Tez-tez so'raladigan savollar
Oddiy qilib aytganda, milligrammdan kilogrammgacha murakkablashtiring
Custom Quote Request
How to store peptides?
Liyofillangan peptidlar
Peptidlarni uzoq muddatli saqlash uchun, ularni qattiq kukun holida saqlashni tavsiya qilamiz. Liyofillangan peptidlar -20 ° C yoki undan past haroratda minimal degradatsiya bilan saqlanishi mumkin. Mijozlarga har safar moslashtirilgan peptidlarni qayta tekshirish tavsiya etiladi 2 sifat nazorati chiqarilgan kundan boshlab yillar.
Eritmadagi peptidlar
Eritmadagi peptidlar kamroq barqaror va parchalanishga moyil. Peptidlarni eritish uchun ishlatiladigan suvli eritmalar steril va toza bo'lishi kerak.
Eritmada, ma'lum miqdorda peptid parchalanishi mumkin, ketma-ketlikda mavjud bo'lgan aminokislotalarga bog'liq. Ba'zi misollar quyida keltirilgan:
– Metionin o'z ichiga olgan peptidlar, sistein yoki triptofan qoldiqlari oksidlanish tufayli eritmada cheklangan saqlash muddatiga ega bo'lishi kerak. Ushbu peptidlar kislorodsiz erituvchida eritilishi kerak. –
Glutamin va asparagin glutamik kislota va aspartik kislotaga deamidlangan bo'lishi mumkin, mos ravishda. –
Sistein sistein-sistein disulfid aloqasini hosil qilish uchun oksidlovchi siklizatsiyaga kirishishi mumkin. (disulfid bog'lari ichida yoki o'rtasida hosil bo'lishi mumkin). –
Zaryadlangan qoldiqlar (aspartik kislota, glutamik kislota, lizin, arginin, histidin) gigroskopikdir (havodan suvni yutish) va viskoz hosil qilishga moyildir, toza yog '. Ushbu jismoniy o'zgarish peptidning tabiatiga ta'sir qilmasligi mumkin. Suvning iz miqdorini olib tashlash uchun bunday peptidlarni liyofilizatsiya qilish tavsiya etiladi, keyin flakonda suv bug‘i yo‘qligiga ishonch hosil qilish uchun azot bilan gazsizlanadi, va keyin tezda yopiladi.
Qayta-qayta muzlash va eritish natijasida shikastlanmaslik uchun, foydalanuvchilarga faqat joriy tajriba uchun zarur bo'lgan peptid miqdorini eritib yuborishni tavsiya qilamiz. Ortiqcha eritmani ≥ haroratda saqlash kerak -20 o C kerak bo'lgunga qadar.
Namlikdan saqlaning.
Chunki namlik peptidlarning uzoq muddatli barqarorligini sezilarli darajada kamaytiradi, flakonlarni ochishdan oldin eksikatordagi peptidlarni xona haroratiga tenglashtirishni tavsiya qilamiz. Peptidlarni tarqatish tugagandan so'ng, kolbadagi qolgan peptidlarni suvsiz azot bilan muloyimlik bilan tozalash kerak, keyin idishni yopish kerak, muhrlangan plyonka bilan yopishtirilgan, va -20°C da saqlanadi.
Turli peptidlarning eruvchanlik xususiyatlari sezilarli darajada farq qiladi. Alanin kabi qoldiqlar (Ala), sistein (Cys), izolösin (Bilan), leysin (Leu), metionin (uchrashdi), fenilalanin (Phe), va valin (Val) peptidning hidrofobikligini va suvli eritmalarda eruvchanligini qo'shing, va mijozga peptidlarni sozlashda ushbu ko'rsatmalarga rioya qilish tavsiya etiladi.
Eruvchanlik xossalari
Peptidlarning eruvchanligi aminokislotalarning ketma-ketligiga juda bog'liq. Tabiiy hidrofobik peptidlar (A, F, G, V, L, I, M, V, Yuqori moyillikka ega P) eritish uchun organik erituvchilar kerak. Kislotali peptidlar (D ga yuqori moyillik, Peptidlar ketma-ketligida E) eritish uchun asosiy suvli tamponlarni talab qiladi, asosiy peptidlar esa (K uchun yuqori moyillik, H, va R) eritish uchun kislotali suvli tamponlarni talab qiladi.
Solvent tanlash
Tahlilingizning cheklovlarini hisobga olgan holda, peptidlarni eritish uchun eng yaxshi erituvchini aniqlash uchun quyidagi ko'rsatmalardan foydalanishni tavsiya qilamiz
Hidrofobik peptidlar
Hidrofob peptidlarni qayta eritish uchun, qo'shish 100 mL DMSO va bir hil eritma hosil bo'lguncha sonikatsiya qiling. Keyingisi, qilish uchun siz tanlagan buferni qo'shing 1 mg/ml eritma (peptid konsentratsiyasi qanchalik yuqori bo'lsa, talab qilinadigan DMSO miqdori qanchalik ko'p bo'lsa).
Gidrofil (Kislotali) Peptidlar
Kislotali peptidlarni qayta eritish uchun, qo'shish 100 mL dan 1% NH 4 OH uchun 1 mg peptid va vorteks. Yechim aniq bo'lganda, qilish uchun siz tanlagan buferni qo'shing 1 mg/ml eritma.
Gidrofil (Asosiy) Peptidlar
Asosiy peptidni tiklash uchun, distillangan suv qo'shing 1 mg peptid va vorteks.
Yalpi peptid og'irligi va aniq og'irligi o'rtasidagi farq nima??
Sanoat standarti peptidlarni liyofillangan shaklda yalpi og'irlik sifatida etkazib berishdir. Yalpi peptid og'irligi liyofillangan kukunda mavjud bo'lgan barcha komponentlarning umumiy og'irligi. Bu qiziqish peptidini o'z ichiga oladi, har qanday peptid aralashmalari, suv, qoldiq erituvchilar, va qarshi ion.
Aksincha Net peptid og'irligi, dan hisoblangan Net peptid tarkibi, ning og'irligi hisoblanadi faqat peptid liyofillangan kukun tarkibida mavjud bo'lgan komponent. Bu sizning keyingi peptid eritmalaringizning aniqroq konsentratsiyasini taklif qiladi. Shuning uchun, uchun aniq peptid og'irligi miqdorlarini tavsiya qilamiz Maxsus peptid buyurtmalar.
Net peptid tarkibi o'lchov aminokislotalar tahlili bilan amalga oshiriladi (AAA; cheklangan aniqlik, lekin kam material miqdorini talab qiladi) yoki elementar tahlil (CHN; milligramm peptid talab qiladi, lekin aniqroq). Ikkala usul ham foizli qiymatni beradi (ya'ni., 75% aniq peptid tarkibi).
Net peptid tarkibi mavjud bo'lgan qarshi ion miqdoriga bog'liq*, Bu peptidlar ketma-ketligiga bog'liq. Asosan, peptid zaryadi qanchalik yuqori bo'lsa, peptid tarkibi qanchalik past bo'lsa
*Eslatma: Aniq peptid tarkibini hisoblash uchun ishlatiladigan element peptidga qarshi ionga asoslangan. Bu qarshi ionning peptid tarkibi miqdoriga hissa qo'shmasligini ta'minlash uchun amalga oshiriladi. Masalan, TFA yoki asetat qarshi ion bo'lganda, azot peptidda bo'lgani uchun ishlatiladi, lekin TFA yoki asetatda emas. Xuddi shu sababga ko'ra xlorid qarshi ion bo'lsa, uglerod yoki azotdan foydalanish mumkin.
Net peptid vaznini hisoblash:
Sof peptid miqdori (umumiy peptid) - biz aniq peptid buyurtmalari uchun foydalanadigan usul.
Peptid tarkibining aniq foizini ko'paytiring (kasrli shakl) Peptid yalpi og'irligi bo'yicha, sof peptid miqdorini olish uchun (umumiy peptid).
Masalan:
uchun 5 mg yalpi peptid/flakon:
Peptidning aniq tarkibi 84%.
Umumiy peptidning aniq miqdori = 0.84*5 mg=4,2 mg umumiy peptid
Foizning aniq peptid miqdori - eng aniq — mijoz qiziqish peptidini hisoblash uchun ushbu usuldan mustaqil foydalanishi mumkin.
Sof peptid tarkibi foizini peptid yalpi og'irligiga ko'paytiring, va peptid tozaligi (HPLC tomonidan), Sizni qiziqtirgan peptidning aniq miqdorini hisoblash uchun. Sof peptid foizi (kasrli shakl) peptid tozaligi bilan ko'paytiriladi (kasrli shakl).
Masalan:
uchun 5 mg yalpi peptid/flakon bilan:
Peptidning aniq tarkibi 84%.
Qiziqarli peptidning aniq miqdori = 0.84*0.96*5 mg=4,03 mg
Siz qaysi turdagi kimyodan foydalanasiz?
MOL Changes BOC kimyosidan ko'ra qattiq fazali Fmoc kimyosidan foydalanadi. Fmoc kimyosi peptid cho'zilishi paytida engil sharoitlardan foydalangan holda himoya guruhlarini olib tashlash imkonini beradi, BOC kimyosi esa peptid cho'zilishi paytida himoya guruhlarini olib tashlash uchun kuchli kislotadan foydalanishni talab qiladi. Qo'shimcha, Fmoc kimyosi trifloroasetik kislotadan foydalanadi (TFA) peptidni qatrondan olib tashlash uchun, BOC kimyosi esa gidroflorik kislotadan foydalanadi (HF). HF rangsiz, yuqori korroziv, va kontakt zahari.
Shuning uchun, MOL Changes Fmoc kimyosidan foydalanadi, chunki u yumshoqroq, moslashuvchan, va BOC kimyosi bilan solishtirganda ko'p qirrali.
Peptidning molyarligini qanday hisoblash mumkin?
Molyarlik eritmaning molyar kontsentratsiyasini bildiradi, bu erigan moddaning mollari soni 1 litr eritma, mol/L sifatida ifodalanadi, yoki M.
Molyarlik [M] = Massa / (Hajmi x molyar massa); Mole = Konsentratsiya (g/l) x ovoz balandligi (L)/MVt (g/mol)
Misol:
Berilgan: 1mg quruq peptid kukuni MW bilan: 20KDa (Peptidning molyar massasi 20 g/mol)
Ma'lum massa va ma'lum hajmdagi molyarlikni aniqlash
Ushbu peptidning 1 ml eritmasi uchun:
Molyarlik = Massa (0.001g) / (hajmi (0.001L) x Molyar massa (MVt 20,000) = 50 µM
Muayyan molyarlikka erishish uchun massani aniqlash:
Agar sizning tahlilingiz uchun, 1 ml suvda 0,01 mM ishchi peptid eritmasi kerak, keyin quyidagi tarzda talab qilinadigan massani hisoblang:
Massa = Molyarlik x hajm x Molyar massa
Massa = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0,0002g
Shuning uchun, 0,01 mM ishchi eritmaga ega bo'lish uchun sizga 0,2 mg/ml peptid kerak bo'ladi..
Peptidlar qanday shaklda etkazib beriladi?
Biz liyofillangan yoki xom kukun va peptid eritmasi sifatida etkazib beramiz.
Mening peptidim eriydimi yoki yo'qligini qanday bilsam bo'ladi?
Peptidning ma'lum bir erituvchida eruvchanligi aminokislotalar ketma-ketligiga bog'liq va ko'pincha oldindan aytish qiyin.. Katalog peptidlari holatida, eruvchanlik ma'lumotlari QC ma'lumotlar varag'ida keltirilgan. Maxsus peptidlar uchun, sarlavhali bo'limga qarang “Peptidimni qanday eritishim kerak”.
Peptid tarkibi va peptid tozaligi o'rtasidagi farq nima?
Peptid tarkibi peptid tozaligining ko'rsatkichi emas, chunki bu ikkita alohida o'lchovdir. Tozalik analitik HPLC tomonidan aniqlanadi va boshqa peptid ifloslantiruvchi moddalar mavjudligini/yo'qligini ko'rsatadi. (ya'ni. kesilgan peptidlar).
Aniq peptid tarkibi peptidning haqiqiy miqdorini aniqlaydi (qiziqtirgan peptid, shuningdek, peptid ifloslantiruvchi moddalar) namunada mavjud. Aniq peptid tarkibi an'anaviy ravishda aminokislotalar tahlili bilan o'lchanadi (AAA; cheklangan aniqlik, lekin kam miqdorda material talab qiladi) yoki elementar tahlil (CHN; milligramm peptid talab qiladi, lekin aniqroq).
Umuman olganda, peptidlaringizni qanday tozalaysiz?
MOL Changes peptidlari odatda teskari fazali preparativ HPLC tomonidan tozalanadi, foydalanish 2 o'z ichiga olgan buferlar 0.1% trifloroasetik kislota (TFA). Birinchi bufer (Bufer A) dan tashkil topgan 0.1 % TFA deionizatsiyalangan suvda va ikkinchi tamponda (Bufer B) dan tashkil topgan 0.1 % Asetonitrildagi TFA (ACN).
Umuman, Xom peptidlar avval bufer A eritmasida eritiladi, ma'lum miqdorda bufer B, yoki DMSO kabi organik qutbli erituvchi. Agar organik qutbli erituvchi yoki bufer B ishlatilgan bo'lsa, bu tiniq eritma avval bufer A bilan suyultiriladi. Keyingisi, peptid eritmasi filtrlanadi va preparativ HPLC tizimiga yuklanadi. Optimallashtirilgan usul gradientidan foydalanish, keyin fraktsiyalar absorbans ko'rsatkichlari asosida yig'iladi. Keyin har bir fraksiya analitik HPLC orqali tahlil qilinadi va har bir fraksiyaning tozaligi talab qilinadigan tozalik spetsifikatsiyasiga javob beradi..
Keyin bu "sof" fraktsiyalar birlashtiriladi va liyofilizatsiya qilinadi. Keyin "toza" kukun to'g'ri peptid ishlab chiqarilganligiga ishonch hosil qilish uchun tozaligi va o'ziga xosligi uchun sinovdan o'tkaziladi..
Nihoyat, AnaSpec-dagi mustaqil QC guruhi barcha sinov atributlari talab qilinadigan spetsifikatsiyalarga javob berishini ta'minlash uchun peptidni yana sinovdan o'tkazadi..
Peptidlar ketma-ketligi terminini qanday yozaman?
Terminallar ketma-ketligi uchun ishlatiladigan xalqaro nomenklatura quyidagicha:
– N-terminal: H erkin amin degan ma'noni anglatadi (NH2-), Ac asetil degan ma'noni anglatadi [CH3C(O)-NH-], Piroglutamik kislota degan ma'noni anglatadi
– C-terminal: OH erkin kislotani bildiradi (-COOH), NH2 amid degan ma'noni anglatadi [-CONH2]
– Aminokislotalarning yon zanjiridagi modifikatsiyalar tegishli aminokislotadan keyin qavs ichida tasvirlangan.. Masalan; fosforlangan serin = S(PO3H2) yoki epsilon-N-asetillangan lizin = K(Ac)
Peptid ishlab chiqarish jarayonida, Sintez va tozalash eritmalaridagi ionlar peptidning zaryadlangan aminokislota yon zanjirlari bilan bog'lanadi., tuzlar hosil qiladi. Ushbu ionlar peptidga qarshi ionlar sifatida tanilgan va peptid zaryadini muvozanatlashda yordam beradi.
Trifloroasetik kislota (TFA) peptid sintezi va tozalashda keng qo'llaniladi.
Asosiy aminokislotalar bilan trifloroatsetat tuzlarini hosil qiladi (masalan., lizin, arginin, histidin) va erkin N-terminal amin. Shuning uchun, trifluoroatsetat odatda standart qarshi ion hisoblanadi.
Peptid bilan bog'langan TFA molekulalarining minimal soni ma'lum bir peptid ketma-ketligidagi asosiy qoldiqlar soniga proportsionaldir.. Shunday qilib, peptidda ko'proq asosiy qoldiqlar mavjud, liyofilizatsiyalangan kukunning aniq peptid tarkibi qanchalik past bo'lsa. Namunadagi TFA yoki suv tarkibini hisobga olish, har bir maxsus peptid uchun peptid tarkibi tahlilini o'tkazishni tavsiya qilamiz.
Suv va trifloroasetik kislota (TFA) tozalash jarayonining yon mahsulotidir. Biroq, TFA toksiklik tashvishlarini keltirib chiqarishi mumkin tirik va preklinik tadqiqotlar. Shuning uchun, MOL Changes toksik bo'lmagan asetatni taklif qiladi, xlorid, yoki ammoniy tuzi almashtirgichlari.
Cys o'z ichiga olgan peptidlar, uchrashdi, yoki Trp ni sintez qilish qiyin?
Cys o'z ichiga olgan peptidlar, uchrashdi, yoki Trp yuqori tozalikdagi mahsulotlarni sintez qilish va olish qiyin. Bu, asosan, ushbu funktsional guruhlarning beqarorligi va oksidlanishga moyilligi bilan bog'liq. Flakonlarning qayta-qayta ochilishiga yo'l qo'ymaslik uchun ushbu peptidlardan foydalanish va saqlashga alohida e'tibor berish kerak.
Savolingizni o'tkazib yubordikmi?? Bizga qator qoldiring va biz qilamiz
ichkariga qayting 24 soat.
