Azịza ngwa ngwa
peptides arọ nke omenala nwere ike ịkwado spectrometry quantitative mass spectrometry naanị mgbe ụlọ nyocha mara ụdị ụdị akpọpụtara., ka esi ekenye ego ya…
Peptides dị arọ omenala - Echiche ise na-ezighị ezi gbasara nkwenye Isotope
Echiche na-ezighi ezi: HPLC dị ọcha na-eguzobe ịdị ọcha nke isotope
peptides arọ nke omenala nwere ike ịkwado spectrometry quantitative mass spectrometry naanị mgbe ụlọ nyocha mara ụdị ụdị akpọpụtara., otu esi ekenye ego ya, na nke nrịgo nzọụkwụ e bu n'obi ịchịkwa. Okwu a bu "arọ" akọwapụtaghị ụkpụrụ ime zuru oke, na otu pasent dị ọcha enweghị ike ịza ajụjụ ndị ahụ niile.
Atumatu ntule: ụlọ nyocha na-enye iwu H-AGSVQTK-OH dị ka ọkọlọtọ n'ime nyocha, ya na C-terminal Lys7 nwere carbon-13 isii na atọ nitrogen-15 abụọ. Ọdụ ụgbọ elu na atụmatụ nhazi ndị ọzọ dabara n'ụdị ọkụ e bu n'obi. Enweghị arụmọrụ nyocha, itinye uche ziri ezi, ma ọ bụ enweghị mmerụ ọkụ na-eche.
Ntụle nke mbụ hiere ụzọ bụ na nsonaazụ dị elu nke mpaghara HPLC na-egosi oke dị elu nke ụdị akpọrọ isotope ezubere.. Chromatographic dị ọcha na-akọwa nzaghachi agbakwunyere nke usoro ahụ. Ozi metụtara Isotope metụtara nkesa nke ihe mejupụtara isotopic yana nkọwa nke ịba ụba ma ọ bụ uru dị ọcha akọpụtara..
Nkwubi okwu emeziri bụ ịrịọ ụdị akaebe abụọ nwere nkọwa doro anya. Jụọ ma nkwupụta isotope ọ̀ na-ezo aka na ịba ụba atọm na ngọngọ ụlọ, ọnụ ọgụgụ ndị molekụla akara ikpeazụ, ma ọ bụ ihe ọzọ. Agaghị ewere nkọwa ndị a dị ka mgbanwe n'aghọtaghị ọrụ ahụ.
Ihe akaebe dị mkpa na-agụnye ozi nzacha dị mkpa nke nza ikpeazụ, ụkpụrụ isotope e zubere, na nkọwa nke uru isotope a kọrọ. O kwesịkwara ileba anya n'ụdị ọkụ ọ bụla ma ọ bụ nke nwere akụkụ nke metụtara nyocha ahụ. Ụlọ nyocha ahụ ekwesịghị ikwupụta na ha anọghị naanị n'ihi na ọnụ ọgụgụ kacha elu chromatographic buru ibu.
Echiche ụgha abụọ: okwu ahụ dị arọ na-akọwapụta ọnọdụ akara
Njehie nke abụọ bụ ịtụ usoro a maara nke ọma dị ka "dị arọ" ma chee na onye ọ bụla na-ebubata ga-etinye otu isotopes n'otu saịtị ahụ.. Nkọwapụta kwesịrị ịchọpụta ihe fọdụrụ akpọrọ, ụdị isotope na ọnụ, na mgbanwe ọ bụla ọzọ. Akara akara n'ọnọdụ dị iche nwere ike ịgbanwe iberibe iberibe na-ebu nnukwu ọdịiche.
Na AGSVQTK, chọpụta Lys7 na carbon-13 isii ya na nitrogen-15 nnọchi ya nke ọma. Nke ibe ọkọlọtọ ProForma depụtara ikpeazụ version 2.1; kwado nrịbama nke sistemu nnabata na-akwado. Chekwaa nkọwapụta isotope nke mmadụ nwere ike ịgụ ka akara mkpirisi enweghị ike ịgbachi nkịtị kọwaa ọkọlọtọ..
Oligopeptides 2 Nke Otu ndekọ 13C6/15N2 na-enye a monoisotopic increment nke 8.014199 Da maka nnọchi ahụ. Mmụba ahụ bụ nke mejupụtara akọwapụtara, karịa ngwaahịa ọ bụla a na-akpọ "Lys8" ma ọ bụ "gbakwunyere asatọ." Ọ bụ ọdịiche na-anọpụ iche; ntụnyere ion chọkwara ụgwọ na njigide akara.
Ihe akaebe dị mkpa bụ nkọwapụta molekụla jikọtara ya na oke nza na ọrụ nyocha dabara na ya. Aha otu ọkọlọtọ ọkọlọtọ bara uru, mana ọ naghị eguzobe nhazi ma ọ bụ nkesa isotope nke vial ewepụtara n'onwe ya.
Akara aha abụọ gbakwunyere-asato. Unimod depụtara iche iche Lysine 2H8 ya na 8.050214 Na monoisotopic abawanye. Ọ na-eji deuterium dochie hydrogens asatọ kama dochie carbons isii na nitrogen abụọ. Ha abụọ rịgoro gburugburu ruo asatọ na nzizi integer, ma kpọmkwem mejupụtara iche.
Iji ụkpụrụ edekọtara, ihe dị iche n'etiti ọnụọgụ abụọ ahụ bụ 8.050214 - 8.014199 = 0.036015 Na. N'otu aka ahụ okpukpu abụọ protonated ụgwọ steeti, nkewa nke oke-na-ụgwọ ha gbakọrọ ga-abụ 0.0180075. Usoro mgbakọ na mwepụ a anaghị ekwupụta na usoro n'ezie na-edozi ụdị ahụ, na akara ọ bụla dị na nza ewepụtara ma ọ bụ na chromatography ha bụ otu. Ọ na-egosi ihe kpatara aha akara integer ezughị oke maka ọrụ.
Ihe njirimara na ihe mejupụtara isotopic na-akọwa ọkwa dị iche iche nke ebumnuche. Dochie carbon-12 na carbon-13 na-echekwa carbon element mgbe ọ na-agbanwe oke-kpọmkwem isotope.. Usoro ihe omimi nke na-edekọ naanị mkpokọta mmewere nkịtị nwere ike hapụ ihe dị iche na-akọwa ọkọlọtọ. Jido nkọwa nke edoziri isotope kama ịdabere na usoro enweghị akara yana aha otutu..
Mgbe akara ewepụtara dị iche na arịrịọ a, ịmata ọdịiche dị na mgbazi akwụkwọ site na ngbanwe anụ ahụ. Ọ bụrụ na naanị asambodo ahụ jiri obere mkpirisi enweghị mgbagha, ndekọ ọzọ nwere ike dokwuo anya ihe dị ugbua. Ọ bụrụ na atụmatụ isotope n'ezie dị iche, ịgbanwe nkọwa anaghị eme ka ọ bụrụ ọkọlọtọ akọwapụtara na mbụ. Ụlọ nyocha ahụ ga-enyocha ihe dị iche iche yana echiche usoro ọ bụla dabere tupu ọ kpebie ma ọ ga-arụ ọrụ a chọrọ..
D na aha isotope "D8" na-ezo aka na deuterium. D-Lys na nkọwa stereochemical na-ezo aka n'echiche nhazi dị iche. Ịkpọ aha Isotopic Oligopeptides 24 na nhazi L / D bụ akụkụ kwụụrụ onwe nke ebumnuche. Dekọọ ma mgbe ọ dị mkpa kama ịtụgharị asụsụ mbiri nke nwere D n'ime nke ọzọ.
Oxytocin Peptide usoro onunu ogwu Kwadokwa otu ọnụ ọnụ, nhazi ebe ọ dị mkpa, na mgbanwe ọ bụla ọzọ. Dakọtara atụmatụ isotope ka ị na-agbanwe ụdị mkpụrụ ndụ dị n'okpuru anaghị emepụta ọkụ/oke dị arọ dabara nke ọma maka ntụnyere e bu n'obi..
Echiche ụgha atọ: Ngbanwe nke oke ibu na-akwado nhọrọ ngwaahịa-ion ọ bụla
Njehie nke atọ bụ ịchọta ọdịiche a na-atụ anya na mbụ ma chee na ion ngwaahịa ọ bụla bara uru maka ịmata ọdịiche dị arọ na ihe dị mfe.. Ebe akara isotope dị mkpa n'ihi na iberi nwere ike ịnwe ihe fọdụrụ akara ma ọ bụ wepụ ya.. Oligopeptides 41
Maka akara ngosi lysine C-terminal, Iberibe usoro nke na-ewepu Lys7 anaghị enweta nnukwu onyinye nke akara ahụ naanị n'ihi na ihe mbụ ya dị arọ.. Iberibe nwere akara akọwara na-ebu onyinye dabara adaba, na m/z a hụrụ na-adaberekwa na ụgwọ ion.
Nke a bụ atụmanya dabere na mejupụtara, ọ bụghị ihe ngbanwe maka ịkọwa ụdịdị dị iche iche enwetara. Ihe omume iberi, na-anọpụ iche ọnwụ, nnyonye anya, na omume ngwá agha ga-nyochaa n'ezie usoro. Atụgharịla usoro usoro dị mfe ka ọ bụrụ ndepụta mgbanwe a pụrụ ịdabere na ya na-anwalebeghị.
Nyochaa n'ezie precursor na ngwaahịa-ion ọrụ megidere isotope mejupụtara na saịtị. Ntugharị ebubata site na ọkọlọtọ “gbakwunyere-asato” ọzọ nwere ike itinye akara ma ọ bụ ụdị molekụla dị iche. Chekwaa ngụkọ na nkọwapụta isi mmalite site na iji usoro nyocha kama iche na mgbanwe integer dabara adaba na-egosipụta nhata..
Ihe akaebe dị mkpa gụnyere naanị ọkụ kwesịrị ekwesị, arọ-naanị, na nlebanya metụtara matriks ma ọ bụ njikwa maka ajụjụ usoro. Ọnụ ọgụgụ kasị elu na m/z a na-atụ anya na-adịghị na nnyonye anya na-akpaghị aka, na akara anaghị eme ka akara ngosi ọ bụla a tụrụ atụ bụrụ ihe pụrụ iche sitere na ebumnuche.
Echiche ụgha anọ: itule ntụ ntụ dị arọ na-ekpebi ego e kenyere ya
Njehie nke anọ bụ ilekọta vial uka ọnụ ọgụgụ dị ka ọnụọgụ nke ebumnuche akpọpụtara. Nnukwu ihe nwere ike ịgụnye ihe ndị ọzọ na-abụghị ebumnuche ahụ, na ọnụ ọgụgụ ndị isotope nwere ike ịchọ nkọwa nke ya. Ejikọtara ọnụ ọgụgụ ọrụ yana njirimara isotope mana ọrụ dị iche.
Onye ọrụ gọọmentị Ibe ọrụ HeavyPeptide AQUA na-ekewa ọkwa ọrụ yana usoro ewepụtara. Kwenye n'ezie ọnụọgụ ọnụọgụgụ maka usoro eweghachiri. Otu ọrụ anaghị egosi na ihe ngosi ọ bụla gụnyere ihe omume nha anya.
Nkwubi okwu emeziri bụ ịrịọ ego doro anya ma ọ bụ nkọwa ntinye uche, ndabere ọrụ, na oke mkpa maka nza ewepụtara na Peptide siri ike ngosi. Ọ bụrụ na uru na-ezo aka na mkpokọta peptide metụtara ihe, jụọ ka o siri gbasa ụdị akpọrọ isotope e bu n'obi were na mgbako.
Ejila nkịtị tinye pasentị ịdị ọcha kemịkalụ na pasentị isotope dị ka ndị na-abawanye ụbara onwe ha na-aghọtaghị ka esi wepụta ọnụọgụ nke ekenyere.. Nkọwa ha nwere ike ịgbakọta ma ọ bụ kọwaa ntọala na-ekwekọghị. Nsonaazụ mara mma ka nwere ike dabere na ngụkọ na-ezighi ezi.
Denominator maka ego ekenyere hoo haa. Ọ nwere ike na-emetụta agbụ niile metụtara peptide, usoro ebumnuche gafee ụdị isotope, ma ọ bụ ụdị molekụla a na-atụ anya ya. Ọnụ ọgụgụ ndị ahụ ekwesịghị ikwekọ. Ọrụ e dezigharịrị n'ụdị a chọrọ ekwesịghị ịnata otu mgbazi ọzọ naanị n'ihi na pasent ọzọ pụtara na asambodo ahụ..
Nkwadebe ndekọ, na-enyefe, akpa, na mkpa njide akụkọ ihe mere eme. Ọnụ ego e kenyere ziri ezi na nnata anaghị ekwe nkwa na otu ego ahụ ruru nha ọ bụla ma emechaa. Ijikwa ọkọlọtọ ime ahụ kwesịrị ịnọgide na-ejikọta ya na ọrụ nyocha ya. Peptide Dermorphin
Mgbanwe na nkọwapụta isotope kwesịrị ịkpalite nyocha nke mgbako dabere na ntinye usoro. Debe ndekọ ndekọ ochie na nke edegharịrị iche ka a mara ya. Imelite aha njirimara vial na-enweghị ịlele ọtụtụ na ntụgharị nwere ike ime ka mgbaama atụpụtara nke ọma yie ka ọ na-efu ma ọ bụ gbanwee., ebe windo mmịpụta sara mbara na-ezighi ezi nwere ike izochie ndakọrịta.
Echiche ụgha ise: peptide dị arọ agbakwunyere mgbe mgbari nri na-achịkwa usoro ọrụ niile
Njehie nke ise bụ iche na ọkọlọtọ ime na-akwụ ụgwọ maka usoro ndị mere tupu ewebata ya. Otu peptide n'efu agbakwunyere mgbe mgbaze protein enweghị ike ịkọ kpọmkwem etu protein e lekwasịrị anya tụfuru ma ọ bụ etu esi mepụta peptide ebumnuche ya nke ọma n'oge nhazi mbụ..
Nkwubi okwu emeziri bụ ịkọwapụta oke njikwa ahụ. Otu peptide arọ dabara na ya nwere ike inye aka nyochaa ọkwa nha ọ na-eso nke ọma, mana ọ naghị akwado usoro ọrụ protein niile na-arụpụta.
Nleta atụ maka njụta oke oke: Ọ bụrụ na ajụjụ a ekwuru bụ nzaghachi nke ihe nlele peptide akwadoro na nha LC-MS nke ala, ọkọlọtọ peptide mgbe mgbari nri nwere ike ịdị mma maka ebumnuche ahụ nwere oke. E kwesịghị ịjụ ya naanị n'ihi na ọ naghị enyocha mgbaze; nkwupụta ahụ ga-adabarịrị n'ókè nke mgbakwunye.
| Ebumnuche nnwale | Nhọrọ mgbanwe | Njikwa ma ọ bụ ndekọ | Gụpụta na oke |
|---|---|---|---|
| Chọpụta ebumnuche dị arọ na nke dị mfe | Ụdị isotope akọwapụtara, na-agụta, na saịtị | Ihe akaebe dị naanị ọkụ na nke dị arọ dabara na usoro ahụ | Ekenyere precursor na omume iberibe; ọ dịghị chere eluigwe na ala kpọmkwem kpọmkwem |
| Jiri ọnụọgụ ọkọlọtọ amaara nke ime | Ebubere aha njirimara ya na ntọala ego ekwuputara | Ọtụtụ ọrụ na ndekọ nkwadebe | Mgbakọ dabere na oke n'ime ụdị ọnụọgụ akwadoro |
| Nyochaa nha nke ala | Ọkọlọtọ peptide dabara adaba nke ọma | Isi ihe mgbakwunye na njikwa matriks dị mkpa | Arụmọrụ maka usoro ndị so, ọ bụghị ihe a na-ahụ anya na mbụ efu |
Nyochaa ọkọlọtọ dị ka molekul akọwapụtara nke ọma: isotop ụdị, na-agụta, saịtị, Ọdịdị dị n'okpuru na ọnụọgụ nke ekenyere. Jikọọ nkọwa ahụ na nza na usoro n'ezie. Labelụ n'ọnụ ka bụ aha dabara adaba naanị ka echekwara mpaghara ndị ahụ.
Ajụjụ a na-ajụkarị
Bụ ịdị ọcha kemịkalụ na ịdị ọcha isotope bụ otu àgwà? Mba. Ha na-akọwa akụkụ dị iche iche nke nkwadebe ahụ ma chọọ nkọwa doro anya. Pasent mpaghara chromatographic dị elu anaghị ewepụta ọnụ ọgụgụ ndị isotope ezubere.
Na-eme akara gbakwunyere-asatọ na-agbanwe ion ọ bụla site na nkeji asatọ m/z? Mba. Kpọmkwem mejupụtara isotop, ma ion nwere akara, na ụgwọ nke ion bụ ihe niile. Jiri mgbakọ ukwu kwesịrị ekwesị yana ihe akaebe dị egwu.
Enwere ike ịchọta ego peptide dị arọ site na nnukwu vial ya? Ọ bụghị na-akpaghị aka. Nweta nkọwapụta ọnụọgụgụ yana ndabere ọrụ, wee kọọ maka ihe akọwapụtara na ọnụ ọgụgụ ndị isotope mgbe niile.
Ịgbakwunye peptide dị arọ n'efu tupu mgbari mgbaze na-edozi nsogbu niile nke usoro ahụ? Mba. Otu peptide n'efu anaghị akpa àgwà dị ka protein na-emebibeghị n'oge mmịpụta na proteolysis. Họrọ njikwa na-eleba anya n'ezie ajụjụ elu.
