Azịza ngwa ngwa
Nza peptide abụọ nwere ike ịkọ otu ịdị ọcha mpaghara HPLC ma wepụta ọnụọgụ dị iche iche nke ebumnuche akọwapụtara mgbe ejiri nha ntụ ntụ.. Ogo peptide…
Ogo peptide - Jikọọ ịdị ọcha, Ọdịnaya na ntinye nnwale
Nza peptide abụọ nwere ike ịkọ otu ịdị ọcha mpaghara HPLC ma wepụta ọnụọgụ dị iche iche nke ebumnuche akọwapụtara mgbe ejiri nha ntụ ntụ.. Ya mere enweghị ike ibelata ogo peptide ka ọ bụrụ otu pasent. Nlebanya nnabata ga-ejikọrịrị njirimara molekul, ozi chromatographic, ebumnuche-ọdịnaya ọrụ, na ndekọ nkwado maka ntinye nnwale ahụ.
Okwu nnabata echiche: ụlọ nyocha na-enweta nza abụọ nke otu peptide akọwapụtara. Onye ọ bụla na-akọ akụkọ 98% HPLC ebe ịdị ọcha. Akwụkwọ nza ahụ na-ekenye akụkụ dị iche iche nke ebumnuche ebumnuche 60% na 80% na ihe enyere. Ụlọ nyocha ahụ na-ezube ibido iji kwadebe ha abụọ site na iji otu nnukwu ọnụ ọgụgụ.
Ụkpụrụ ndị a bụ echiche nkuzi, ọ bụghị ezigbo data batch ma ọ bụ nkọwa akwadoro. Ha na-egosi ajụjụ nnabata: ka akwụkwọ ndị ahụ na-enye ihe ndabere maka ntụnyere echere ha nhata, na ihe àmà ọzọ dị mkpa tupu e nwee ike iji ihe ahụ mee ihe otú ahụ?
Chọpụta njirimara, ịdị ọcha chromatographic, na iche ọdịnaya
Kọwaa ebumnuche anụ ahụ tupu ịkọwa ọdịnaya ya. Nke ọkọlọtọ ProForma na-akwado ụdị peptide doro anya, gụnyere njedebe na mgbanwe. Ebumnuche e dere ede bụ nkọwapụta; ihe ewepụtara ka chọrọ ihe akaebe dabara na nzọrọ njirimara.
Ịdị ọcha mpaghara HPLC na-akọwa akụkụ dị nta nke nzaghachi ihe nchọpụta agbakwunyere ekenye na ebumnuche n'okpuru otu usoro. Nkewa, nchọpụta, mwekota, na nkọwa nke ihe mpaghara ebumnuche. Nsonaazụ abụghị na-akpaghị aka bụ akụkụ nke ebumnuche nke oke ntụ ntụ niile.
Uru ọdịnaya chọrọ nkọwa nke ya. Ọ nwere ike ịkọwa mkpokọta peptide metụtara ma ọ bụ ebumnuche akọwapụtara, ma ọ nwere ike iji ihe enyere ya, akọrọ, ma ọ bụ ntọala ndị ọzọ kwuru. "Ọdịnaya peptide net" adabaghị nke ọma ọ gwụla ma onye na-ebubata ya akọwara usoro nha yana usoro ọrụ..
Melanson na ndị ọrụ ibe akwụkwọ ntụaka-ihe ọmụmụ na-egosipụta ihe akaebe mgbakwunye maka ọrụ ọdịnaya akọwapụtara. Jiri ihe nzacha n'ezie na ihe ndabere ihe. Ma ọmụmụ ihe ahụ ma ọ bụ akara ọdịnaya amaara nke ọma na-enye ihe mejupụtara ntụ ntụ zuru ụwa ọnụ.
Vip N'okwu echiche, Ngụkọta n'okpuru chọrọ ndị 60% na 80% ụkpụrụ nke a ga-ekenye oke nhata nke ebumnuche akọwapụtara n'otu usoro ewepụtara. Ọ bụrụ na akwadoghị nkọwa ahụ, ntụnyere ọnụọgụ ga-echere maka nkọwa.
Jiri nkọwa doro anya gbakọọ ntinye, ndabere dakọtara
N'okpuru echiche nkuzi, 5 mg nke otutu A nwere 3 mg nke ebumnuche e kenyere, mgbe 5 mg nke otutu B nwere 4 mg. Ya mere ntinye oke nhata anaghị enye ntinye ebumnuche nha anya. The dakọtara 98% ụkpụrụ ịdị ọcha mpaghara anaghị ewepụ ọdịiche a.
| Ntụnyere nkuzi | Lot A | Lot B | Nkọwa |
|---|---|---|---|
| HPLC ebe ịdị ọcha | 98% | 98% | Pasent ndị a kọrọ n'otu n'otu adịghị ewepụta ngwakọta ntụ ntụ nha nhata |
| Iberibe oke ebumnuche ekenyere | 60% | 80% | Ọnụ ọgụgụ dị iche iche nke ebumnuche n'otu nkeji mkpokọta mkpokọta ihe n'okpuru nkọwa ndị ekwuru |
| Buru ụzọ banye 5 mg ntinye zuru oke | 3 mg | 4 mg | Atụmatụ oke nhata nke mbụ na-ewebata ọnụọgụ ebumnuche na-ahaghị nhata |
| Mkpokọta ihe maka 6 mg kenyere ebumnuche | 10 mg | 7.5 mg | Ntinye ebumnuche nha anya chọrọ oke oke dị iche iche na ihe atụ a |
Mgbakọ bụ ihe atụ nke ọnụ ọgụgụ mmadụ, abụghị usoro nkwado ma ọ bụ ọnụọgụ nnwale akwadoro. Ntụnyere molar ga-achọkwa ntọala molecular-oke kwesịrị ekwesị yana ọgwụgwọ na-agbanwe agbanwe nke ụdị akọwapụtara.
Transpeptidation Ejila ịdị ọcha mpaghara HPLC mụba nke e kenyere ebumnobi eburula ụzọ belụsọ ma usoro ọrụ ahụ chọrọ kpọmkwem ọrụ ahụ.. Ma ọ bụghị ya, Enwere ike ịgụta otu onyinye adịghị ọcha ugboro abụọ ma ọ bụ nwee ike jikọta nha na-ekwekọghị.
Ntinye ebumnuche e kenyere nhata abụghịkwa ntụnyere nnwale niile. Ọnụ ego dị iche iche nwere ike iwebata akụkụ dị iche iche nke ihe na-eso ya. Ọ bụrụ na ihe ndị ahụ nwere ike imetụta nyocha ahụ, njirimara ha na ntinye aka ha chọrọ nleba anya karịa ka a chụpụrụ ha mgbe emezichara ya.
Sochie ihe nhazi nha nha na-eme na ntinye ndị ọzọ
Gaa n'ihu n'echiche nkuzi ndị ekwuru na-agbakwunyeghị nkwuputa kemịkal ọhụrụ. Ịnye 6 mg nke lekwasịrị anya, otutu A na-enye aka 10 mg nnukwu ihe na otutu B na-enye aka 7.5 mg. Ya mere, ndị fọdụrụ na-abụghị ebumnuche ha 4 mg na 1.5 mg, n'otu n'otu. Nha nhata oke uka doo a 2.5 mg iche na nke fọdụrụ.
N'ihe metụtara oke ebumnuche, ndị fọdụrụ bụ banyere 0.667 mg kwa mg maka A na 0.250 mg kwa mg maka B. Oke ha bụ ihe 2.67. Nke a apụtaghị na A nwere 2.67 ugboro nke otu adịghị ọcha na-emerụ ahụ. Otu mwepu a na-atụnye ụtụ ọ bụla na-abụghị ebumnuche e kenyere n'ime nke fọdụrụ; ọ dịghị ama mmiri, counterion ma ọ bụ akụkụ ọzọ n'otu n'otu.
Ọdịiche dị mkpa maka nkọwa. Ọ bụrụ na otu akụkụ na-eso ya nwere ike imetụta nyocha ahụ, jụọ ma ọ bụla n'ezie na e kọwala ya na ihe ndabere. Ekenyela ihe niile Peptidepartners fọdụrụ n'ime ihe ahụ naanị n'ihi na nkọwa ya dabara adaba. Ntụle n'ọtụtụ buru ibu bụ ihe mgbochi na nhazi, ọ bụghị ihe ngbanwe maka ihe akaebe akọwapụtara nke ọma.
Debe normalization na ndakọrịta dị ka usoro nyocha dị iche iche. Ụlọ nyocha ahụ nwere ike ịha nha ntinye ebumnuche ka ọ ka na-achọ ịlele ntinye aka dị iche iche na-eso ya. Nhọrọ, ndị dị iche iche nwere ike ghara ịdị mkpa na njedebe ahọpụtara n'okpuru ọnọdụ akwadoro. Ọ nweghị nsonaazụ na-esote 98% ụkpụrụ chromatographic naanị.
N'ikpeazụ, ntinye ekenyeghị ekwe nkwa iweghachite na nha ọrụ. Hoofnagle na ndị ọrụ ibe jikọtara peptide quantification na njikwa na nkwadebe na nyocha dabere na mass-spectrometry.. Detuo ahịrị nkwadebe dị mkpa ka mfu ma ọ bụ gbanwee ka agbakọchara mbụ adịghị mgbagwoju anya na ọrụ ọdịnaya mbụ.
Nyochaa mpaghara COA na ebe kpuru ìsì nke usoro ahụ
| Ubi ma ọ bụ ihe akaebe | Ihe ị ga-enyocha | Ajuju edozighi ma ọ bụrụ na anọghị ya |
|---|---|---|
| Ebumnuche na njirimara otutu | Ụdị molekụla zuru ezu na njikọ na vial ewepụtara | Ma akụkọ ahụ na-akọwa ihe a chọrọ |
| Usoro HPLC na nsonaazụ | Nkewa, ihe nchọpụta, mwekota, ọnụ ọgụgụ dị mkpa, na ndabere kọrọ | Ihe pasenti mpaghara gụnyere ma kpebie |
| LC-MS ma ọ bụ ihe akaebe njirimara ndị ọzọ | Ngwakọta echere, ihe omume, ike usoro, na ndị ọzọ tụlere | Kedu njirimara nwere nkwado data |
| Ọrụ ọdịnaya | Atụ, ndabere ihe onwunwe, usoro, mmezi, na ejighị n'aka dị mkpa | Otu esi agbakọ ntinye ebumnuche akọwapụtara |
| Mmiri, counterions, na ihe ndị fọdụrụnụ | Ntụnye na njikọ na ụdị ọdịnaya | Ma ndịiche metụtara mejupụtara ọ dị mkpa iji |
| Akụkọ na njikwa | Enyere steeti, mkpa ikpughe, nkwadebe, na ozi nchekwa | Ma steeti a nwalere na ejikọtara nke ọma |
Otu ọnụ ọgụgụ kacha elu chromatographic enweghị ike igosi na akụrụngwa ọ bụla adịghị ma ọ bụ na edoziziri ihe niile dị n'usoro.. N'otu aka ahụ, oke a na-atụ anya ya bụ ihe akaebe bara uru mana ọ naghị ewepụta onwe ya n'ụdị ọnọdụ ọ bụla ma ọ bụ stereochemical.. Peptides Otc
Nleba anya nkwekọ bara uru bụ ma ụkpụrụ akụrụngwa akọpụtara na-ekekọrịta ọnụ ahịa dakọtara. Pasent na ndabere dị ka ewepụtara enweghị ike ịgbakwunye naanị na uru ndabere akọrọ. N'otu aka ahụ, Uru emezigoro ka emechara ka ọ wepụrụ mmiri nwere ike mechie mwepu ọzọ a tụrụ aro. Mee ka ihe nlereanya dị n'otu tupu ịchọpụta ọdịda ọdịda ọnụọgụ ọnụọgụgụ.
Ọ bụrụ na ihe nlereanya anaghị emechi, ndepụta tụrụ atụ, ntughari na ekenyeghi ihe fọduru iche. Na-agbakọta, ejighị n'aka na nkọwa na-ekwekọghị ekwekọ nwere ike Mmadụ dị iche na akụrụngwa na-enweghị atụ. Nyochaa emezighị emezi na-amanyeghị mkpokọta 100% site na ọrụ “adịghị ọcha ọzọ” echepụtara.
Ekwesịrị ịhọrọ ụzọ nkwado iji zaa ihe ejighị n'aka n'ezie. Ọmụmaatụ, ajụjụ-ekenye ọdịnaya dị iche na ajụjụ nkewa adịghị ọcha. Ibe nyocha ndị ọzọ agaghị enyerịrị ihe akaebe dị mkpa ma ọ bụrụ na ha na-ekwughachi otu mmachi edozibeghị.
Nabata, dokwuo anya, ma ọ bụ megharịa site na iji ndepụta ndenye nwere oke
Maka ntụnyere nha nha anya, ihe akaebe dị mkpa gụnyere nkọwapụta nke molikula zuru oke, traceability na nza n'ezie, njirimara kwesịrị ekwesị na ozi chromatographic, ndabere ọdịnaya dakọtara, na ngụkọ nkwadebe nke na-eji ya eme ihe nke ọma. Ekwesịrị ịgbakwunye ihe mejupụtara na njikwa dị mkpa dịka ihe nyocha chọrọ. Nke Selank Amidate
Ozi nkwado gụnyere nkọwa katalọgụ, ihe atụ COAs, arụmọrụ gara aga-nza, aha ndị na-eweta ngwaahịa, na ibe njikwa izugbe. Ndị a nwere ike iduzi ajụjụ, ma ha enweghị ike iguzobe ego e lekwasịrị anya n'ezie ma ọ bụ ọnọdụ dị ugbu a.
Nsogbu mbụ bụ ntinye ebumnobi na-ahaghị nhata site na oke nha nhata. Nyochaa nke 60% na 80% nkọwa, wee degharịa ngụkọ ebumnuche wee nyochaa ibu na-abụghị ebumnuche ma ọ bụrụ na ọ dị mkpa. Iberibe ebumnuche dị ala bụ akụrụngwa ịtụgharị uche, Ọ bụghị ihe nrịbama jụrụ akpaghị aka ma ọ bụ ihe akaebe nke otu mmetọ akọwapụtara.
Ọdịnaya ekenyela ala nwere ike dakọtara na ebumnuche ebumnuche ya mgbe ndabere ya nwere ntụkwasị obi yana njirimara ndị ọzọ dị mkpa na-emezu ihe achọrọ. N'aka nke ọzọ, nnukwu ọdịnaya dị elu nwere ike ghara ịdị mma ma ọ bụrụ na njirimara, adịghị ọcha, ma ọ bụ njikwa na-edozibeghị. Nnabata na-agbaso nkọwapụta zuru oke karịa ị nweta ọkwa site na otu nọmba.
Nlebagharị ọzọ ma ọ bụ nyocha ọzọ dabara adaba mgbe ejighị n'aka nke metụtara mkpebi na-adịgide: nkọwa ọnụọgụgụ na-emegiderịta onwe ya, ihe nchọpụta nza na-enweghị atụ, njirimara nyocha ọhụụ na-akọwaghị, a mara mkpughe deviation, ma ọ bụ omume nkwadebe ekwekọghị n'ụdị akwadoro. Họrọ nha na-esote iji mata nkọwa ndị na-eduga.
Ajụjụ lekwasịrị anya bụ: “Biko gosi ma uru ọdịnaya ọ bụla na-anọchite anya ebumnuche akọwapụtara na usoro ewepụtara ya, chọpụta usoro ọrụ wee tinye mmezi, ma kọwaa otu njirimara na data chromatographic si kwado nkọwa ahụ. Anyị na-enyocha ntinye ebumnuche nha anya, ntụ ntụ adịghị nhata nhata.”
Gbanyụọ ngụkọ ntinye ebumnuche yana oke ihe mejupụtara ya. Chekwaa nkọwapụta, akụkọ mbụ na nkọwapụta ọ bụla nke ụkpụrụ ekpokọtara ọnụ. Ntụle ikpeazụ kwesịrị ikwupụta ma ihe emezigharịrị yana nke ọdịiche ihe onwunwe na-adịgide na mpụga nke ahụ.
Ajụjụ a na-ajụkarị
Mee ụkpụrụ ịdị ọcha HPLC dakọtara pụtara nha nha anya nha? Mba. Ngwakọta ntụ ntụ na ọrụ ọdịnaya nwere ike ịdị iche. Kpebie ndenye ebumnuche site na ntọala ego dabara adaba karịa pasenti mpaghara naanị.
Bụ peptide dị ala na-adịchaghị mma? Mba. Nyochaa ebumnuche akọwapụtara, mkpa adịghị ọcha na components, ego ọrụ, na ezubere iji. A ka nwere ike ịnakwere ụmụ irighiri ihe dị ala ma ọ bụrụ na aghọtara ya ma dozie ya nke ọma.
Enwere ike ilekwasị anya normalization wepụ ihe ọ bụla dị iche iche? Mba. Ọ na-eleba anya ntinye ekenyere n'okpuru ngụkọ akọwapụtara. Ngwa ndị na-eso ya, mgbake nkwadebe, ihe owuwu iche, na àgwà ndị ọzọ ka nwere ike ịchọ nyocha.
Kedu ihe ezughi oke maka mkpebi nnabata ọnụọgụgụ? COA enweghị njikọ, akọwapụtaghị “ụgbụ a,” pasent ịdị ọcha dịpụrụ adịpụ, ma ọ bụ akwụkwọ katalọgụ enweghị ike iguzobe ndabere ego zuru ezu. Rịọ nkọwapụta na ihe akaebe ndị na-efu efu.
