Azịza ngwa ngwa
Atụmatụ mgbanwe peptide bụ orthogonal naanị n'ihe gbasara kemistri na ọnọdụ a na-eji. Otu dị iche iche na-emeghachi omume nwere ike inye aka duzie modi dị iche iche…
Multisite Peptide Mgbanwe - Orthogonality, Ọrụ saịtị na nkwenye ikpeazụ
Atụmatụ mgbanwe peptide bụ orthogonal naanị n'ihe gbasara kemistri na ọnọdụ a na-eji. Otu dị iche iche na-emeghachi omume nwere ike inye aka duzie mgbanwe dị iche iche, mana ọnụnọ ha anaghị egosi na nzọụkwụ ọ bụla na-ahapụ otu ndị ọzọ na akara na-agbanweghị agbanwe. Ngwaahịa ikpeazụ ka chọrọ ihe akaebe maka ọnụọgụ mgbanwe, ebe, na mkpa fọdụrụ ụdị.
Nhazi echiche: ụlọ nyocha chọrọ nkuzi peptide ASGTVQC nwere N-terminal biotinylation site na njikọ amide akọwapụtara yana fluorophore akọwapụtara nke etinyere site na agbụ akụkụ Cys7.. The C terminus bụ free acid, na chiral amino acid nwere nhazi L. Usoro enweghị lysine; amine n'efu e bu n'obi tupu mgbanwe bụ N terminus.
Ihe e bu n'obi mee bụ ntụnyere nyocha nke gụnyere njide na fluorescence, nwere ọgụgụ ọrụ nwere onwe ya. Enweghị njikọ na-aga nke ọma, jide kpọmkwem, ọrụ njikọ, ma ọ bụ nnọpụiche ndu nke mkpado ọ bụla echere. Atụnyere ụzọ abụọ megide otu usoro ikpeazụ, steeti enyere, na ajụjụ nnabata nke nyocha.
Tụlee nrụnye a na-achịkwa n'oge njikọ na mkpado ngwọta usoro
Ụzọ A: wụnye mgbanwe N-terminal akọwapụtara n'ime atụmatụ njikọ echekwabara, wee mechaa ọkwa nrịbama na-eduzi cysteine. Uru nwere ike ime bụ ịchịkwa otu nke dị n'oge mgbanwe nke mbụ. Atụmatụ ahụ ka ga-edozi ndakọrịta nke otu arụnyere na nhazi ya na njirimara nke njikọ ikpeazụ na fluorophore conjugate..
Nchedo anaghị ewepụ nkwenye. Onye na-eweta ngwaahịa ga-akọwarịrị ka a ga-esi dị iche ngwaahịa a chọrọ na ngbanwe ezughị ezu, foduru precursor, ma ọ bụ ngwaahịa na-ebili n'oge nhazi na-esote. Atụmatụ otu nchekwa bụ ebumnuche ụzọ, ọbụghị nsonaazụ nhazi ikpeazụ.
Ụzọ B: Kwadebe peptide akọwapụtaghị ma tinye mkpado usoro usoro n'usoro site na iji aka amine na thiol dị.. Usoro nkuzi a dị mfe na-eme ka ihe dị iche iche nke otu arụrụ arụ ọrụ dokwuo anya karịa peptide nwere ọtụtụ lysines na cysteine.. Bụlagodi, nhọrọ mmeghachi omume bụ keonodu na n'ezie reagents, mkpụrụ, na ọnọdụ.
Ụlọ ọrụ Thermo Fisher amine-reactive chemistry ndu na-achọpụta N-terminal na lysine primary amines dị ka aka dị mkpa. ASGTVQC enweghị lysine, na-eme ka ajụjụ saịtị amine dị mfe. Nzọụkwụ cysteine na-esote ka chọrọ ndakọrịta reagent kpọmkwem yana akaebe ngwaahịa ikpeazụ..
Maka usoro nke cysteine na-eduzi, ezipụta ezigbo fluorophore reagent na njikọ ikpeazụ kama iji “thiol dye” dị ka nkọwa nhazi zuru oke.. Echela na kemịkalụ thiol-reactive ma ọ bụ ngwaahịa ha nwere otu omume.
| Uru | Mmachi | Ọnọdụ ọdabara | Nyocha |
|---|---|---|---|
| Ụzọ A nwere ike ijikwa ọnụnọ otu n'oge echichi akwadoro | Nhazi emechaa nwere ike imetụta otu arụnyere ma ọ bụ mepụta ngwaahịa agbakwunyere | Usoro nchekwa na nhazi ziri ezi dabara na mkpado ziri ezi | Ogbo na ihe akaebe ikpeazụ maka ihe mejupụtara, saịtị, na mkpa byproducts |
| Ụzọ B nwere ike iji ihe nrịbama dịpụrụ adịpụ na mkpado ahaziri ahazi | Nhọrọ mmeghachi omume na ntule ngbanwe ezughị ezu na nyocha | Aka nwere ike ịnweta kwesịrị ekwesị yana nhọrọ reagent/ọkara dakọtara | Maapụ mbụ, stoichiometry mgbanwe, ihe akaebe ọnọdụ, na ihe fọdụrụ-ụdị nyocha |
Peptides dị ọnụ ala Tulee ụzọ site n'iji ụdị agbaziri agbaziri agbadoro anya n'otu n'otu na nha nha. Ogologo fluorescence dị elu ma ọ bụ mkpokọta biotin nwere ike igosipụta ngwakọta dị iche karịa ebumnuche ọzọ. Nhọrọ ụzọ kwesịrị idobe otu mkpado ikpeazụ, njikọ na saịtị mgbakwunye tupu atụnyere mgbake ma ọ bụ uru bara uru.
Chọpụta nhọrọ kemịkalụ na nkwenye nyocha
Larazotide Nhọrọ otu ọrụ na-ajụ ndị otu kemịkalụ na-eme n'okpuru ọnọdụ ahọpụtara. Nkọwapụta saịtị na-ajụ ma ihe fọdụrụ ma ọ bụ njedebe achọrọ emezigharịrị. Ndị a nwere ike dakọtara na ebumnuche dị mfe, ma ha abụghị echiche mgbanwe.
Ịtinye lysine ma ọ bụ cysteine nke abụọ na usoro nkuzi a ga-agbanwe nyocha ahụ. Onye na-ahọpụta reagents maka amines nke mbụ agaghị amata njedebe N ozugbo na yinye akụkụ lysine. Ihe reagent thiol-reactive agaghị achọpụta otu cysteine ozugbo n'etiti ọtụtụ thiol dịnụ.
Ngosipụta saịtị a na-achịkwa kwesịrị iji mkpado zuru ezu na nkọwa njikọ gaa njem. Dekọọ biotin N-terminal e bu n'obi na nke Cys7 fluorophore ezubere, ya na free C terminus. Nkezi ego mkpado ọ bụla bụ nchịkọta ndị mmadụ, ọbụghị nkọwa zuru oke nke ụdị agbaziri agbaziri agbadoro.
Otu uka emebibeghị nke nwere mkpado abụọ nwere ike ịkwado ngwakọta ha jikọtara ọnụ, ma ọ nwere ike hapụ ọnọdụ ndị ọzọ edozighị ya. Atụmatụ nyocha kwesịrị ịkọwa nke nleba anya na-egosi ebe achọrọ na ihe na-ejighị n'aka. Aha usoro ma ọ bụ oke a na-atụ anya abụghị nkọwa zuru oke.
Na-amata ọdịiche dị n'ụdị abụọ emezigharịrị dị ọcha site na ngwakọta nke agbanwebeghị, gbanwetụrụ otu, ma mụbaa ngwaahịa ndị emezigharịrị nke nkezi ha na-abịaru nso akara abụọ n'otu molekul. Nkwadebe ndị ahụ nwere ike ịkpa àgwà dị iche iche na nyocha njide na fluorescence.
Mmega ahụ n'ime ọnụ. Were otu saịtị biotin na otu saịtị fluorophore nwere ike ime n'otu yinye, nwere ọnụ ọgụgụ mkpado tụgharịrị n'ụkpụrụ molar ziri ezi. Na a hypothetical 100-agbụ Nke Mazduts nkwadebe, onu ogugu A nwere 50 yinye nwere mkpado abụọ, 30 naanị agbụ biotin, 20 naanị agbụ fluorophore na enweghị agbụ anaghị agbanwe agbanwe. Biotin dị na ya 80 agbụ na fluorophore na 70.
Onu ogugu B nwere ya 70 akara abuo, 10 biotin-naanị, enweghị fluorophore-naanị na 20 ụdọ anaghị agbanwe agbanwe. O nwere otu mkpokọta: 80 biotin na-ebu na 70 ụdọ ndị na-ebu fluorophore. Ma Somatropin Peptide Ọnụ ego a na-atụ anya ịrụ nke nwere mkpado abụọ dị iche site na ụdọ iri abụọ. Nkezi mkpado dị iche iche enweghị ike ịmata ọnụọgụgụ ndị a na-enweghị ozi ọkwa ọkwa ụdị ọzọ.
N'okpuru echiche ọnụọgụ abụọ-saịtị ahụ, Obi abụọ nwere ike ịdị n'etiti 50% na 70%. Ịba ụba 0.8 site 0.7 ịkọ akụkọ 56% na-agbachi nkịtị na-ewere ndị nọọrọ onwe ha. Mmeghachi omume n'usoro na usoro ịdị ọcha ekwesịghị imeju echiche ahụ. Nkesa ndị echepụtara na-akọwa ọdịiche ozi ahụ; ha anaghị akọwapụta arụmọrụ nrịbama atụpụtara ma ọ bụ depụta oke nnabata.
Chepụta nchacha na njikwa gburugburu ihe ndị ọzọ enwere ike
Ụzọ abụọ a nwere ike ịmepụta usoro adịghị ọcha dị iche iche ọbụlagodi mgbe ha chọrọ n'otu nhazi ikpeazụ. Nyochaa precursor emezigharịrị, ezughị ezu ngwaahịa, mkpado efu, na ụdị ndị ọzọ dị mkpa dịka kemịkalụ n'ezie. Ụzọ nchọpụta nke na-anabata ike na-esiji esiji nwere ike ọ gaghị anọchi anya ihe ọ bụla metụtara peptide n'otu ụzọ ahụ.
Jụọ ihe nlele nyocha jikọtara mkpado abụọ na otu agbụ ebumnuche. Ntụle na-edozi ụdịdị nwere ike lebara ajụjụ dị iche site na nnukwu ọdịnaya biotin na nnukwu fluorescence.. Ihe nchọpụta na nzaghachi ka dị mkpa: nchọta nwere agba agba nwere ike gosipụta ihe ndị anaghị agbanwe agbanwe ma ọ bụ ndị na-abụghị fluorescent, ebe nzọụkwụ ijide nwere ike họrọ naanị akụkụ nke ndị mmadụ mbụ.
Nzọụkwụ ijide nwere ike ime ka ọdịiche dị n'etiti ọnụ ọgụgụ mmadụ abụọ a na-eche n'echiche pụta ìhè. N'okpuru nhọrọ zuru oke nke agbụ biotin niile na-enweghị mgbake ọzọ, onu ogugu A ga-etinye 50 yinye nwere akara abụọ n'etiti 80 agbụ ndị ejidere, ma ọ bụ 62.5%. Ọnụọgụ B ga-etinye 70 n'etiti 80, ma ọ bụ 87.5%. Nrụmọrụ ijide n'ezie na mgbake dabere na ụdị chọrọ ihe akaebe; mgbakọ na mwepụ na-egosi nnọọ ihe kpatara na mkpado ndenye yiri nke ahụ anaghị ekwe nkwa nkwadebe ejidere nhata.
Akuko nke fluorescence n'otu ego ewepụtara ga-achọpụtarịrị ihe nrịba ama na nhazi nke ọnụ ọgụgụ ndị enwetara.. Ọ bụrụ na otu ụzọ na-agbanwe ụmụ irighiri ihe dị iche iche nwere otu akara, ọ nwere ike ịgbanwe oke ahụ na-agbanweghị nchapụta nke molekul nwere akara abụọ. Chekwaa ụdị ahụ na ihe akaebe mgbake tupu ịkpọọ ihe dị iche na-arụ ọrụ akara aha ka mma.
Kọwaa ihe nkwupụta ego pụtara maka njikọ ikpeazụ. Nnukwu ntụ ntụ, mkpokọta peptide metụtara, na ego e kenyere ebumnobi emezigharị ugboro abụọ ekwesịghị ka ewere ya dị ka mgbanwe. Nnwale ahụ chọrọ ntọala na-agbanwe agbanwe maka atụnyere nkwadebe. Peptides dị ọnụ ala
| Ebumnuche nnwale | Nhọrọ mgbanwe | Njikwa | Oke ọgụgụ na nkọwa |
|---|---|---|---|
| Nyochaa ihe nrụpụta nwere akara abụọ | Nkọwapụta N-terminal biotin na Cys7 fluorophore | Ndị na-atụnyere otu mkpado anaghị agbanwe agbanwe yana mkpa | Ihe akaebe arụrụ arụ arụrụ arụ na arụrụ arụ; mkpado abụọ anaghị ekwe omume na-agbanweghị agbanwe |
| Tụgharịa asụsụ njide | Nkọwapụta biotin njikọ na ngosi | Ndabere ndabere na njikwa ndị na-abụghị biotin kwesịrị ekwesị | Ihe enwetara n'okpuru ọnọdụ nwalere; ọ bụghị akpaka ihe nkwekọ nke ndu |
| Tụgharịa asụsụ fluorescence | Fluorophore akọwapụtara, njikọ, na ego lekwasịrị anya | Ndabere yana njikwa mkpado efu ma ọ bụ otu mkpado dị mkpa | Ihe mgbaàmà jikọtara na nha; ọ bụghị kpọmkwem ihe akaebe nke ọrụ |
| Tụlee ụzọ abụọ sịntetịt | Otu ebumnobi emeziri ugboro abụọ ikpeazụ | Ọnụ ego dakọtara na ndabere nkwado | Nhazi ikpeazụ, ihe mejupụtara, na ntụnyere ọrụ n'ime oke enyochara |
Njikwa mkpado efu nwere ike ikpughere ụfọdụ nkwado ndabere, mana ha ejikọtaghị ọnụ na mkpado agbakwunyere. Nsonaazụ na-adịghị mma na-adịghị mma adịghị egosi na mgbama peptide conjugate na-egosipụta otu mmekọrịta.
Debe nkọwa ndu iche na ntinye aha na-aga nke ọma
Cavaco na ndị ọrụ ibe A mụrụ mmetụta fluorophore na sistemu peptide na-arụ ọrụ akpụkpọ ahụ. Ihe nchoputa ha na-akwado itule ihe eji esiji agbakwunyere dika akụkụ nke molekul ohuru, kama iche na mgbakwụnye abụọ akwadoro na-echekwa omume agbanwebeghị. Enweghị oke mmetụta ma ọ bụ ntụzịaka ebu amụma maka ASGTVQC. Retatrutide
Biotin, nke fluorophore, na njikọ ha nwere ike gbanwee nkesa ụgwọ molekul jikọtara ọnụ, solubility, mmekọrịta, ma ọ bụ mgbake. Ya mere mgbakwunye na-aga nke ọma bụ ihe nyocha, Ọ bụghị ihe akaebe na nyocha ahụ na-akpa àgwà ka peptide na-agbanweghị agbanwe.
Ọ bụrụ na ọmụmụ ihe chọrọ omume agbanweghị, tulee ya ozugbo site na iji akwụkwọ ọgụgụ nọọrọ onwe ya dabara adaba. Nkwadebe na-egbukepụ egbukepụ ma ọ bụ nke ọma ejidere nwere ike ịba uru maka otu ajụjụ nyocha ebe ọ na-ekwesịghị ekwesị dị ka onye nnọchiteanya kwesịrị ntụkwasị obi maka onye ọzọ..
Capture plus fluorescence na-enye ihe ọmụma naanị maka ajụjụ ndị a na-aza ajụjụ ndị ahụ. Enwere ike ime ka ọnụ ọgụgụ ndị na-emepụta biotin dịkwuo mma site na ijide ebe adịghị ọcha nke na-ebu fluorophore na-enye aka mgbaama n'ebe ọzọ.. Tinye ụzọ dabara adaba iji nyochaa njirimara na nhazi nke ihe enwetara n'ezie. Nnwale agụpụta abụọ anaghị enye nkwenye abụọ nwere onwe ha nke otu ụdị molekụla ozugbo.
Rịọ ntụnyere doro anya nke ndakọrịta ụzọ, etiti steeti, nkesa ụdị ikpeazụ na ihe akaebe saịtị. Debe ebe obibi ọ bụla amaghi ama ruo mgbe ntu a tụrụ anya dozie ya. Nke a na-eme ka “abụọ akara” bụrụ ebumnuche a na-enyocha karịa nkezi dị mma.
Jido nkọwapụta nhazi, ụzọ mgbanwe dabara na nkọwa, ihe akaebe nyocha nwere ọtụtụ njikọ, nkọwa nke ukwu, ndekọ nkwadebe, na njikwa. Akụkọ ikpeazụ kwesịrị ikwupụta akụkụ nke usoro na omume egosipụtara na nke fọdụrụ n'echiche.
Ajụjụ a na-ajụkarị
Na-eji mkpado amine-reactive na mkpado thiol-reactive na-ekwe nkwa orthogonality? Mba. Ngwakọta ahụ na-enye echiche maka nhọrọ nhọrọ, mana a ga-enyocharịrị ndakọrịta na nhọrọ maka mkpụrụ okwu n'ezie, reagents, na ọnọdụ.
Ọka a tụrụ anya nwere ike kwado saịtị mgbanwe abụọ ahụ? Ọ bụchaghị. Otu ihe ejikọtara ọnụ nwere ike ịhapụ ụzọ ndị ọzọ ọnọdụ enweghị edozi. Jiri ihe akaebe dabara na nzọrọ saịtị ahụ akọwapụtara.
Bụ nkezi nke akara abụọ n'otu peptide bụ ngwaahịa emeziri nke ọma? Mba. Nkezi nwere ike ịkọwa ngwakọta. Mepụta nkesa ụdị na ebe achọrọ tupu ị na-emeso ihe a dịka otu ihe arụpụtara.
Njide na-aga nke ọma yana fluorescence na-egosi ọrụ ndu? Mba. Nlebanya ndị ahụ metụtara mkpado na nhazi nha. Nkwuputa ndu chọrọ ihe akaebe na njikwa ọrụ dị mkpa.
