Často kladené otázky
Jednoducho na komplex od miligramov po kilogramy
Custom Quote Request
How to store peptides?
Lyofilizované peptidy
Na dlhodobé skladovanie peptidov, odporúčame ich skladovať ako tuhý prášok. Lyofilizované peptidy možno skladovať pri -20 °C alebo nižšej s minimálnou degradáciou. Zákazníkom sa odporúča, aby znovu skontrolovali prispôsobené peptidy 2 rokov od dátumu uvoľnenia kontroly kvality.
Peptidy v roztoku
Peptidy v roztoku sú menej stabilné a náchylné na degradáciu. Vodné roztoky používané na rozpustenie peptidov by mali byť sterilné a čisté.
V riešení, určité množstvo peptidu môže byť degradované, v závislosti od aminokyselín prítomných v sekvencii. Niektoré príklady sú uvedené nižšie:
– Peptidy obsahujúce metionín, cysteínové alebo tryptofánové zvyšky by mali mať obmedzený čas skladovania v roztoku z dôvodu oxidácie. Tieto peptidy by mali byť rozpustené v rozpúšťadle bez kyslíka. –
Glutamín a asparagín môžu byť deamidované na kyselinu glutámovú a kyselinu asparágovú, resp. –
Cysteín môže podstúpiť oxidačnú cyklizáciu za vzniku cysteín-cysteínovej disulfidovej väzby (ktoré môžu byť vytvorené v rámci alebo medzi disulfidovými väzbami). –
Nabité zvyšky (kyselina asparágová, kyselina glutámová, lyzín, arginín, histidín) sú hygroskopické (absorbovanie vody zo vzduchu) a majú tendenciu vytvárať viskózne, číry olej. Táto fyzikálna zmena nemusí ovplyvniť povahu peptidu. Odporúča sa, aby sa takéto peptidy lyofilizovali, aby sa odstránili stopové množstvá vody, potom sa odplyní dusíkom, aby sa zabezpečilo, že v liekovke nie je žiadna vodná para, a potom rýchlo uzatvorili.
Aby nedošlo k poškodeniu pri opakovanom zmrazovaní a rozmrazovaní, odporúčame, aby používatelia rozpustili len také množstvo peptidu, ktoré je potrebné pre aktuálny experiment. Prebytočný roztok sa má skladovať pri ≥ -20 o C, kým to nebude potrebné.
Vyhnite sa vlhkosti.
Pretože vlhkosť výrazne znižuje dlhodobú stabilitu peptidov, pred otvorením liekoviek odporúčame uviesť peptidy do rovnováhy v exsikátore na izbovú teplotu. Po dokončení dávkovania peptidu, zostávajúce peptidy v skúmavke by sa mali jemne prepláchnuť bezvodým dusíkom, potom by mala byť nádoba uzavretá, zapečatené tesniacou fóliou, a skladované pri -20 °C.
Charakteristiky rozpustnosti rôznych peptidov sa značne líšia. Zvyšky ako alanín (Ala), cysteín (Cys), izoleucín (s), leucín (Leu), metionín (Met), fenylalanín (Phe), a valín (Val) pridať k hydrofóbnosti a rozpustnosti peptidu vo vodných roztokoch, a odporúča sa, aby sa zákazník pri úprave peptidov riadil týmito pokynmi.
Vlastnosti rozpustnosti
Rozpustnosť peptidov je vysoko závislá od aminokyselinovej sekvencie. Prirodzene hydrofóbne peptidy (A, F, G, V, L, ja, M, W, P s vyšším sklonom) vyžadujú organické rozpúšťadlá na solubilizáciu. Kyslé peptidy (vyšší sklon k D, E v peptidovej sekvencii) vyžadujú na solubilizáciu zásadité vodné pufre, kým zásadité peptidy (vyšší sklon ku K, H, a R) vyžadujú na solubilizáciu kyslé vodné pufry.
Výber rozpúšťadla
Vzhľadom na obmedzenia vášho testu, na určenie najlepšieho rozpúšťadla na solubilizáciu peptidov odporúčame použiť nasledujúce pokyny
Hydrofóbne peptidy
Na opätovné rozpustenie hydrofóbnych peptidov, pridať 100 ul DMSO a sonikujte, kým sa nevytvorí homogénny roztok. Ďalej, pridajte tlmivý roztok podľa vlastného výberu a vytvorte a 1 mg/ml roztoku (tým vyššia je koncentrácia peptidu, tým väčšie množstvo DMSO je potrebné).
Hydrofilné (Kyslé) Peptidy
Na opätovné rozpustenie kyslých peptidov, pridať 100 ul 1% NH 4 OH to 1 mg peptidu a vortex. Keď je roztok číry, pridajte tlmivý roztok podľa vlastného výberu a vytvorte a 1 mg/ml roztoku.
Hydrofilné (Základné) Peptidy
Na rekonštitúciu základného peptidu, pridajte destilovanú vodu 1 mg peptidu a vortex.
Aký je rozdiel medzi čistou a hrubou hmotnosťou peptidu?
Priemyselným štandardom je dodávať peptidy v lyofilizovanej forme ako brutto hmotnosť. Hrubá hmotnosť peptidu je celková hmotnosť všetkých zložiek prítomných v lyofilizovanom prášku. To zahŕňa požadovaný peptid, akékoľvek peptidové nečistoty, voda, zvyškové rozpúšťadlá, a protiión.
Práve naopak Net hmotnosť peptidu, vypočítané z Čistý obsah peptidov, je hmotnosť iba peptid zložka prítomná v lyofilizovanom prášku. To ponúka presnejšie koncentrácie vašich nasledujúcich peptidových roztokov. Preto, odporúčame čisté množstvá hmotnosti peptidov pre Vlastný peptid objednávky.
Čistý obsah peptidov meranie sa uskutočňuje analýzou aminokyselín (AAA; obmedzená presnosť, ale vyžaduje malé množstvo materiálu) alebo elementárna analýza (CHN; vyžaduje miligramy peptidu, ale je presnejší). Obe metódy poskytujú percentuálnu hodnotu (tj., 75% čistý obsah peptidov).
Čistý obsah peptidu závisí od množstva prítomného protiiónu*, ktorý je závislý od peptidovej sekvencie. V podstate, tým vyšší je náboj peptidu, čím nižší je obsah peptidu
*Poznámka: Prvok použitý na výpočet čistého obsahu peptidu je založený na peptidovom protiióne. Toto sa robí, aby sa zabezpečilo, že protiión neprispieva k množstvu obsahu peptidu. Napríklad, keď TFA alebo acetát sú protiiónom, dusík sa používa, pretože sa nachádza v peptide, ale nie v TFA alebo acetáte. Uhlík alebo dusík sa môžu použiť, keď je protiión z rovnakého dôvodu chlorid.
Výpočty čistej hmotnosti peptidov:
Čisté množstvo peptidov (celkový peptid) — metóda, ktorú používame pre čisté zákazkové objednávky peptidov.
Vynásobte percento čistého obsahu peptidov (desiatkový tvar) podľa celkovej hmotnosti peptidu, na získanie množstva čistého množstva peptidov (celkový peptid).
Napríklad:
Pre 5 mg hrubého peptidu/liekovka:
Čistý obsah peptidov je 84%.
Presné množstvo celkového peptidu = 0.84*5 mg = 4,2 mg celkového peptidu
Množstvo záujmového čistého peptidu – najpresnejšie — zákazník môže použiť túto metódu sám na výpočet požadovaného peptidu.
Vynásobte percento čistého obsahu peptidu hrubou hmotnosťou peptidu, a čistota peptidov (pomocou HPLC), na výpočet presného množstva požadovaného peptidu, ktorý máte. Percento čistého peptidu (desiatkový tvar) sa násobí čistotou peptidu (desiatkový tvar).
Napríklad:
Pre 5 mg hrubého peptidu/liekovka s:
Čistý obsah peptidov je 84%.
Presné množstvo požadovaného peptidu je = 0.84*0.96*5 mg = 4,03 mg
MOL Changes využíva skôr chémiu Fmoc na pevnej fáze než chémiu BOC. Fmoc chémia umožňuje odstránenie ochranných skupín použitím miernych podmienok počas predlžovania peptidu, zatiaľ čo chémia BOC vyžaduje použitie silnej kyseliny na odstránenie ochranných skupín počas predlžovania peptidu. Okrem toho, Fmoc chémia využíva kyselinu trifluóroctovú (TFA) na odstránenie peptidu zo živice, zatiaľ čo chémia BOC využíva kyselinu fluorovodíkovú (HF). HF je bezfarebný, vysoko korozívne, a kontaktný jed.
Preto, MOL Changes využíva chémiu Fmoc, pretože je miernejšia, flexibilný, a všestranný v porovnaní s chémiou BOC.
Ako vypočítam molaritu môjho peptidu?
Molarita sa týka molárnej koncentrácie roztoku, čo je počet mólov rozpustenej látky 1 liter roztoku, vyjadrené ako mol/l, alebo M.
Molarita [M] = omša / (Objem x molárna hmotnosť); Mol = koncentrácia (g/l) x Hlasitosť (L)/MW (g/mol)
Príklad:
Dané: 1mg suchého peptidového prášku s MW: 20KDa (Molárna hmotnosť peptidu je 20 g/mol)
Na stanovenie molarity so známou hmotnosťou a známym objemom
Pre 1 ml roztoku tohto peptidu:
Molarita = hmotnosť (0.001g) / (objem (0.001L) x Molová hmotnosť (MW 20,000) = 50 uM
Na určenie hmotnosti na dosiahnutie určitej molarity:
Ak pre váš test, potrebujete 0,01 mM pracovného roztoku peptidu v 1 ml vody, potom vypočítajte požadovanú hmotnosť nasledovne:
Hmotnosť = molarita x objem x molárna hmotnosť
Hmotnosť = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20 000 g/mol = 0,0002 g
Preto, budete potrebovať 0,2 mg/ml peptidu, aby ste mali pracovný roztok 0,01 mM.
V akej forme sa peptidy dodávajú?
Dodávame ako lyofilizovaný alebo surový prášok a peptidový roztok.
Ako zistím, či bude môj peptid rozpustný?
Rozpustnosť peptidu v danom rozpúšťadle závisí od aminokyselinovej sekvencie a často je ťažké ju predpovedať. V prípade katalógových peptidov, informácie o rozpustnosti sú uvedené v údajovom liste kontroly kvality. Pre vlastné peptidy, pozrite si časť s názvom “Ako by som mal solubilizovať svoj peptid”.
Aký je rozdiel medzi obsahom peptidov a čistotou peptidov?
Obsah peptidu nie je ukazovateľom čistoty peptidu, pretože ide o dve samostatné merania. Čistota sa stanoví analytickou HPLC a indikuje prítomnosť/neprítomnosť iných peptidových kontaminantov (t.j. skrátené peptidy).
Čistý obsah peptidu určuje skutočné množstvo peptidu (požadovaný peptid, ako aj peptidové kontaminanty) prítomný vo vzorke. Čistý obsah peptidov sa tradične meria analýzou aminokyselín (AAA; obmedzená presnosť, ale vyžaduje malé množstvo materiálu) alebo elementárna analýza (CHN; vyžaduje miligramy peptidu, ale je presnejší).
Ako vo všeobecnosti čistíte svoje peptidy?
Peptidy MOL Changes sa vo všeobecnosti purifikujú preparatívnou HPLC s reverznou fázou, pomocou 2 pufre obsahujúce 0.1% kyselina trifluóroctová (TFA). Prvá vyrovnávacia pamäť (Nárazník A) sa skladá z 0.1 % TFA v deionizovanej vode a druhý tlmivý roztok (Buffer B) sa skladá z 0.1 % TFA v acetonitrile (ACN).
Vo všeobecnosti, surové peptidy sa najskôr rozpustia v roztoku buď pufra A, nejaké množstvo pufra B, alebo organické polárne rozpúšťadlo, ako je DMSO. Ak sa použilo organické polárne rozpúšťadlo alebo pufor B, tento číry roztok sa najskôr zriedi pufrom A. Ďalej, roztok peptidu sa prefiltruje a nanesie do systému preparatívnej HPLC. Využitie optimalizovaného gradientu metódy, frakcie sa potom odoberú na základe hodnôt absorbancie. Každá frakcia sa potom analyzuje pomocou analytickej HPLC, aby sa zabezpečilo, že čistota každej frakcie zodpovedá požadovanej špecifikácii čistoty.
Tieto „čisté“ frakcie sa potom spoja a lyofilizujú. „Čistý“ prášok sa potom testuje na čistotu aj identitu, aby sa zaistilo, že bol vyrobený správny peptid.
Konečne, nezávislá skupina QC v AnaSpec opäť testuje peptid, aby sa zaistilo, že všetky testovacie atribúty spĺňajú požadované špecifikácie.
Ako napíšem konce svojej peptidovej sekvencie?
Medzinárodná nomenklatúra používaná pre konce sekvencie je nasledovná:
– N-koniec: H znamená voľný amín (NH2-), Ac znamená acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr znamená kyselinu pyroglutámovú
– C-koncovka: OH znamená voľnú kyselinu (-COOH), NH2 znamená amid [-CONH2]
– Modifikácie na bočnom reťazci aminokyselín sú znázornené v zátvorkách za zodpovedajúcou aminokyselinou. Napríklad; fosforylovaný serín = S(P03H2) alebo epsilon-N-acetylovaný lyzín = K(Ac)
Počas produkcie peptidov, ióny v roztokoch na syntézu a čistenie sa viažu na nabité aminokyselinové bočné reťazce peptidu, tvoriace soli. Tieto ióny sú známe ako peptidové protiióny a pomáhajú vyrovnávať náboj peptidu.
kyselina trifluóroctová (TFA) sa bežne používa pri syntéze a čistení peptidov.
So zásaditými aminokyselinami tvorí trifluóracetátové soli (napr., lyzín, arginín, histidín) a voľný N-koncový amín. Preto, trifluóracetát je typicky predvolený protiión.
Minimálny počet molekúl TFA naviazaných na peptid je úmerný počtu bázických zvyškov v danej peptidovej sekvencii. Teda, bázickejšie zvyšky prítomné v peptide, čím nižší je čistý obsah peptidu v lyofilizovanom prášku. Zohľadniť obsah TFA alebo vody prítomný vo vzorke, odporúčame vykonať analýzu obsahu peptidu pre každý vlastný peptid.
Voda a kyselina trifluóroctová (TFA) sú vedľajšími produktmi procesu čistenia. Avšak, TFA môže vyvolať obavy z toxicity pre nažive a predklinické štúdie. Preto, MOL Changes ponúka netoxický acetát, chlorid, alebo výmenníky amónnej soli.
hy sú peptidy obsahujúce Cys, Met, alebo Trp ťažko syntetizovateľné?
Peptidy obsahujúce Cys, Met, alebo Trp sú náročné na syntézu a získanie vysoko čistých produktov. Je to spôsobené najmä nestabilitou a náchylnosťou k oxidácii týchto funkčných skupín. Osobitná pozornosť sa vyžaduje pri použití a skladovaní týchto peptidov, aby sa zabránilo opakovanému otváraniu liekoviek.
Zmeškali sme vašu otázku?? Napíšte nám linku a budeme
vrátiť sa dnu 24 hodiny.
