Awọn ibeere Nigbagbogbo
Nìkan si eka lati Milligrams si Kilograms
Custom Quote Request
How to store peptides?
Awọn peptides Lyophilized
Fun ipamọ igba pipẹ ti awọn peptides, a ṣe iṣeduro titoju wọn bi a ri to lulú. Awọn peptides Lyophilized le wa ni ipamọ ni -20 ° C tabi isalẹ pẹlu ibajẹ kekere. A gba awọn alabara niyanju lati tun ṣayẹwo awọn peptides ti adani ni gbogbo 2 ọdun lati ọjọ ti idasilẹ iṣakoso didara.
Peptides ni ojutu
Awọn peptides ni ojutu ko ni iduroṣinṣin ati itara si ibajẹ. Awọn ojutu olomi ti a lo lati tu awọn peptides yẹ ki o jẹ ailagbara ati mimọ.
Ni ojutu, iye kan ti peptide le jẹ ibajẹ, da lori awọn amino acids ti o wa ninu ọkọọkan. Diẹ ninu awọn apẹẹrẹ ti wa ni akojọ si isalẹ:
– Awọn peptides ti o ni methionine ninu, cysteine tabi awọn iṣẹku tryptophan yẹ ki o ni akoko ipamọ to lopin ni ojutu nitori ifoyina. Awọn peptides wọnyi yẹ ki o wa ni tituka ni epo ti ko ni atẹgun. –
Glutamine ati asparagine le jẹ deamidated si glutamic acid ati aspartic acid, lẹsẹsẹ. –
Cysteine le gba cyclization oxidative lati ṣe asopọ cysteine-cysteine disulfide (eyi ti o le wa ni akoso laarin tabi laarin disulfide ìde). –
Awọn iṣẹku ti o gba agbara (aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine) jẹ hygroscopic (gbigba omi lati inu afẹfẹ) ki o si ṣọ lati fẹlẹfẹlẹ kan ti viscous, epo ko o. Iyipada ti ara yii le ma ni ipa lori iseda ti peptide. A ṣe iṣeduro pe ki o jẹ lyophilized iru peptides lati yọ awọn iye omi ti o wa kakiri kuro, lẹhinna degassed pẹlu nitrogen lati rii daju pe ko si oru omi ninu vial, ati ki o si ni kiakia capped.
Lati yago fun bibajẹ lati didi leralera ati thawing, a ṣeduro pe awọn olumulo nikan tu iye peptide ti o nilo fun idanwo lọwọlọwọ. Ojutu ti o pọju yẹ ki o wa ni ipamọ ni ≥ -20 o C titi ti o nilo.
Yago fun ọrinrin.
Niwọn igba ti ọrinrin ni pataki dinku iduroṣinṣin igba pipẹ ti awọn peptides, a ṣeduro iwọntunwọnsi awọn peptides ni ẹrọ mimu si iwọn otutu yara ṣaaju ṣiṣi awọn lẹgbẹrun. Lẹhin ipari ti pinpin peptide, awọn peptides to ku ninu tube yẹ ki o jẹ rọra wẹ pẹlu nitrogen anhydrous, lẹhinna o yẹ ki a pa apamọ naa, edidi pẹlu kan lilẹ film, ati ti o ti fipamọ ni -20 ° C.
Awọn abuda solubility ti awọn peptides oriṣiriṣi yatọ ni riro. Awọn iyokù bii alanine (Ala), cysteine (Cys), isoleucine (Pẹlu), leucine (Leu), methionine (Pade), phenylalanine (Phe), ati valine (Val) ṣafikun si hydrophobicity peptide ati solubility ni awọn ojutu olomi, ati pe a ṣe iṣeduro pe alabara tẹle awọn itọnisọna wọnyi nigbati o ba n ṣe awọn peptides.
Solubility Properties
Solubility ti peptides jẹ igbẹkẹle pupọ si ọna amino acid. Nipa ti hydrophobic peptides (A, F, G, V, L, I, M, W, P pẹlu ti o ga propensity) beere Organic olomi fun solubilization. Awọn peptides ekikan (Iye ti o ga julọ fun D, E ni peptide ọkọọkan) nilo awọn buffers olomi ipilẹ fun solubilization, nigba ti ipilẹ peptides (Iye ti o ga julọ ti K, H, ati R) beere ekikan olomi buffers fun solubilization.
Yiyan yiyan
Fi fun awọn idiwọn ti idanwo rẹ, a ṣeduro lilo awọn itọnisọna wọnyi lati pinnu ipinnu ti o dara julọ fun solubilizing peptides
Awọn Peptides Hydrophobic
Lati tun-solubilize hydrophobic peptides, fi kun 100 µL ti DMSO ati sonicate titi ti ojutu isokan kan yoo ṣẹda. Itele, ṣafikun ifipamọ ti o fẹ lati ṣe kan 1 mg/ml ojutu (ti o ga julọ peptide ifọkansi, ti o tobi iye DMSO ti a beere).
Hydrophilic (ekikan) Awọn peptides
Lati tun-solubilize awọn peptides ekikan, fi kun 100 µL ti 1% NH 4 OH si 1 miligiramu ti peptide ati vortex. Ni kete ti ojutu ba han, ṣafikun ifipamọ ti o fẹ lati ṣe kan 1 mg/ml ojutu.
Hydrophilic (Ipilẹṣẹ) Awọn peptides
Lati tun ṣe peptide ipilẹ kan, fi distilled omi si 1 miligiramu ti peptide ati vortex.
Kini iyato laarin apapọ vs gross peptide àdánù?
Iwọnwọn ile-iṣẹ ni lati fi awọn peptides ranṣẹ ni fọọmu lyophilized bi iwuwo nla kan. Iwọn peptide lapapọ jẹ iwuwo lapapọ ti gbogbo awọn paati ti o wa ninu lulú lyophilized. Eyi pẹlu peptide ti iwulo, eyikeyi peptide impurities, omi, péye epo, ati counterion.
Bi be ko Apapọ iwuwo peptide, iṣiro lati awọn Apapọ peptide akoonu, ni awọn àdánù ti peptide nikan paati ti o wa ninu lulú lyophilized. Eyi nfunni ni awọn ifọkansi deede diẹ sii ti awọn ojutu peptide ti o tẹle. Nitorinaa, a ṣe iṣeduro awọn iye iwuwo peptide apapọ fun Peptide aṣa ibere.
Net Peptide akoonu wiwọn ni a ṣe nipasẹ itupalẹ amino acid (AAA; išedede to lopin ṣugbọn o nilo iye ohun elo kekere kan) tabi igbekale ipilẹ (CHN; nilo milligrams ti peptide ṣugbọn o jẹ deede diẹ sii). Awọn ọna mejeeji mu iye ogorun kan jade (ie., 75% net peptide akoonu).
Akoonu Peptide Net da lori iye counterion ti o wa *, eyi ti o da lori peptide ọkọọkan. Ni pataki, ti o ga idiyele peptide, dinku akoonu peptide
*Akiyesi: Ohun elo ti a lo lati ṣe iṣiro akoonu peptide apapọ da lori counter-ion peptide. Eyi ni a ṣe lati rii daju pe counter-ion ko ṣe alabapin si iye akoonu peptide. Fun apere, nigbati TFA tabi acetate jẹ counter-ion, nitrogen jẹ lilo nitori pe o wa ninu peptide ṣugbọn kii ṣe ni TFA tabi acetate. Erogba tabi Nitrogen le ṣee lo nigbati kiloraidi jẹ counter-ion fun idi kanna.
Net Peptide iwuwo isiro:
Net Peptide opoiye (lapapọ peptide) - ọna ti a lo fun net aṣa peptide bibere.
Isodipupo Apapọ Apapọ akoonu Peptide (eleemewa fọọmu) nipasẹ awọn Peptide Gross iwuwo, lati gba iye Net Peptide Quantity (lapapọ peptide).
Fun apere:
Fun 5 mg gross peptide/vial:
Peptide net akoonu jẹ 84%.
Gangan iye ti lapapọ peptide = 0.84*5 mg=4.2 mg lapapọ peptide
Apapọ Peptide ti Opoiye iwulo — deede julọ - alabara le lo ọna yii funrararẹ lati ṣe iṣiro peptide ti iwulo.
Isodipupo Apapọ Apapọ Akoonu Peptide nipasẹ iwuwo Gross Peptide, ati Peptide Mimọ (nipasẹ HPLC), lati ṣe iṣiro iye gangan ti peptide ti anfani ti o ni. Awọn apapọ peptide ogorun (eleemewa fọọmu) ti wa ni isodipupo nipasẹ peptide ti nw (eleemewa fọọmu).
Fun apere:
Fun 5 mg gross peptide/vial pẹlu:
Peptide net akoonu jẹ 84%.
Gangan iye ti peptide ti anfani ni = 0.84*0.96*5 mg=4.03 mg
Awọn iyipada MOL nlo kemistri Fmoc ti o lagbara dipo kemistri BOC. Kemistri Fmoc ngbanilaaye fun yiyọkuro ti awọn ẹgbẹ aabo nipa lilo awọn ipo kekere lakoko elongation peptide, lakoko ti kemistri BOC nilo lilo acid to lagbara lati yọ awọn ẹgbẹ aabo kuro lakoko elongation peptide. Ni afikun, Kemistri Fmoc nlo trifluoroacetic acid (TFA) lati yọ peptide kuro ninu resini, nigba ti kemistri BOC nlo hydrofluoric acid (HF). HF ko ni awọ, gíga ibajẹ, ati ki o kan majele olubasọrọ.
Nitorina, Awọn iyipada MOL nlo kemistri Fmoc bi o ṣe jẹ ìwọnba diẹ sii, rọ, ati ki o wapọ akawe pẹlu BOC kemistri.
Bawo ni MO ṣe ṣe iṣiro molarity ti peptide mi?
Molarity n tọka si ifọkansi molar ti ojutu kan, eyi ti o jẹ awọn nọmba ti moles ti solute ni tituka ni 1 lita ojutu, ti a fihan bi mol/L, tabi M.
Molarity [M] = Massa / (Iwọn didun x Molar Mass); Moolu = Ifojusi (g/L) x Iwọn didun (L)/MW (g/mol)
Apeere:
Fun: 1miligiramu ti peptide ti o gbẹ pẹlu MW: 20KDa (Iwọn molar ti peptide jẹ 20 g/mol)
Lati pinnu molarity pẹlu ibi-mọ ati iwọn didun ti a mọ
Fun ojutu 1 milimita ti peptide yii:
Molarity = Mass (0.001g) / (iwọn didun (0.001L) x Molar Ibi (MW 20,000) = 50µM
Lati pinnu ibi-lati ṣaṣeyọri molarity kan:
Ti o ba fun ayẹwo rẹ, o nilo 0.01mM ṣiṣẹ peptide ojutu ni 1ml ti omi, lẹhinna ṣe iṣiro iwọn ti o nilo gẹgẹbi atẹle:
Ibi = Molarity x Iwọn didun x Molar Mass
Ibi = 0.01mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0.0002g
Nitorinaa, iwọ yoo nilo 0.2mg / milimita ti peptide lati ni ojutu iṣẹ ti 0.01mM.
Ni ohun ti fọọmu ti wa ni peptides jišẹ?
A firanṣẹ bi lyophilized tabi lulú aise ati ojutu peptide.
Bawo ni MO ṣe mọ boya peptide mi yoo jẹ tiotuka?
Solubility ti peptide kan ninu epo ti a fun ni da lori ọna amino acid ati nigbagbogbo nira lati sọtẹlẹ.. Ninu ọran ti awọn peptides katalogi, alaye solubility ti wa ni akojọ lori iwe data QC. Fun awọn peptides aṣa, jọwọ wo apakan ẹtọ “Bawo ni MO ṣe le solubilize peptide mi”.
Kini iyatọ laarin akoonu peptide ati mimọ peptide?
Akoonu Peptide kii ṣe itọkasi mimọ peptide nitori iwọnyi jẹ awọn wiwọn lọtọ meji. Iwa mimọ jẹ ipinnu nipasẹ HPLC atupale ati tọka wiwa / aini ti awọn contaminants peptidic miiran (ie. awọn peptides ege).
Nẹtiwọki akoonu peptide pinnu iye gangan ti peptide (peptide ti iwulo bi daradara bi awọn contaminants peptide) wa ninu apẹẹrẹ. Akoonu peptide apapọ jẹ iwọn aṣa nipasẹ itupalẹ Amino acid (AAA; išedede to lopin ṣugbọn o nilo iye kekere ti ohun elo) tabi igbekale ipilẹ (CHN; nilo milligrams ti peptide ṣugbọn o jẹ deede diẹ sii).
Bawo ni o ṣe sọ peptides rẹ di mimọ ni gbogbogbo?
Awọn iyipada MOL peptides jẹ mimọ ni gbogbogbo nipasẹ HPLC igbaradi ipadasẹhin, lilo 2 buffers ti o ni awọn 0.1% trifluoroacetic acid (TFA). Ifipamọ akọkọ (Buffer A) ti wa ni kq ti 0.1 % TFA ni deionized omi ati awọn keji saarin (Ifipamọ B) ti wa ni kq ti 0.1 % TFA ni acetonitrile (ACN).
Ni gbogbogbo, Awọn peptides robi ti wa ni tituka akọkọ ni ojutu ti boya Buffer A, iye diẹ ti Buffer B, tabi ohun elo pola Organic gẹgẹbi DMSO. Ti a ba lo epo pola Organic tabi Buffer B, Ojutu mimọ yii yoo kọkọ fomi pẹlu Buffer A. Itele, ojutu peptidic ti wa ni filtered ati kojọpọ sori eto HPLC igbaradi. Lilo ọna iṣapeye itesiwaju, Awọn ida ni a gba lẹhinna da lori awọn kika gbigba gbigba. Ida kọọkan ni a ṣe atupale nipasẹ HPLC itupalẹ lati rii daju pe mimọ ti ida kọọkan pade sipesifikesonu mimọ ti a beere.
Awọn ida “mimọ” wọnyi yoo wa papọ ati lyophilized. Awọn “funfun” lulú lẹhinna ni idanwo fun mimọ mejeeji ati idanimọ lati rii daju pe peptide ti o pe ti jẹ iṣelọpọ.
Níkẹyìn, Ẹgbẹ QC ominira ni AnaSpec tun ṣe idanwo peptide lati rii daju pe gbogbo awọn abuda idanwo ni ibamu pẹlu awọn pato ti a beere.
Bawo ni MO ṣe kọ termini ọkọọkan peptide mi?
Iforukọsilẹ agbaye ti a lo fun termini ọkọọkan jẹ atẹle yii:
– N-terminus: H tumo si amin ofe (NH2-), Ac tumo si acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr tumo si pyroglutamic acid
– C-ebute oko: OH tumo si acid ofe (-COOH), NH2 tumo si amide [-CONH2]
– Awọn iyipada lori ẹwọn ẹgbẹ ti amino acids jẹ afihan ninu akọmọ lẹhin amino acid ti o baamu. Fun apere; serine phosphorylated = S(PO3H2) tabi epsilon-N-acetylated lysine = K(Ac)
Ohun ti o jẹ peptide counterion?
Lakoko iṣelọpọ peptide, ions ninu awọn kolaginni ati ìwẹnu awọn ojutu dè si awọn agbara idiyele amino acid ẹgbẹ ẹwọn ti awọn peptide, lara iyọ. Awọn ions wọnyi ni a mọ bi awọn iṣiro peptide ati iranlọwọ dọgbadọgba idiyele peptide.
Trifluoroacetic acid (TFA) ti wa ni commonly lo ninu peptide kolaginni ati ìwẹnumọ.
O ṣe awọn iyọ trifluoroacetate pẹlu awọn amino acids ipilẹ (f.eks., lysine, arginine, histidine) ati awọn free N-terminal amine. Nitorina, trifluoroacetate jẹ deede atako aiyipada.
Nọmba ti o kere julọ ti awọn ohun elo TFA ti o so mọ peptide kan jẹ iwọn si nọmba awọn iṣẹku ipilẹ ni ilana peptide ti a fun.. Bayi, awọn iṣẹku ipilẹ diẹ sii ti o wa ninu peptide kan, isalẹ akoonu peptide apapọ ti lulú lyophilized. Lati ṣe akọọlẹ fun TFA tabi akoonu omi ti o wa ninu apẹẹrẹ, a ṣeduro ṣiṣe ayẹwo akoonu peptide fun gbogbo peptide aṣa.
Omi ati trifluoroacetic acid (TFA) ni o wa nipasẹ-awọn ọja ti awọn ìwẹnumọ ilana. Sibẹsibẹ, TFA le gbe awọn ifiyesi majele dide fun laaye ati awọn iwadi iṣaaju. Nitorina, Awọn iyipada MOL nfunni ni acetate ti kii ṣe majele, kiloraidi, tabi ammonium iyo exchangers.
hy jẹ peptides ti o ni Cys, Pade, tabi Trp soro lati synthesize?
Peptides ti o ni awọn Cys, Pade, tabi Trp jẹ nija lati ṣajọpọ ati gba awọn ọja mimọ-giga. Eyi jẹ nipataki nitori aisedeede ati ailagbara si ifoyina ti awọn ẹgbẹ iṣẹ ṣiṣe wọnyi. Ifarabalẹ pataki ni a nilo fun lilo ati ibi ipamọ ti awọn peptides wọnyi lati yago fun ṣiṣi ti awọn lẹgbẹrun leralera.
Ṣe a padanu ibeere rẹ? Ju wa laini ati pe a yoo
gba pada laarin 24 wakati.
