Azịza ngwa ngwa
Otu peptide nwere ike ịgbakọta nke ọma ma ka na-ada na nzọụkwụ ikpeazụ. Enwere ike ichekwa saịtị mgbakwunye echere, Nchekwa mbụ nwere ike e…
Otu ndị na-echekwa Amino - Hazie Mgbanwe Peptide Multistep
Otu esi etolite ụlọ nyocha Peptide Bonds Peptoid Otu peptide nwere ike ịgbakọta nke ọma ma ka na-ada na nzọụkwụ ikpeazụ. Enwere ike ichekwa saịtị mgbakwunye echere, Nchekwa mbụ nwere ike ikpughe amine na-asọ mpi, ma ọ bụ akara arụnyere nwere ike ọ gaghị adị ndụ n'ọrụ ọzọ. Maka ọrụ multistep, ịhọrọ otu nchekwa amino maka njikọ peptide pụtara ịhazi akụkọ kemịkalụ zuru oke nke ebumnuche, Ọ bụghị naanị ịhọrọ Fmoc ma ọ bụ Boc maka mgbakọ agbụ.
Ajụjụ bara uru bụ kpọmkwem: Kedu otu ọrụ ga-adịrịrị na nzọụkwụ ọ bụla, na otu ndị ọzọ ga-anọgide na-agbanweghị agbanwe? Azịza ya kwesịrị ịdị na ndekọ ụzọ nke ụlọ nyocha ọzọ nwere ike nyochaa. Ndepụta aha otu nchekwa na-enweghị saịtị ha, mwepụ nkebi, na akaebe ndakọrịta ezughị oke.
Edemede a na-egosi nlebanya nlebanya n'echiche kama ịbụ ụkpụrụ egosipụtara na nnwale. Ọ na-ekwu maka mgbagha ụzọ, nkọwa ọdịda, na ihe akaebe dị mkpa maka mbufe. Ọnọdụ reagent n'ezie yana oke nnabata chọrọ mmepe maka usoro akọwapụtara, nkwado, mgbanwe, na ọnụ ọgụgụ.
Chọpụta ihe nchebe Amino nwa oge site na ịnweta yinye akụkụ ahọpụtara
A na-ejikarị Fmoc eme ihe dị ka ntọala-labile nchebe nwa oge nke otu alfa-amino na-eto eto. Boc bụ acid-labile ma nwee ike ịrụ ọrụ dị iche iche dabere na atụmatụ n'ozuzu ya, gụnyere nchebe alfa-amino nwa oge na njikọ dabeere na Boc ma ọ bụ nchebe amino n'akụkụ n'ime atụmatụ dabere na Fmoc. Otu aha otu ahụ anaghị akọwa ebe ma ọ bụ ebumnuche ya.
Nchedo orthogonal pụtara na enwere ike iwepụ otu ahọpụtara n'okpuru ọnọdụ na-echekwa otu ndị ọzọ achọrọ na ọkwa ahụ. Nke a bụ mmekọrịta n'ime otu ụzọ. Ịkpọ ndị otu nchekwa abụọ orthogonal anaghị egosi na ọ dabara na njikọ ọ bụla, fluorophore, glycan, usoro, ma ọ bụ ikpughe ugboro ugboro.
Nchedo amide azụ bụ ngwá ọrụ ọzọ dị iche iche. Ọ nwere ike gbanwee omume mkpokọta ma ọ bụ gbochie amide azụ azụ na-emeghachi omume na-etinye aka na nhazi aspartimide.. O kwesịghị inwe mgbagwoju anya na nchekwa nwa oge nke otu alfa-amino n'efu ejiri maka ndọtị yinye oge niile.
Ụzọ bara uru iji nyochaa ndakọrịta bụ ịdọrọ ọnọdụ kemịkalụ tupu ọrụ ọ bụla ahọpụtara. Nke American Peptide Society SPPS primer na-enye mmeghe nke nchebe nwa oge na mgbakọ. Ọrụ multitag na-agbakwụnye ihe ọzọ achọrọ: Ụzọ ahụ ga-echekwa ihe dị iche iche a chọrọ n'etiti saịtị n'akụkụ akụkụ yana njedebe nke agbụ na-eto eto.
Ya mere, nlebanya ndakọrịta kwesịrị ịgụnye ihe niile dịbu mgbe ewepụrụ otu. Ọ bụrụ na etinyere mgbanwe dị nro n'oge, ọ na-eketa ọnọdụ nke nzọụkwụ ọ bụla e mesịrị. Ịwụnye ya ma emechaa nwere ike ibelata mkpughe ahụ mana mepụta nsogbu nhọrọ nhọrọ ma ọ bụ solubility ọhụrụ.
Ngụkọta mkpughe kwesịrị ịnọ na nyocha ahụ. N'atụnyere echiche efu, Ịwụnye otu mmetụta siri ike tupu ihe omume ọgwụgwọ iri anọ na-esote na-enye ya ugboro asatọ ihe omume nrụnye tupu ise.. Nke a anaghị akọwa ọdịiche mbelata okpukpu asatọ: onye mkpughe, steeti reagent, Okpomọkụ na mmetụta na-abụghị nke ntanetị nwere ike ịdị iche. Ọ na-egosi ihe kpatara "kwụsiri ike ruo n'ala" na-enweghị akụkọ mkpughe anwalela nke na-edochaghị anya ịkwado mbufe ụzọ.
Atụmatụ mgbanwe saịtị abụọ nwere echiche
Ihe atụ echiche. Otu otu chọrọ peptide linear nwere akara N-terminal akọwapụtara, mkpado dị iche na otu amino nke Lys8, lysine nke abụọ na-agbanweghị agbanwe na ọnọdụ 13, na otu carboxyl C-terminal efu. A ga-achọrọ usoro njuju na nhazi mkpado tupu enwee ike ịkwado ezigbo ụzọ. Mgbochi imewe ndị a zuru ezu iji gosipụta echiche nyocha.
Ụzọ ahụ ga-amarịrị ebe amino atọ: N njedebe, Lys8, na Lys13. Ikpughe ụdọ akụkụ abụọ nke lysine tupu ịgbakwunye mkpado amine-reactive anaghị ewepụta mgbanwe nhọrọ nke Lys8.. Ngụkọta mkpokọta ihe achọrọ agaghịkwa egosi na mkpado dị na saịtị echere.
Otu atụmatụ ndoro-ndoro ochichi na-eji otu nchebe akụkụ-agbụ a na-ewepụ ahọpụtara na Lys8 ka ọ na-ejigide nchekwa na Lys13 ma na-achịkwa nnweta N-terminal.. Onye ọzọ na-eme ntuli aka na-achịkọta onye echekwara nke ọma ma ọ bụ rụọ ọrụ nke ọma Peptide Antimicrobial n'etiti ma mezue ngbanwe emechaa na ngwọta. Ọ dịghị ụzọ ọ bụla a na-ahọrọ na-akpaghị aka; ntụnyere dabere na mkpado kwụsie ike, solubility etiti, nhọrọ, ime ka ọ dị ọcha, na ihe akaebe na ọkwa ọ bụla.
Maka ebumnuche echiche atọ-amine, steeti mbụ nwere ike ikpughe naanị N njedebe ebe Lys8 na Lys13 ka egbochiri. Mgbe wụnye N-terminal mkpado, Steeti na-esote ga-ekpughere Lys8 ebe Lys13 ka na-egbochi ma mkpado nke mbụ ka dịgidere. Mwepụ ikpeazụ nke nchebe fọdụrụ ga-ebunye Lys13 na-agbanweghị agbanwe na-ewepụghị mkpado echere. Nke a bụ usoro steeti kemịkalụ a tụrụ atụ, ọbụghị nkwado nke nchikota otu na-akọwapụtaghị.
Nwalee maapụ steeti megide ihe atụ: ikpughe Lys8 na Lys13 ọnụ tupu ịgbakwunye mkpado nke abụọ enweghị ike ịmepụta Lys8 selectivity naanị n'ihi na mmeghachi omume na-agbakwụnye otu mkpado kwa yinye na nkezi.. Otu nkezi nwere ike ibilite site na isomers ọnọdụ ma ọ bụ ngwakọta nke agbụ na-enweghị akara yana ịba ụba. Ihe akaebe dị n'etiti na nke ikpeazụ na saịtị ga-ekewapụta ohere ndị ahụ. Ngụkọta mkpokọta mmụba tụrụ ihe onwunwe dị iche site na ebe mgbakwunye.
Ndị otu ahụ kwesịrị ịjụ ụzọ ma ọ bụrụ na nchebe achọrọ ya na-ewepụkwa otu ga-adịrịrị ma ọ bụ mebie mkpado arụnyere n'okpuru ọnọdụ ndị dị mkpa.. Ọ bụrụ ndakọrịta Otu esi etolite ụlọ nyocha Peptide Bonds amaghi, kaa akara n'ụzọ ahụ ka ọ chọrọ ọmụmụ ihe gbasara ime omume. Agbanwela “a nwalebeghị” ka ọ bụrụ nkwa nke ịga nke ọma ma ọ bụ nkwupụta nke agaghị ekwe omume.
Hazie ihe atụ ndị dị n'etiti tupu ị na-emefu ihe. Aliquot ewepụtara naanị mgbe etinyere mkpado abụọ ahụ enweghị ike igosi ozugbo ma mkpado mbụ ọ lanarịrị ọkwa Lys8 ahọpụtara agbanweghị.. Ebe ndakọrịta ahụ bụ isi ejighị n'aka, chekwaa ihe nnochite anya n'ihu na mgbe ọrụ ahụ gasịrị. Ntụnyere kwesịrị ileba anya mkpado na saịtị ọhụrụ dị ọnụ, na ihe nlele ọ bụla na-eri ihe gụnyere na mmefu ego ihe.
Mkpuchi iberi ga-adabakwa n'ihe a na-ekwu. Iberibe ihe ọmụma saịtị nke nwere Lys8 mana ewepụrụ Lys13 nwere ike inye aka n'ịkọpụta mpaghara ma ọ bụrụ na edobere mkpado ahụ ma jiri ntụkwasị obi kenye iberibe ahụ.. Iberibe nwere saịtị abụọ ahụ nwere ike kwado nhazi emegharịgharịrị ma hapụ saịtị ndị ahụ edozighị ya. Enweghị iberibe ihe ọmụma bụ oghere dị n'ihe akaebe n'otu ebe, ọ bụghị ihe akaebe na ọ nweghị ọnọdụ ọzọ dị. Otu esi etolite ụlọ nyocha Peptide Bonds
| Atụmatụ nchebe | Ajụjụ ndakọrịta | Ngosipụta ọdịda nyocha | Nyochaa nzaghachi |
|---|---|---|---|
| Mwepụ Fmoc ugboro ugboro n'oge mgbakọ | Usoro na otu ndị echekwabara nwere ike ịnabata mkpughe ntọala? | Mgbatị ezughị ezu ma ọ bụ ihe ndị dabere n'usoro ọhụrụ | Nyochaa akụkọ mkpughe na ịkpa oke nchebe fọdụrụ na adịghị ọcha ndị ọzọ |
| E wepụrụ ihe nchebe acid-labile na-eru nso mmecha | Mgbanwe arụnyere na ngwaahịa e bu n'obi ga-adị ndụ na gburugburu ebe mkpochapụ? | Gbanwee profaịlụ akara, ihe na-atụghị anya ya, ma ọ bụ ụdị echedoro ezughị ezu | Tulee ndị etiti akọwapụtara wee chọpụta ma ngwaahịa iguzosi ike n'ezi ihe yana mmechi zuru oke |
| Mwepu agbụ akụkụ ahọpụtara | Naanị saịtị e bu n'obi na-adị n'okpuru ọnọdụ ụzọ ahọpụtara? | Otutu ụdị akpọrọ aha ma ọ bụ isomers ọnọdụ edozibeghị | Chọrọ ihe akaebe na-emetụta saịtị; mkpokọta mkpokọta naanị ezughi oke |
| Nchedo amide azụ na saịtị dị ize ndụ | Nwere ike iwebata, njikọ, na iwepụ ikpeazụ ga-agwụcha na-emebighị atụmatụ ndị ọzọ? | Mmeghachi omume n'akụkụ ebumnuche ekpochapụla mana nsogbu njikọta ma ọ bụ mwepụ ọhụrụ | Nyochaa profaịlụ adịghị ọcha yana mgbake dịpụrụ adịpụ |
Tụgharịa asụsụ mmeghachi omume akụkụ na-achọpụtaghị ha site n'otu ọnụ ọgụgụ kasị elu
Nhazi aspartimide dị mkpa mgbe usoro nke nwere Asp na akụkọ ihe mere eme ya na-enye ohere ịgbagharị cyclization metụtara ọrụ carboxyl n'akụkụ yana ọkpụkpụ azụ azụ amide.. Mmeghachi omume ndị na-esote nwere ike iwepụta ụdị nhazi ihe metụtara ya. Ọnụnọ nke ihe fọdụrụ nke Asp naanị anaghị ewepụta ego ma ọ bụ njirimara adịghị ọcha ọ bụla na ọrụ ọhụrụ..
Abdel-Aal na ndị ọrụ ibe Hmnb ọmụmụ na-egosipụta nchebe azụ na nchịkọta ahọpụtara- na ihe atụ nke aspartimide. Iwebata ya na mwepụ ya bụ mgbanwe ndị ọzọ, ọ bụghị naanị mgba ọkụ na-ewepụ otu ihe egwu. Tupu ịgbazinye ụzọ ahụ maka ebumnuche mkpado abụọ, nyochaa ma arụ ọrụ achọrọ mechaa na-echekwa mkpado yana ma mwepụ ahụ na-ahapụ ọkpụkpụ azụ echere na ọ nweghị.
Ịgba ọsọ na nchebe ezughị ezu chọrọ ajụjụ dị iche iche. Otu mgbochi fọdụrụnụ nwere ike igbochi njikọ a chọrọ na-agbanweghị nhazi; mgbanwe nhazi nwere ike ịhapụ ihe mejupụtara ahaghị agbanwe agbanwe. Enweghị ike ịchọpụta nke ọ bụla site na nzaghachi akara ikpeazụ dị ala. Soro ọdịiche molekụla a na-enyo enyo yana etiti nke ọ gaara apụta.
Nchedo na-ezughị ezu nwere ike ịhapụ saịtị echere na ọ naghị adị. Ma mkpụrụ akara akara dị ala nwere nkọwa ndị ọzọ enwere ike ime, gụnyere mmeghachi omume asọmpi, ihe na-enweghị ike ịnweta, ma ọ bụ mfu n'oge ọrụ. Chọpụta ma etiti dị mkpa ọ nọ n'ezie tupu ha ekwupụta ọdịda ahụ sitere na otu nchekwa. Peptide maka mbufụt
Chromatogram crude nwere ike ikpughe ihe dị iche iche kwesịrị nyocha, mana oge njigide naanị anaghị achọpụta ngwaahịa n'akụkụ. Uka na-adịghị emebi emebi nwere ike ịkwado ọrụ nhazi mgbe ọ na-efunahụ ọnọdụ ọnọdụ ma ọ bụ stereochemical. Jiri usoro a na-enyo enyo ka ịhọrọ nha ọzọ na ihe ntụnye aka; jigide nkọwa ndị ọzọ ruo mgbe ihe akaebe na-egosi ọdịiche ha.
Nyefee ụzọ dị ka usoro nke steeti kemịkalụ nyochara
Ndekọ kacha nta gụnyere usoro ebumnuche yana ọnụọgụ, nhazi, njedebe ikpeazụ, mgbanwe ọ bụla ezubere na njikọ mgbakwunye, na njirimara nke otu nchekwa nchekwa ọ bụla na saịtị ọ bụla. Ọ gụnyekwara nkwado ma ọ bụ njikọ, ụdị ụzọ, akụkọ ihe mere eme, ihe nchọpụta nlere etiti, mkpebi nke ịdị ọcha, na ngwugwu nyocha ikpeazụ.
Maka ọkwa nke ọ bụla, ezipụta otu echere maka iwepụ, akụkụ ọ bụla nke ga-adị ndụ, yana nleba anya nke ga-ama ọdịiche dị n'etiti etiti na ihe ndị ọzọ nwere ezi uche. N'ihi na Lys8 unmasking ogbo, nke ahụ pụtara ihe akaebe maka Lys8 dị yana nchekwa Lys13 edobere yana mkpado mbụ adịghị mma. Asambodo ikpeazụ enweghị ike iwugharị ntụnyere etiti na-efu efu.
Dekọọ ọgwụgwọ ugboro ugboro, arụ ọrụ na-egbu oge yana ndị etiti emegharịrị dịka akụkụ nke akụkọ ihe mere eme kemịkalụ. Ọ bụrụ na otu ogbe chọrọ mgbakwunye mgbakwunye-mwepu nhọrọ, tulee ụdị dị mkpa echedoro na ekpughere tupu ị kpebie na ihe akaebe ndakọrịta mbụ ka na-emetụta. Chekwaa ma ọrụ etiti na-aga nke ọma na nke enweghị ngwụcha.
Nyochaa ndakọrịta tupu ị kwado usoro ọrụ. Nyochaa crude na etiti data tupu ịhọrọ ịdị ọcha. Nyochaa njirimara saịtị ikpeazụ, nchebe fọdụrụnụ, ego ọrụ, na ọrụ dị mkpa tupu ịnakwere ngwaahịa maka nnwale e bu n'obi. Ndị a bụ mkpebi dị iche iche ma nwee ike ịchọ ụzọ nyocha dị iche iche.
Ọ bụrụ na akaebe akọwapụtara saịtị adịghị, nkwubi okwu a na-agbachitere nwere ike ịbụ "ụdị nwere ihe mejupụtara a na-atụ anya ya,"Ọ bụghị" conjugate Lys8 a rịọrọ. Ọ bụrụ na ndekọ etiti adịghị, ụlọ nyocha na-esote nwere ike imepụtaghachi usoro nhazi aha n'enweghị ike ịkọwa nsonaazụ dị iche. Mechie oghere ndị ahụ tupu ị na-emeso ụzọ dị ka nke a na-ebufe.
Mgbe atụnyere ụzọ abụọ, gụọ karịa usoro njikọ njikọ ọnụ. Atụmatụ dị mkpụmkpụ nwere ike ịchọ ikewapụ oge nke isomers ọnọdụ, ebe atụmatụ dị ogologo nwere ike inye ohere saịtị dị ọcha mana webata ajụjụ mkpado ọzọ. Ntụnyere bara uru bụ ihe akaebe na ihe dịpụrụ adịpụ echere na a ga-enweta site na ụzọ ọ bụla zuru oke, gụnyere ihe na-anọgide na-edozighị mgbe emechara ya.
Ajụjụ a na-ajụkarị
Fmoc na Boc bụ mkpebi otu nchekwa niile? Mba. Atụmatụ alfa-amino bụ naanị otu akụkụ. Nhọrọ nke agbụ akụkụ, ihe ize ndụ azụ, omume njikọ, mkpado kwụsie ike, na usoro nke mgbanwe ndị ọzọ na-ekpebikwa ndakọrịta.
Nchedo orthogonal ọ na-ekwe nkwa ịde aha nhọrọ? Ọ na-enye ntọala nhazi maka ịnweta nhọrọ, mana n'ezie etiti na nzaghachi mmeghachi omume chọrọ nkwenye. Mwepụ ezughị ezu, ikpughe na-atụghị anya ya, ma ọ bụ mmeghachi omume asọmpi ka nwere ike imebi nhọrọ nhọrọ.
Kwesịrị ka peptide ọ bụla nwere Asp na-eji nchebe azụ? Enweghị iwu zuru ụwa ọnụ na-esote site na ọmụmụ ndị a kpọtụrụ aha. Usoro usoro, mkpokọta mkpughe, hụrụ omume adịghị ọcha, na ọnụ ahịa nke usoro ụzọ ụzọ ọzọ kwesịrị iduzi mkpebi a kapịrị ọnụ.
Kedu ihe m ga-ajụ tupu ebufee ụzọ multistep? Rịọ maapụ nchedo saịtị site na saịtị, ihe akaebe maka mgbanwe nhọrọ ọ bụla, raw intermediate na ikpeazụ data, na ndepụta nke echiche ndakọrịta na-anwaleghị. Ihe ndekọ ndị ahụ na-eme ka a hụ oke nke ụzọ ahụ.
