毒物.
所以, MOL Changes 采用 Fmoc 化学物质，因为它更温和, 灵活的, 与 BOC 化学相比，用途广泛.
摩尔浓度是指溶液的摩尔浓度, 这是溶解在其中的溶质的摩尔数 1 升溶液, 表示为摩尔/升, 或中号.
摩尔浓度 [中号] = 质量 / (体积 x 摩尔质量); 摩尔 = 浓度 (克/升) x 体积 (L)/兆瓦 (克/摩尔)
例子:
给定: 1毫克干肽粉末（MW）: 20克达 (肽的摩尔质量是 20 克/摩尔)
测定已知质量和已知体积的摩尔浓度
对于 1ml 该肽溶液:
摩尔浓度 = 质量 (0.001克) / (体积 (0.001L) x 摩尔质量 (兆瓦 20,000) = 50 µM
确定达到一定摩尔浓度的质量:
如果您的分析, 您需要 1ml 水中的 0.01mM 工作肽溶液, 然后计算所需的质量如下:
质量 = 摩尔浓度 x 体积 x 摩尔质量
质量 = 0.01mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0.0002g
因此, 您需要 0.2mg/ml 的肽才能获得 0.01mM 的工作溶液.
我们以冻干粉或生粉和肽溶液的形式提供.
肽在给定溶剂中的溶解度取决于氨基酸序列，并且通常很难预测. 对于目录肽, 溶解度信息列于 QC 数据表中. 对于定制肽, 请参阅标题为的部分 “我应该如何溶解我的肽”.
肽含量并不代表肽纯度，因为这是两个单独的测量结果. 纯度通过分析型 HPLC 测定，表明是否存在其他肽污染物 (IE. 截短肽).
净肽含量决定了肽的实际含量 (感兴趣的肽以及肽污染物) 存在于样品中. 净肽含量传统上通过氨基酸分析来测量 (AAA; 精度有限，但需要的材料量很少) 或元素分析 (中国; 需要毫克肽但更准确).
MOL Changes 肽通常通过反相制备型 HPLC 纯化, 使用 2 缓冲区包含 0.1% 三氟乙酸 (三氟乙酸). 第一个缓冲区 (缓冲液A) 是由 0.1 % TFA 去离子水和第二缓冲液 (缓冲液B) 是由 0.1 % TFA 乙腈溶液 (乙腈).
一般来说, 首先将粗肽溶解在缓冲液 A 的溶液中, 一定量的缓冲液B, 或有机极性溶剂如DMSO. 如果使用有机极性溶剂或缓冲液 B, 该澄清溶液首先用缓冲液 A 稀释. 下一个, 将肽溶液过滤并加载到制备型 HPLC 系统上. 利用优化的方法梯度, 然后根据吸光度读数收集分数. 然后通过分析型 HPLC 分析每个馏分，以确保每个馏分的纯度符合所需的纯度规格.
然后将这些“纯”级分合并在一起并冻干. 然后对“纯”粉末进行纯度和特性测试，以确保生产出正确的肽.
最后, AnaSpec 的独立 QC 小组再次测试肽，以确保所有测试属性均符合要求的规格.
序列末端使用的国际命名法如下:
– N-末端: H表示游离胺 (氨气-), Ac表示乙酰基 [三氯甲烷(氧)-NH-], Pyr表示焦谷氨酸
– C端: OH表示游离酸 (-羟基), NH2 表示酰胺 [-羟基苯甲酸]
– 氨基酸侧链上的修饰在相应氨基酸后面的括号中描述. 例如; 磷酸化丝氨酸 = S(PO3H2) 或ε-N-乙酰化赖氨酸 = K(乙酰胆碱)
在肽生产过程中, 合成和纯化溶液中的离子与肽的带电荷氨基酸侧链结合, 形成盐. 这些离子被称为肽抗衡离子，有助于平衡肽的电荷.
三氟乙酸 (三氟乙酸) 常用于肽合成和纯化.
与碱性氨基酸形成三氟乙酸盐 (例如, 赖氨酸, 精氨酸, 组氨酸) 和游离的N端胺. 所以, 三氟乙酸根通常是默认的抗衡离子.
与肽结合的 TFA 分子的最小数量与给定肽序列中碱性残基的数量成正比. 因此, 肽中存在的碱性残基越多, 冻干粉的净肽含量越低. 考虑样品中存在的 TFA 或水含量, 我们建议对每个定制肽进行肽含量测定.
水和三氟乙酸 (三氟乙酸) 是纯化过程的副产品. 然而, TFA 可能会引起毒性问题 活 和临床前研究. 所以, MOL Changes 提供无毒醋酸盐, 氯化物, 或铵盐交换剂.
含半胱氨酸的肽, 蛋氨酸, 或色氨酸的合成和获得高纯度产品具有挑战性. 这主要是由于这些官能团的不稳定性和易氧化性. 这些肽的使用和储存需要特别注意，以避免重复打开小瓶.
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