Peptides mmepụta & Synthesis omenala: Ọwa ka Neuro Scaffolds

Ihe mere Scaffold bụ nkọwapụta

“peptide onye nrụpụta” abụghị eriri ahịrị dị mfe. Klaasị na-arụ ọrụ na-achịkwa ọwa na akwụkwọ CNS na-achọ nhazi n'ebumnobi.

Ndị na-egbochi ion-channel sitere na okike na-abụkarị nsị nwere disulfide. Scorpion α-KTx peptides, ọmụmaatụ, jikọta mpịakọta kọmpat yana njikọ disulfide atọ ma ọ bụ anọ, na usoro cysteine ​​ahụ siri ike bụ ihe na-eme ka ha banye n'ime oghere ọwa potassium nwere ịkpa oke subtype.. Megharịa usoro ahụ n'ụzọ sịntetịtically, na cysteine ​​ọ bụla na-aghọ nsogbu regioselectivity: Sistemụ isii nwere ike ijikọ n'ụzọ doro anya n'ime ihe dị ka isomer disulfide iri na ise, na naanị otu nhazi na-eweghachite conformation na-arụ ọrụ.

Peptide Synthesis

Ndị na-akwado Neuroprotective na-anọdụ ala na nsọtụ nke ọzọ mana na-ebuli nchegbu-ihe onyonyo. Usoro ha na-arụ ọrụ na-abụkarị mkpụmkpụ na protease nwere mmetụta, yabụ ndị otu na-eru maka kemịkalụ azụ - cyclization na stapling bụ ụzọ kachasị dị irè isi kpọchie ngbanwe na-arụ ọrụ na iguzogide mmebi, dị ka ọrụ na nerinetide na CNS peptides metụtara na-egosi. Ọnụ ego sịntetik dị adị: macrocyclization ma ọ bụ hydrocarbon staple na-agbakwụnye usoro mmeghachi omume, na-emepụta ọnụọgụgụ ọhụrụ adịghị ọcha, ma rịọ ka ị kwado ụdị emechiri emechi, ọ bụghị naanị akara nrịgo.

Ihe nke a pụtara maka nhazi omenala kwụ ọtọ. Akọwapụtaghị peptide site na usoro izizi ya naanị kama ọ bụ n'ogige atụrụ e bu n'obi kọwaa ya, cysteine ​​topology ya, Peptides sịntetik ebe ịgba ígwè ya, na mkpado ndị ọ na-ebu. Nke ọ bụla n'ime ihe ndị ahụ bụ mkpebi ị kwesịrị itinye na nkenke njikọ tupu otu njikọ.

Mkpokọta bụ Ụdị ọdịda mbụ

Ọ dịghị ihe peptide na-agbaji ọtụtụ ọrụ tupu nchịkọta. N'oge mgbakọ Fmoc siri ike, agbụ na-eto eto bụ nke hydrophobic ma ọ bụ β-ibé akwụkwọ nwere ike imekọ onwe ya site na njikọta hydrogen intermolecular ozugbo na resin.. Ọdịda ahụ n'elu bead na-egbochi ohere nke amino acid arụ ọrụ na-abata, na-emepụta njikọ na-ezughị ezu, wee dee mkpọpu na mkpochapụ adịghị ọcha n'usoro tupu ịdị ọcha amalite.

A mara usoro a nke ọma ugbu a. Ọrụ na nso nso a na Nature Chemistry na-akwado na amino acid mejupụtara na-akpali mkpokọta n'oge njikọ peptide., na-egosi na usoro n'onwe ya - ọ bụghị naanị ogologo ya - na-achịkwa ma yinye echedoro na-atụgharị n'ime usoro ihe mgbochi nke abụọ na nkwado ahụ.. Nke a kwekọrọ na ogologo akụkọ ihe mere eme nke nyocha n'ime ihe a na-akpọ "usoro siri ike,” nke ubi ahụ abanyela na nhazi β-akwụkwọ resin nke na-egbochi ma njikọ na nchekwa.

Ihe mgbaàmà abụọ bara uru na-ebu amụma maka nsogbu tupu ụgbọ mmiri usoro:

• Hydrophobic na-aga n'ihu na-agba ọsọ ọgaranya Val, Ya na, Leu, na Phe. Ndị a bụ ndị ọkwọ ụgbọ ala kpochapụrụ nke resin ọdịda.

• Ụgwọ net na-anọpụ iche. Na-enweghị mkparị Coulombic iji jide agbụ dị iche iche na ngwọta, kọntaktị hydrophobic na-achịkwa ma peptide na-ebuli ma ọ bụ gels n'oge nkwụsịtụ yana na nchekwa nyocha..

N'ihi na ọwa-blocker na neuroprotective scaffolds dabere hydrophobic ma na-arụkarị ọrụ n'akụkụ ebe isoelectric ha., ihe ize ndụ nchịkọta ha bụ nhazi, ọ bụghị na mberede. Ijikwa ya - site na ntinye pseudoproline, mkpado solubilizing, nchebe ọkpụkpụ azụ, obere resin loading, ma ọ bụ ngwa ndakwa nri na-enyere aka - bụ akụkụ nke nkà setịpụrụ onye mmekọ ga-eweta n'ezie, ọ bụghị ahịrị ọrụ izugbe. Isi ihe maka onye zụrụ ahịa bụ ịkọwapụta ihe ize ndụ ahụ n'oge ma manye onye na-ebubata ya ka ọ kwuo ka a ga-esi chịkwaa ya.

Ịkpọ aha na mgbanwe: Mkpado ọ bụla bụ mkpebi imewe

Ihe fọrọ nke nta ka ọ bụrụ peptide nyocha ọ bụla dị njikere na-ebuli ihe: aka biotin maka ijide, fluorophore maka imaging ma ọ bụ njikọ, CPP maka nbudata, a PEG ma ọ bụ lipid maka nkwụsi ike. Ọtụtụ mgbe, a na-ewere akara ahụ dị ka echiche emechaa. Ọ bụghị - ọ bụ molekul nke abụọ anyadokwa na nke mbụ.

Akara akara na-agbanwe omume. A 2024 Nnyocha e mere chọpụtara na akara fluorescent gbanwere peptide-protein na-ekesa n'otu oge site n'usoro dị ukwuu., na mmetụta dabere ma fluorophore na onye na-ejikọta ya. Hydrophobic na agba agba agba bụ ndị kacha njọ n'ihi na ha na-agbanwe mkpokọta na mgbasa ozi elu na-abụghị nke akọwapụtara.. Biotinylation dị ntakịrị mana ọ ka na-akpaghasị molekul ahụ, ịba ụba hydrophobicity na ibelata ụgwọ n'ụzọ ndị na-agbanwe ka peptide si akpa àgwà na kọlụm LC-MS na n'ime nyocha njide..

Enwere ike ịnyefe iwu ndị a na-esote na ihe ọ bụla n'ụdị ọwa-na-CNS:

• Debe ụlọ ọgwụ ahụ ọcha. Debe mkpado ahụ n'ọnụ ọnụ ihe mgbaze ekpughere ma ọ bụ na ihe fọdụrụ amaara na ọ gaghị emetụ ihe mgbaru ọsọ aka.

• Kewapụ akara ahụ na isi bioactive na spacer dị ka aminocaproic acid (Ahx) ma ọ bụ obere njikọ PEG mgbe sterics dị mkpa.

• Nwalee ihe karịrị otu saịtị Mgbe epitope nke na-ejikọta ya bụ ihe a na-ejighị n'aka - peptide na-agbanwe ma ọ bụ nke na-adịghị mma nwere ike ịnagide agba n'otu njedebe ma ọ bụghị nke ọzọ..

• Kọwapụta ihe arụrụ arụ nke akpọnyere aha dị ka molekul nke ya, Ọ dịghị mgbe dị ka onye nnọchi anya nkịtị maka peptide na-enweghị akara. Kwenye mmekọ na mmemme maka ụdị abụọ a.

Maka scamfolds bara ụba nke disulfide ma ọ bụ cyclized enwere mmachi ọzọ: ntinye akara agaghị akpaghasị kemịkalụ mpịachi ma ọ bụ cyclization, ya mere aka kpọmkwem saịtị (dịka ọmụmaatụ lysine echekwara ma ọ bụ cysteine) a na-etinyekarị na resin tupu nchebe ikpeazụ.

Ịdị ọcha bụ mkpebi ngwa, Ọ bụghị nọmba

Ịdị ọcha ị rịọrọ kwesịrị soro ihe nyocha ahụ chọrọ n'ezie, na "elu" abụghị nkọwapụta. A na-edozi ọnụ ụzọ ndị bara uru nke ọma n'ofe ndị na-ebubata ya na akwụkwọ nkà na ụzụ:

• ≥95% HPLC ịdị ọcha na-akwado ọtụtụ in vitro bioassays, antibody arụ ọrụ, na ọkara-quantitative ọmụmụ.

• ≥98% bụ ala bara uru maka quantitative, dabere cell, na dose-aza nnwale ebe a 2% ngwakọta adịghị ọcha nwere ike gbanwee ịgụpụta ihe.

• >98-99% Edobere ya maka ọrụ nrụzi nke nwere mmetụta yana maka ọmụmụ ihe na-aga n'ihu na nkwupụta nhazi ọkwa akwụkwọ.

Ebe ọwa na neuro scaffolds na-agbagha nke a dị mfe: peptide cyclized ma ọ bụ stapled emechara ka ọ dị ọcha 98% Akwụsịghị ịdị ọcha nke ahịrị ma ọ bụrụ na emechibeghị akụkụ nke bara uru n'ụdị okirikiri ziri ezi. Ụdị ịdị ọcha dị mkpa ga-agụnye nke apịaji nke ọma, ụdị cycized n'ụzọ ziri ezi, ọ bụghị ọnụ ọgụgụ mejupụtara nke na-agbakọta ha ọnụ. Ya mere ndị na-azụ ahịa nwere ahụmahụ na-ajụ ndị na-ebubata otú e si akọwa ịdị ọcha n'ụdị dị iche iche ma na-ekwusi ike na Asambodo Analysis na-akọpụta usoro a chọrọ..

Ihe achọrọ n'okpuru ala na-emetụta otu. Maka nyocha sitere na cell, ịdị ọcha naanị adịghị akọwa ịmụ nwa ma ọ bụ ibu endotoxin, nke mere usoro mma ji ekewa ịdị ọcha chromatographic site na microbial na pyrogen ọdịnaya. A peptide nwere ike ịbụ 99% dị ọcha site na HPLC ma ka na-ebu lipopolysaccharide nke na-emebi nyocha dị nro. Ezipụta n'uju njirimara njirimara ị chọrọ, ọ bụghị naanị pasentị.

Njikere Assay-Njikere akọwara ya, Ọ bụghị naanị dị ọcha

Nkebi ahịrịokwu "njikere nyocha" bụ ebe ọtụtụ mmekọrịta ndị na-eweta ngwaahịa na-ejide ma ọ bụ mebie. A peptide dị njikere naanị maka bayoloji a pụrụ ịdabere na ya ma ọ bụrụ na njirimara ya, usoro, ekwenyela na ọdịnaya, ọ bụghị naanị ma ọ bụrụ na isi HPLC kacha dị ọcha.

Ngwungwu ntụkwasị obi kacha nta maka iji arụ ọrụ gụnyere RP-HPLC nyocha maka ịdị ọcha mpaghara kacha elu., Mass spectrometry iji kwado ịdị arọ molekụla emebibeghị, na - ebe usoro ikwesị ntụkwasị obi ma ọ bụ mgbanwe ga-egosipụtarịrị - MS/MS peptide mapping. Maka ọrụ quantitative, Ekwesịrị iji nyocha amino acid dozie ọdịnaya peptide n'ezie, n'ihi na iwepu oke crude ka ọ bụghị ezi ọdịnaya peptide net bụ ebe dị jụụ nke njehie na-agbasa site na ntinye uche ọ bụla dị n'okpuru.. Ndị a bụ ihe ndị a Ntuziaka dabere na nyocha na-atụ aro itinye n'ime Asambodo nyocha.

Enwere oghere edekọtara nke ọma ubi ahụ ejirila nwayọ mechie. A 2019 Nyocha kwuru na peptides sịntetik nke ihe fọrọ nke nta ka ọ bụrụ 20-100 na-adịkarịghị ama na mpịakọta ha na nhazi akụkụ atọ., ọbụna mgbe a na-akọ ịdị ọcha na usoro. Maka onye na-egbochi ọwa disulfide bara ụba ma ọ bụ onye nyocha neuroprotective cyclized, Ikwenye n'ogige atụrụ ziri ezi na disulfide ma ọ bụ cyclization topology bụ ihe ịrụ ụka adịghị ya na ọ dị mkpa dị ka ịdị ọcha - isomer na-ezighị ezi ma ọ bụ ihe na-emechighị emechi nwere ike ịgbachi nkịtị ma ọ bụ na-eduhie eduhie.. Na-akọwa ụkpụrụ nnabata ndị a n'ihu, na-ajụ nke orthogonal ụzọ (ngalaba-elu, MS/MS maapụ, CD, ma ọ bụ conformational assays) a ga-eji gosi na steeti a chọrọ, bụ otu ajụjụ kachasị elu onye zụrụ nwere ike ịjụ.

Nrụpụta Peptide omenala maka Scaffolds siri ike

Ihe na-eme ka ihe ndị a niile dị n'otu bụ na peptide synthesis nwere ike ọ bụghị maka ịkwanye otu usoro dị mma site na ahịrị oge.. Ọ bụ maka usoro dabara adaba ka a na-agbakọ - ịchịkwa mkpokọta na usoro hydrophobic siri ike, ịwụnye akara saịtị akọwapụtara na-emebighị usoro disulfide, ịnya igwe na stapling na-ahapụghị ngwaahịa mechiri emechi, na ịkwado nkwupụta ọ bụla na HPLC kwa-batch, uka, ịmụ nwa, na data ọdịnaya. Mgbe ikike ndị ahụ dị, mgbanwe ọwa-na-neuroprotective na-aghọ nsogbu kemistri kama ịgba chaa chaa ndị na-ebubata ya. Mmepụta Peptide

Maka ndị otu na-ewu ụlọ ndị a na-achọsi ike, MOL na-agbanwe usoro nhazi peptide omenala na-akwado ngwakọta nke usoro dị otú ahụ nyocha mkpa - siri ike-phase, mmiri mmiri, na microbial gbaa ụka ụzọ, gafere 300 chemistries mgbanwe gụnyere cyclic, stapled, biotinylated, na peptides akpọrọ, ịdị ọcha ruo 99%, na Klas 100 Imepụta ihe na-adịghị mma na HPLC na akwụkwọ nkọwapụta site na milligram ruo n'oke kilogram. Na-akparịta usoro gị, n'ogige atụrụ ya ezubere, na ihe nyocha ya chọrọ n'ihu bụ ụzọ kachasị ọsọ iji tụgharịa peptide mmebe site na eserese n'ime batch ị nwere ike ịtụkwasị obi na ụlọ nyocha..