Ինչպես լուծել լիոֆիլացված փոշու պեպտիդային սրվակները?

Ինչպես լուծել լիոֆիլացված փոշու պեպտիդային սրվակները?

Համապատասխան տարրալուծման մեթոդը կարևոր գործոն է պեպտիդային փորձերի հաջողության համար. Սխալ տարրալուծումը կհանգեցնի պեպտիդների կորստի և փորձի ձախողմանը. Այնուամենայնիվ, Իդեալական տարրալուծման մեթոդ գտնելը երբեմն բավականին դժվար է. Ստորև ներկայացված են լուծարման մեթոդները, որոնք առաջարկվել են MOL Changes-ի երկու տեխնիկական խմբերի կողմից. մեթոդ

MOL Changes Technology Group-ի լուծարման ուղեցույց

Պեպտիդների տարրալուծման հիմնական խնդիրը երկրորդական կառուցվածքի առաջացումն է.

Թեեւ հիդրոֆոբ պեպտիդային շղթաների երկրորդական կառուցվածքների առաջացումը առավել ակնհայտ է, բացառությամբ ամենակարճ պեպտիդային շղթաների, այս երեւույթը տեղի է ունենում գրեթե բոլոր պեպտիդային շղթաներում, անկախ բևեռականությունից. Հետեւաբար, Պոլիպեպտիդների լուծարման առաջին սկզբունքը ստերիլ թորած ջրի կամ դեիոնացված ջրի օգտագործումն է (կամ առանց թթվածնի ջուր, եթե պայմանները թույլ են տալիս).

Պեպտիդային լուծույթը կարող է հանդիպել բակտերիաների քայքայման. Այս երեւույթից խուսափելու համար, պեպտիդը պետք է լուծարվի ստերիլ թորած ջրի մեջ, կամ զտված է ֆիլտրի թաղանթով, որի ծակոտի չափը 0.45 կամ 0.2 մկմ ստերիլիզացման համար. Cys պարունակող պոլիպեպտիդներ, հանդիպեց, և Trp-ը հատկապես ենթակա են օքսիդացման, ուստի դրանք պետք է լուծվեն թթվածնազուրկ ջրի մեջ. Թթվածնազուրկ ջուր կարելի է ձեռք բերել իջեցված ճնշման տակ գազազերծելով՝ իներտ գազեր ներարկելու միջոցով (ազոտ, հելիում, և արգոն).

Եթե ​​պեպտիդը մաքուր ջրի մեջ անլուծելի է, Ուլտրաձայնային բուժումը կարող է օգնել կոտրել մասնիկները և բարձրացնել լուծելիությունը. Նշում: Ուլտրաձայնային բուժումը կառաջացնի լուծույթի տաքացում և պեպտիդի քայքայում.

Եթե ​​պեպտիդը պարունակում է բազմաթիվ հիմնական ամինաթթուներ, օգտագործել 1-10% քացախաթթվի ջրային լուծույթ; շատ հիդրոֆոբ պեպտիդների համար, օգտագործել 50% քացախաթթու.

Եթե ​​պոլիպեպտիդը պարունակում է մեծ քանակությամբ թթվային ամինաթթուներ, այն կարող է լուծարվել ա 1 դեպի 10% ամոնիակի լուծույթ կամ ցնդող ալկալային բուֆեր, ինչպիսիք են էթիլ մորֆինի ացետատը կամ բիկարբոնատը. Քրոմատոգրաֆիայից առաջ pH արժեքը պետք է ճշգրտվի.

Եթե ​​պեպտիդը պետք է բեռնվի սյունակի վրա, օրգանական լուծիչի քանակը պետք է լինի շատ փոքր, հակառակ դեպքում պահպանման ժամկետը լրջորեն կազդի.

Եթե ​​պոլիպեպտիդը շատ հիդրոֆոբ է, քանի որ այն պարունակում է անուշաբույր ածխաջրածնային կողային շղթաներ, ինչպիսիք են Վալը, Լեյ, հանդիպեց, Ֆե, Տիր, Ալա, և այլն:, կամ չեզոք պեպտիդ է, թաղանթային դենատուրանտների օգտագործումը, ինչպիսիք են DMF-ը կամ DMSO-ն, կարող են օգնել լուծարել պոլիպեպտիդը:

ա. Բարձր կոնցենտրացիայի թաղանթային դենատուրանտները օգնում են պոլիպեպտիդը լուծարել՝ քայքայելով նրա երկրորդական կառուցվածքը.

բ. Մեմբրանի դենատուրանտները հարմար են պեպտիդային անալիզի լուծույթների պատրաստման համար, բայց կարող է խանգարել նրանց կենսաբանական գործունեության հետազոտություններին.

գ. DMF-ն լավագույն դենատուրանտն է (ամենաբարձր կոնցենտրացիան կարող է հասնել 30%), և ավելացվում է կաթիլաբար, մինչև պեպտիդը լուծարվի.

դ. Հակադարձ փուլային քրոմատոգրաֆիայի ժամանակ, DMF-ը դուրս կհոսի էլուենտի առջևի գագաթի հետ միասին. Կախված ներարկման ծավալից, գագաթնակետային արժեքը կարող է շատ բարձր լինել. Պեպտիդների մեծ մասը կարող է ցողվել մի քանի րոպեի ընթացքում DMF-ի մեծ քանակությամբ լուծույթից հետո. Եթե ​​պեպտիդային շղթան փոքր է և շատ վաղ է ցանում, պեպտիդի քանակը կկրճատվի.

Peptide solubilization method

MOL Changes Technical Group II-ի լուծարման ուղեցույց

Ինչպես տարբերել, թե արդյոք ամինաթթուները չեզոք են, թթվային կամ ալկալային, և հաշվարկել տարրալուծման մեթոդը:

1. Նշանակե՛ք յուրաքանչյուր թթվային ամինաթթու պոլիպեպտիդային հաջորդականության մեջ, ներառյալ ասպարտաթթուն Asp (Դ), գլուտամինաթթու Գլյու (Ե) և C-տերմինալ կարբոքսիլ-COOH որպես -1; յուրաքանչյուր հիմնական ամինաթթու, ներառյալ արգինին Arg ( Ռ), լիզին Lys (Կ), հիստիդին Հիս (Հ) իսկ N-տերմինալ amino-NH2-ին վերագրվում է արժեքը +1; չեզոք ամինաթթուներն են 0. Սրա հիման վրա, հաշվարկվում է ամբողջ պոլիպեպտիդի արժեքը, իսկ հաշիվը դրական է Պեպտիդները բացասական միավորով կոչվում են հիմնական պեպտիդներ, բացասական գնահատական ​​ունեցողները կոչվում են թթվային պեպտիդներ, իսկ նրանք, ովքեր զրոյական միավոր ունեն, կոչվում են չեզոք պեպտիդներ.

2. Եթե ​​դա ալկալային պեպտիդ է, try to dissolve it with water first; if it cannot be dissolved, try to use 10% – 30% քացախաթթու; if the peptide is still insoluble, try to use pure acetic acid and trifluoroacetic acid TFA (<50 μl) to dissolve it, and then Dilute the peptide solution to the desired concentration.

3. If it is an acidic peptide, try to dissolve it with water first; if it cannot be dissolved with water, try to use 13% ammonia water (v/v) to dissolve it, and dilute the peptide solution to the required concentration. If the peptide sequence contains cysteine Cys (Գ), it cannot be dissolved in alkaline solution. Please try the methods below.

4. Neutral peptides are usually dissolved in organic solvents. Առաջին, try to use acetonitrile (ացետոնիտրիլ), or methanol (methanol) or isopropanol (isopropanol) to dissolve; շատ հիդրոֆոբ պեպտիդների համար, first dissolve with a small amount of dimethyl sulfoxide (DMSO) and dilute with water to Required concentration; if the peptide sequence contains cysteine Cys (Գ), use dimethylformamide (DMF) կամ N-methylpyrrolidone (NMP) լուծարման համար. Պեպտիդների համար, որոնք հակված են ագրեգացման, նախ ավելացրեք 6M գուանիդին·HCl կամ 8M urea (Միզանյութ) դրանք լուծարելու համար, այնուհետև դրանք նոսրացրեք մինչև անհրաժեշտ կոնցենտրացիան.

նկարազարդել:

1. Պահպանումը և հետագա օգտագործումը հեշտացնելու համար, խորհուրդ է տրվում լուծարել պեպտիդը մոտ խտության 1-2 մգ/մլ.

2. Սովորական պեպտիդային սառեցված չորացրած փոշին կարելի է պահել -20°C-ում մեկ տարուց ավելի. Լուծված պեպտիդների համար, Այն խորհուրդ է տրվում ալիկոտել և պահել -20°C ջերմաստիճանում; եթե պեպտիդային հաջորդականությունը պարունակում է մեթիոնին Met (Մ), ցիստեին Թթու Cys (Գ) կամ թիրոզին Tyr (Յ) խորհուրդ է տրվում պահել թթվածնազուրկ միջավայրում՝ օքսիդացումից խուսափելու համար.

Կից ամինաթթուների ցանկը:

1.Չեզոք ամինաթթուներ: գլիցին, ալանին, լեյցին, isoleucine, վալին, ցիստեին, մեթիոնին, թրեոնին, սերին, ֆենիլալանին, թիրոզին, տրիպտոֆան թթու, պրոլին, ասպարագին և գլուտամին

Ֆeatures: Այս տեսակի ամինաթթվի մոլեկուլը պարունակում է միայն մեկ ամինո խումբ և մեկ կարբոքսիլ խումբ

2.Թթվային ամինաթթուներ: գլուտամիկ թթու, ասպարտիկ թթու

Առանձնահատկություններ: Այս տեսակի ամինաթթվի մոլեկուլը պարունակում է մեկ ամինո խումբ և երկու կարբոքսիլ խմբեր

3.Հիմնական ամինաթթուներ: լիզին, արգինին, հիստիդին

Առանձնահատկություններ: Ամինաթթուների այս տեսակն իր մոլեկուլում պարունակում է դիամինոկարբոքսիլ խումբ; հիստիդինը ունի ազոտի օղակ և թույլ ալկալային է, և նաև հիմնական ամինաթթու է.

ադմինիստրատոր Անձնանշան

Միաո Հե

Առաքման համակարգերի գիտաշխատող Հիմնական փորձաքննություն: Պեպտիդների բերանային առաքում, լիպիդային նանոմասնիկ (LNP) ինկապսուլյացիան, բջիջ ներթափանցող պեպտիդներ (CPP-ներ), և կայուն արձակման ձևակերպումներ.

Անձնագիր: Պեպտիդային դեղամիջոցների ստեղծման հիմնական մարտահրավերները նրանց կարճ կիսամյակի և բանավոր ընդունման դժվարության մեջ են:, և Միաո Նա այս խնդիրների լուծման առաջատար մասնագետ է. Նա մեծ փորձ ունի պեպտիդների առաքման համակարգերի ոլորտում. Նա ներկայումս կենտրոնացած է նոր ներթափանցման ուժեղացուցիչների և նանոսֆերների մշակման վրա՝ պեպտիդների կենսահասանելիությունը զգալիորեն բարելավելու համար:.

Փաստը ստուգված է & Խմբագրական ուղեցույցներ
Վերանայել է: Առարկայական փորձագետներ
Կիսվեք այս հոդվածով
Տուն Որոնում Whatsapp Ծառայություններ Արտադրանք