Cwestiynau Cyffredin

Yn syml i Cymhleth o filigramau i Cilogramau


Custom Quote Request


How to store peptides?


Peptidau Lyophilized

Ar gyfer storio peptidau yn y tymor hir, rydym yn argymell eu storio fel powdr solet. Gellir storio peptidau lyophilized ar -20 ° C neu is heb fawr o ddiraddio. Cynghorir cwsmeriaid i ail-arolygu peptidau wedi'u haddasu bob 2 blynyddoedd o ddyddiad rhyddhau rheolaeth ansawdd.

Peptidau mewn hydoddiant

Mae peptidau mewn hydoddiant yn llai sefydlog ac yn dueddol o ddiraddio. Dylai hydoddiannau dyfrllyd a ddefnyddir i doddi peptidau fod yn ddi-haint a phur.

Mewn datrysiad, gall rhywfaint o peptid gael ei ddiraddio, yn dibynnu ar yr asidau amino sy'n bresennol yn y dilyniant. Rhestrir rhai enghreifftiau isod:
– Peptidau sy'n cynnwys methionin, dylai fod gan weddillion cystein neu dryptoffan amser storio cyfyngedig mewn hydoddiant oherwydd ocsidiad. Dylai'r peptidau hyn gael eu toddi mewn toddydd di-ocsigen. –
Gellir dadamidated glutamine ac asparagine i asid glutamig ac asid aspartic, yn y drefn honno. –
Gall cystein gael ei gylchrediad ocsideiddiol i ffurfio bond disulfide cystein-cystein (y gellir ei ffurfio o fewn neu rhwng bondiau disulfide). –
Y gweddillion a gyhuddir (asid aspartig, asid glutamig, lysin, arginine, histidin) yn hygrosgopig (amsugno dŵr o'r aer) ac yn tueddu i ffurfio viscous, olew clir. Efallai na fydd y newid corfforol hwn yn effeithio ar natur y peptid. Argymhellir bod peptidau o'r fath yn cael eu lyoffileiddio i gael gwared â symiau hybrin o ddŵr, yna degassed gyda nitrogen i sicrhau nad oes anwedd dŵr yn y vial, ac yna capio'n gyflym.

Er mwyn atal difrod rhag rhewi a dadmer dro ar ôl tro, rydym yn argymell bod defnyddwyr yn diddymu'r swm o peptid sy'n ofynnol ar gyfer yr arbrawf cyfredol yn unig. Dylid storio toddiant gormodol yn ≥ -20 o C nes bod angen.

Osgoi lleithder.
Gan fod lleithder yn lleihau sefydlogrwydd hirdymor peptidau yn sylweddol, rydym yn argymell ecwilibreiddio'r peptidau mewn sychwr i dymheredd ystafell cyn agor y ffiolau. Ar ôl cwblhau dosbarthu peptid, dylid glanhau'r peptidau sy'n weddill yn y tiwb yn ysgafn â nitrogen anhydrus, yna dylid capio'r cynhwysydd, wedi'i selio â ffilm selio, a'i storio ar -20 ° C.


Mae nodweddion hydoddedd gwahanol peptidau yn amrywio'n sylweddol. Gweddillion fel alanine (Ala), cystein (Cys), isoleucine (Gyda), leucine (lesu), methionin (Cyfarfu), ffenylalanin (Phe), a valine (Val) ychwanegu at hydroffobigedd a hydoddedd y peptid mewn hydoddiannau dyfrllyd, ac argymhellir bod y cwsmer yn dilyn y canllawiau hyn wrth addasu peptidau.

Priodweddau Hydoddedd

Mae hydoddedd peptidau yn dibynnu'n fawr ar y dilyniant asid amino. Peptidau hydroffobig naturiol (A, Dd, G, V, L, i, M, W, P gyda thuedd uwch) angen toddyddion organig ar gyfer hydoddi. Peptidau asidig (tueddiad uwch i D, E yn y dilyniant peptid) angen byfferau dyfrllyd sylfaenol ar gyfer hydoddi, tra peptidau sylfaenol (tueddiad uwch i K, H, ac R) angen byfferau dyfrllyd asidig ar gyfer hydoddi.

Dethol Toddyddion

O ystyried cyfyngiadau eich assay, rydym yn argymell defnyddio'r canllawiau canlynol i benderfynu ar y toddydd gorau ar gyfer hydoddi peptidau

Peptidau Hydroffobig

I ail-hydoddi peptidau hydroffobig, ychwanegu 100 µL o DMSO a sonigate nes bod hydoddiant homogenaidd yn cael ei ffurfio. Nesaf, ychwanegwch y byffer o'ch dewis i wneud a 1 hydoddiant mg/mL (po uchaf yw'r crynodiad peptid, y mwyaf o DMSO sydd ei angen).

Hydroffilig (Asidig) Peptidau

I ail-hydoddi peptidau asidig, ychwanegu 100 µL o 1% NH 4 OH i 1 mg o peptid a fortecs. Unwaith y bydd yr ateb yn glir, ychwanegwch y byffer o'ch dewis i wneud a 1 hydoddiant mg/mL.

Hydroffilig (Sylfaenol) Peptidau

I ailgyfansoddi peptid sylfaenol, ychwanegu dŵr distyll i 1 mg o peptid a fortecs.


Safon y diwydiant yw darparu peptidau ar ffurf lyophilized fel pwysau gros. Pwysau peptid gros yw cyfanswm pwysau'r holl gydrannau sy'n bresennol yn y powdr lyophilized. Mae hyn yn cynnwys y peptid o ddiddordeb, unrhyw amhureddau peptid, dwr, toddyddion gweddilliol, a gwrthun.

I'r gwrthwyneb Rhwyd pwysau peptid, cyfrifo o'r Cynnwys peptid net, yw pwysau dim ond y peptid cydran sy'n bresennol yn y powdr lyophilized. Mae hyn yn cynnig crynodiadau mwy cywir o'ch atebion peptid dilynol. Gan hyny, fe wnaethom argymell symiau pwysau peptid net ar gyfer Peptid Custom gorchmynion.

Darlun Cynnwys Net Peptid

Cynnwys Net Peptid cyflawnir mesuriad trwy ddadansoddiad asid amino (AAA; cywirdeb cyfyngedig ond mae angen swm deunydd isel) neu ddadansoddiad elfennol (CHN; angen miligramau o peptid ond mae'n fwy cywir). Mae'r ddau ddull yn rhoi gwerth canrannol (h.y., 75% cynnwys peptid net).

Mae'r Cynnwys Peptid Net yn dibynnu ar faint o wrthiant sy'n bresennol*, sy'n dibynnu ar y dilyniant peptid. Yn y bôn, po uchaf yw'r tâl peptid, yr isaf yw'r cynnwys peptid

*Nodyn: Mae'r elfen a ddefnyddir i gyfrifo cynnwys peptid net yn seiliedig ar y gwrth-ion peptid. Gwneir hyn i sicrhau nad yw'r gwrth-ion yn cyfrannu at swm y cynnwys peptid. Er enghraifft, pan mai TFA neu asetad yw'r gwrth-ion, defnyddir nitrogen oherwydd ei fod i'w gael yn y peptid ond nid mewn TFA nac asetad. Gellir defnyddio Carbon neu Nitrogen pan fo clorid yn wrth-ion am yr un rheswm.

Cyfrifiadau Pwysau Net Peptid:

Nifer Net Peptid (cyfanswm peptid) - dull a ddefnyddiwn ar gyfer gorchmynion peptid arferiad net.

Lluoswch y Ganran Cynnwys Peptid Net (ffurf ddegol) gan y Peptide Gross Weight, i gael y swm o Net Peptid Swm (cyfanswm peptid).

Er enghraifft:
Canys 5 mg peptid/ffiol gros:
Cynnwys net peptid yw 84%.
Union swm cyfanswm y peptid = 0.84*5 mg = 4.2 mg cyfanswm peptid

Nifer Net Peptid o Llog - mwyaf cywir — gall cwsmer ddefnyddio'r dull hwn ar ei ben ei hun i gyfrifo peptid diddordeb.

Lluoswch Ganran Cynnwys Peptid Net â Phwysau Crynswth y Peptid, a'r Purdeb Peptide (gan HPLC), i gyfrifo union swm y peptid o ddiddordeb sydd gennych. Y cant peptid net (ffurf ddegol) yn cael ei luosi â phurdeb peptid (ffurf ddegol).

Er enghraifft:
Canys 5 mg peptid / ffiol gros gyda:
Cynnwys net peptid yw 84%.
Swm union peptid o ddiddordeb yw = 0.84*0.96*5 mg=4.03 mg


Mae MOL Changes yn defnyddio cemeg Fmoc cyfnod solet yn hytrach na chemeg BOC. Mae cemeg Fmoc yn caniatáu ar gyfer cael gwared ar grwpiau diogelu gan ddefnyddio amodau ysgafn yn ystod elongation peptid, tra bod cemeg BOC yn gofyn am ddefnyddio asid cryf i gael gwared ar y grwpiau diogelu yn ystod elongation peptid. Yn ogystal, Mae cemeg FMoc yn defnyddio asid trifluoroacetig (TFA) i gael gwared ar y peptid o'r resin, tra bod cemeg BOC yn defnyddio asid hydrofluorig (HF). Mae HF yn ddi-liw, hynod gyrydol, a gwenwyn cyswllt.

Felly, Mae MOL Changes yn defnyddio cemeg Fmoc gan ei fod yn fwy ysgafn, hyblyg, ac amlbwrpas o gymharu â chemeg BOC.


Mae molarity yn cyfeirio at grynodiad molar hydoddiant, sef nifer y molau o hydoddyn wedi hydoddi yn 1 litr o doddiant, wedi'i fynegi fel mol/L, neu M.

Molaredd [M] = Offeren / (Cyfrol x Offeren Molar); Mole = Crynodiad (g/L) x Cyfrol (L)/MW (g/mol)

Enghraifft:
Wedi rhoi: 1mg o bowdr peptid sych gyda MW: 20KDa (Màs molar o peptid yw 20 g/mol)
Pennu molarity gyda màs hysbys a chyfaint hysbys
Ar gyfer hydoddiant 1ml o'r peptid hwn:
Molaredd = Offeren (0.001g) / (cyfaint (0.001L) x Offeren Molar (MW 20,000) = 50 µM

I bennu màs i gyflawni molarity penodol:
Os am ​​eich assay, mae angen hydoddiant peptid gweithio 0.01mM arnoch mewn 1ml o ddŵr, yna cyfrifwch y màs sydd ei angen fel a ganlyn:

Offeren = Molaredd x Cyfaint x Offeren Molar
Màs = 0.01mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0.0002g

Gan hyny, bydd angen 0.2mg/ml o peptid arnoch i gael hydoddiant gweithredol o 0.01mM.


Rydyn ni'n darparu hydoddiant powdr a pheptid lyophilized neu amrwd.


Mae hydoddedd peptid mewn hydoddydd penodol yn dibynnu ar y dilyniant asid amino ac yn aml yn anodd ei ragweld. Yn achos peptidau catalog, rhestrir y wybodaeth hydoddedd ar y daflen ddata QC. Ar gyfer peptidau arferiad, gweler yr adran sy'n dwyn y teitl “Sut ddylwn i hydoddi fy peptid”.


Nid yw cynnwys peptid yn arwydd o'r purdeb peptid gan fod y rhain yn ddau fesuriad ar wahân. Pennir purdeb gan HPLC dadansoddol ac mae'n nodi presenoldeb / absenoldeb halogion peptidig eraill (h.y. peptidau cwtogi).

Mae cynnwys peptid net yn pennu swm gwirioneddol y peptid (peptid o ddiddordeb yn ogystal â'r halogion peptid) bresennol yn y sampl. Mae'r cynnwys peptid net yn cael ei fesur yn draddodiadol gan ddadansoddiad asid Amino (AAA; cywirdeb cyfyngedig ond mae angen swm isel o ddeunydd) neu ddadansoddiad elfennol (CHN; angen miligramau o peptid ond mae'n fwy cywir).


Newidiadau MOL caiff peptidau eu puro'n gyffredinol gan HPLC paratoadol cam cefn, defnyddio 2 byfferau yn cynnwys 0.1% asid trifluoroacetig (TFA). Y byffer cyntaf (Clustog A) yn gyfansoddedig o 0.1 % TFA mewn dŵr deionized a'r ail glustog (Clustog B) yn gyfansoddedig o 0.1 % TFA mewn asetonitrile (ACN).

Yn gyffredinol, mae peptidau crai yn cael eu toddi yn gyntaf mewn hydoddiant o naill ai Clustog A, rhywfaint o glustog B, neu doddydd pegynol organig fel DMSO. Pe bai hydoddydd pegynol organig neu Byffer B yn cael ei ddefnyddio, bydd yr ateb clir hwn yn cael ei wanhau yn gyntaf gyda Buffer A. Nesaf, mae'r hydoddiant peptidig yn cael ei hidlo a'i lwytho ar y system paratoadol HPLC. Defnyddio graddiant dull wedi'i optimeiddio, yna cesglir ffracsiynau yn seiliedig ar y darlleniadau amsugnedd. Yna caiff pob ffracsiwn ei ddadansoddi trwy HPLC dadansoddol i sicrhau bod purdeb pob ffracsiwn yn bodloni'r fanyleb purdeb ofynnol.

Yna mae'r ffracsiynau “pur” hyn yn cael eu cronni gyda'i gilydd a'u lyoffileiddio. Yna caiff y powdr “pur” ei brofi am burdeb a hunaniaeth i sicrhau bod y peptid cywir wedi'i weithgynhyrchu.

Yn olaf, mae grŵp QC annibynnol yn AnaSpec eto'n profi'r peptid i sicrhau bod yr holl briodoleddau profi yn bodloni'r manylebau gofynnol.


Mae'r enwau rhyngwladol a ddefnyddir ar gyfer y dilyniant termini fel a ganlyn:

– N-terminws: Mae H yn golygu amin rhad ac am ddim (NH2-), Mae Ac yn golygu acetyl [CH3C(O)-NH-], Mae Pyr yn golygu asid pyroglutamig
– C-terminal: Mae OH yn golygu asid rhydd (-COOH), Mae NH2 yn golygu amide [-CONH2]

– Mae addasiadau i'r gadwyn ochr o asidau amino yn cael eu darlunio yn y cromfachau ar ôl yr asid amino cyfatebol. Er enghraifft; serine ffosfforyleiddiad = S(PO3H2) neu lysin epsilon-N-asetylaidd = K(Ac)


Yn ystod cynhyrchu peptid, mae ïonau yn y toddiannau synthesis a phuro yn rhwymo i gadwyni ochr asid amino gwefredig y peptid, ffurfio halwynau. Gelwir yr ïonau hyn yn wrthdrawiadau peptid ac maent yn helpu i gydbwyso gwefr y peptid.

Asid trifluoroacetig (TFA) yn cael ei ddefnyddio'n gyffredin mewn synthesis peptid a phuro.

Mae'n ffurfio halwynau trifluoroacetate gydag asidau amino sylfaenol (e.e., lysin, arginine, histidin) a'r amine N-terminal rhad ac am ddim. Felly, trifluoroacetate yw'r gwrthweithiad rhagosodedig fel arfer.

Mae'r nifer lleiaf o foleciwlau TFA sydd wedi'u rhwymo i peptid yn gymesur â nifer y gweddillion sylfaenol mewn dilyniant peptid penodol. Felly, y gweddillion mwy sylfaenol sy'n bresennol mewn peptid, yr isaf yw cynnwys peptid net y powdr lyophilized. I roi cyfrif am y TFA neu'r cynnwys dŵr sy'n bresennol yn y sampl, rydym yn argymell cynnal assay cynnwys peptid ar gyfer pob peptid arferiad.

Dŵr ac asid trifluoroacetig (TFA) yn sgil-gynhyrchion y broses buro. Fodd bynnag, Gall TFA godi pryderon ynghylch gwenwyndra yn fyw ac astudiaethau cyn-glinigol. Felly, Mae MOL Changes yn cynnig asetad diwenwyn, clorid, neu gyfnewidwyr halen amoniwm.


Peptidau yn cynnwys Cys, Cyfarfu, neu Trp yn heriol i syntheseiddio a chael cynhyrchion purdeb uchel. Mae hyn yn bennaf oherwydd ansefydlogrwydd a thueddiad i ocsidiad y grwpiau swyddogaethol hyn. Mae angen sylw arbennig ar gyfer defnyddio a storio'r peptidau hyn er mwyn osgoi agor y ffiolau dro ar ôl tro.

A wnaethom ni golli eich cwestiwn? Gollwng llinell atom a byddwn
mynd yn ôl i mewn 24 oriau.

 

Cartref Chwiliwch Whatsapp Gwasanaethau Cynnyrch