Lihlopha tse Sireletsang Amino - Rera Phetoho ea Multistep Peptide
Mokhoa oa ho theha laboratori ea Peptide Bonds Peptoid Peptide e ka kopana ka katleho mme e ntse e hloleha mohatong oa ho qetela oa ho ngola. Sebaka sa marang-rang se reriloeng se ka lula se sirelelitsoe, tshireletso ya pejana e ka pepesa amine e hlodisanang, kapa label e kentsoeng e kanna ea se phele ts'ebetsong e latelang. Bakeng sa merero e mengata, ho khetha lihlopha tse sireletsang amino bakeng sa motsoako oa peptide ho bolela ho rera histori e feletseng ea lik'hemik'hale tsa sepheo, eseng feela ho khetha Fmoc kapa Boc bakeng sa kopano ea ketane.
Potso ea bohlokoa e tobile: ke sehlopha sefe se sebetsang se tlamehang ho ba teng mohatong o mong le o mong, le lihlopha tse ling tse lokelang ho lula li sa fetohe? Karabo e lokela ho bonahala tlalehong ea litsela eo laboratori e 'ngoe e ka e hlahlobang. Lenane la mabitso a lihlopha tse sireletsang ntle le libaka tsa bona, mekhahlelo ea ho tlosa, 'me bopaki ba ho lumellana ha boa lekana.
Sengoliloeng sena se hlahisa tlhahlobo e inahaneloang ea moralo ho fapana le protocol e netefalitsoeng ka liteko. E shebana le logic ea litsela, ho hloleha ho hlalosa, le bopaki bo hlokahalang bakeng sa ho fetisoa. Maemo a sebele a reagent le meeli ea ho amohela li hloka nts'etsopele bakeng sa tatellano e hlalositsoeng, tshehetso, liphetoho, le sekala.
Khetholla tšireletso ea nakoana ea amino ho tsoa ho phihlello ea ketane ea lehlakore
Fmoc hangata e sebelisoa e le tšireletso ea nakoana ea base-labile ea sehlopha se ntseng se hola sa alpha-amino.. Boc ke acid-labile mme e ka sebetsa mesebetsi e fapaneng ho latela leano le akaretsang, ho kenyelletsa ts'ireletso ea nakoana ea alpha-amino ho synthesis e thehiloeng ho Boc kapa ts'ireletso ea ketane ea mahlakoreng ka morero oa Fmoc. Lebitso le tšoanang la sehlopha ha le hlalose sebaka kapa morero oa sona.
Tšireletso ea Orthogonal e bolela hore lihlopha tse khethiloeng li ka tlosoa tlas'a maemo a bolokang lihlopha tse ling tse hlokahalang sethaleng seo. Ena ke likamano ka har'a tsela e itseng. Ho letsetsa lihlopha tse peli tse sireletsang orthogonal ha ho bontše ho lumellana le sehokelo se seng le se seng, fluorophore, glycan, tatelano, kapa kgafetsa kgafetsa.
Tšireletso ea mokokotlo oa amide ke sesebelisoa se seng se ikhethileng. E ka fetola boitšoaro ba ho kopanya kapa ea thibela amide ea mokokotlo e sebetsang e amehang ho thehoa ha aspartimide. Ha ea lokela ho ferekanngoa le tšireletso ea nakoana ea sehlopha sa mahala sa alpha-amino se sebelisetsoang ho atolosa ketane ea kamehla.
Mokhoa o sebetsang oa ho hlahloba tšebelisano ke ho hula boemo ba lik'hemik'hale pele ho ts'ebetso e 'ngoe le e 'ngoe e khethiloeng. The Selelekela sa Mokhatlo oa Amerika oa Peptide SPPS e fana ka selelekela sa tšireletso ea nakoana le kopano. Morero oa li-multitag o eketsa tlhoko e 'ngoe: tsela e tlameha ho boloka phapang e lakatsehang lipakeng tsa libaka tsa marang-rang tsa lehlakore hammoho le pheletso e ntseng e hola ea ketane.
Ka hona, tlhahlobo ea ho lumellana e lokela ho kenyelletsa ntho e 'ngoe le e' ngoe e seng e ntse e le teng ha sehlopha se tlosoa. Haeba phetoho e hlokolosi e kentsoe pele ho nako, e rua maemo a mohato o mong le o mong o latelang. Ho e kenya hamorao ho ka fokotsa ponahalo eo empa ho baka mathata a macha a ho khetha kapa a ho qhibiliha.
Ponahalo e akaretsang e lokelwa ke sebaka tlhahlobisong eo. Papisong ea boikaketsi, ho kenya sehlopha se hlokolosi pele ho liketsahalo tse mashome a mane tse latelang tsa kalafo ho fana ka makhetlo a robeli ho feta palo ea ketsahalo pele ho tse hlano.. Sena ha se bolele esale pele phapang ea ho theoloa ka makhetlo a robeli: kgahlamelo ya motho ka mong, boemo ba reagent, mocheso le liphello tse se nang moeli li ka 'na tsa fapana. E bontša hore na ke hobane'ng ha "stable to base" ntle le histori ea ho pepeseha e lekiloeng e sa hlaka haholo ho tšehetsa phetiso ea litsela.
Morero oa boikaketsi oa phetoho ea libaka tse peli
Mohlala o inahaneloang. Sehlopha se batla peptide ea mola e nang le tag e hlalositsoeng ea N-terminal, tag e fapaneng ka lehlakoreng la ketane ea amino sehlopha sa Lys8, lysine ea bobeli e sa fetoloang boemong 13, le sehlopha sa mahala sa C-terminal carboxyl. Ho tla hlokahala tatelano e felletseng le meaho ea li-tag pele tsela ea 'nete e ka amoheloa. Litšitiso tsena tsa moralo li lekane ho bonts'a mohopolo oa tlhahlobo.
Tsela e tlameha ho khetholla libaka tse tharo tsa amino: sebaka sa N, Lys8, le Lys13. Ho pepesa liketane tse peli tsa lehlakoreng la lysine pele o kenyelletsa tag e sebetsang ka amine ha e hlahise phetoho e ikhethileng ea Lys8.. Kakaretso e batloang ea boima e ka boela ea hloleha ho paka hore tag e sebakeng se reriloeng.
Leano le le leng la mokhethoa le sebelisa sehlopha se sirelletsang ka lehlakoreng se ka tlosoang Lys8 ha se ntse se boloka tšireletso Lys13 le ho laola ho fumaneha ha N-terminal.. Mokhethoa e mong o kopanya e sirelelitsoeng ka mokhoa o nepahetseng kapa o khethiloeng ka mokhoa o ikhethileng Peptide Antimicrobial e mahareng mme e phethela phetolo ya hamorao tharollong. Ha ho tsela e khethiloeng ka bo eona; papiso e itšetlehile ka botsitso ba tag, ho qhibiliha ha mahareng, kgetho, tlhoekiso, le bopaki boemong bo bong le bo bong.
Bakeng sa sepheo se inahaneloang sa li-amine tse tharo, naha ea pele e ka pepesa feela Nterminus ha Lys8 le Lys13 li ntse li koetsoe. Kamora ho kenya tag ea N-terminal, mmuso o latelang o ne o tla pepesa Lys8 ha Lys13 e ntse e koetsoe mme tag ea pele e ntse e tiile. Ho tlosoa ha ts'ireletso ea ho qetela ho tlameha ho fana ka Lys13 e sa fetoloang ntle le ho tlosa tag e reriloeng. Ena ke tatellano e reriloeng ea maemo a lik'hemik'hale, e seng tumello ea ho kopanya sehlopha se sa hlalosoang.
Lekola 'mapa oa naha khahlano le mohlala o fapaneng: ho pepesa Lys8 le Lys13 hammoho pele o kenyelletsa tag ea bobeli ho ke ke ha theha khetho ea Lys8 hobane feela karabelo e eketsa tag e le 'ngoe ka ketane ka karolelano.. Karolelano e ts'oanang e ka hlaha ho tsoa ho li-isomers tsa maemo kapa metsoako ea liketane tse sa tšoauoeng le ho atisa liketane tse tšoailoeng. Bopaki ba mahareng le ba ho qetela bo amang sebaka sa marang-rang bo tlameha ho khetholla menyetla eo. Kakaretso ea boima e lekanya thepa e fapaneng le sebaka sa sehokelo.
Sehlopha se lokela ho hana tsela haeba ts'ireletso ea eona e hlokahalang e tlosa le sehlopha se lokelang ho sala kapa se senya tag e kentsoeng tlasa maemo a amehang.. Haeba ho lumellana Mokhoa oa ho theha laboratori ea Peptide Bonds ha e tsejoe, tšoaea tsela e hlokang boithuto bo tsepamisitsoeng ba ho khonahala. U se ke ua fetola "ha e e-s'o lekoe" hore e be tiisetso ea katleho kapa phatlalatso ea hore ha ho khonehe.
Rera lisampole tse mahareng pele u sebelisa thepa. Aliquot e nkiloeng feela ka mor'a hore li-tag ka bobeli li kenngoe e ke ke ea bontša ka ho toba hore na tag ea pele e pholohile sethaleng se khethiloeng sa Lys8 se sa fetohe.. Moo ho lumellana hoo ke ho hloka botsitso ho ka sehloohong, boloka mohlala oa moemeli pele le ka mor'a ts'ebetso eo. Papiso e lokela ho sebetsana le tag le sebaka se sa tsoa fumaneha hammoho, ka litekanyo life kapa life tse sebelisang lisampole tse kenyellelitsoeng tekanyetsong ea lintho tse bonahalang.
Sekhaso sa fragment le sona se tlameha ho lumellana le tleleime. Sekhechana sa boitsebiso ba sebaka se nang le Lys8 empa se sa kenyeletse Lys13 se ka thusa ho sebetsana le boemo ba sebaka haeba tag e bolokiloe 'me sekhechana se abeloa ka kholiseho.. Sekhechana se nang le libaka tseo ka bobeli se ka netefatsa sebopeho se fetotsoeng ha se siea libaka tseo li sa rarolloa. Ho haella ha sekhechana sa boitsebiso ke lekhalo bopaking ba sebaka, ha se bopaki ba hore ha ho na mokhoa o mong oa maemo o teng. Mokhoa oa ho theha laboratori ea Peptide Bonds
| Leano la tshireletso | Potso ea ho lumellana | Letšoao la ho hloleha ho batlisisa | Hlahloba karabo |
|---|---|---|---|
| Ho tlosoa ha Fmoc khafetsa nakong ea kopano | Na lihlopha tsa tatelano le tse bolokiloeng li ka mamella ts'oaetso e akaretsang? | Katoloso e sa fellang kapa likarolo tse ncha tse itšetlehileng ka tatelano | Hlahloba nalane ea ho pepeseha 'me u khetholle tšireletso ea masala ho litšila tse ling |
| Tšireletso ea acid-labile e tlositsoe haufi le ho phethoa | Na liphetoho tse kentsoeng le sehlahisoa se reriloeng se tla pholoha tikoloho ea cleavage? | Leibole e fetotsoe, litlatsetso tse sa lebelloang, kapa mefuta e sa sireletsehang ka ho felletseng | Bapisa li-intermediate tse hlalositsoeng 'me u lekole botšepehi ba sehlahisoa le botlalo ba tšireletso |
| Khetho e ikhethileng ea ketane ea mahlakoreng | Na ke sebaka se reriloeng feela se fumanehang tlas'a maemo a khethiloeng a tsela? | Mefuta e mengata e ngotsoeng kapa li-isomer tsa boemo bo sa rarolloang | E hloka bopaki bo shebaneng le sebaka; boima bo felletseng bo le bong ha boa lekana |
| Tšireletso ea mokokotlo oa amide sebakeng sa kotsi | E ka kenyelletsoa, Kopanya, 'me ho tlosoa ha ho qetela ho phetheloe ntle le ho senya likarolo tse ling? | E hatelletsoe karabelo ea lehlakore empa mathata a macha a ho kopanya kapa ho tlosa | Lekola boemo bohle ba litšila le ho hlaphoheloa ha sepheo se ikhethileng |
Hlalosa maikutlo a mahlakore ntle le ho a hlahloba ho tloha tlhorong e le 'ngoe
Sebopeho sa aspartimide se bohlokoa ha tatellano e nang le Asp le nalane ea eona ea ho pepeseha e lumella cyclization e kenyelletsang ts'ebetso ea carboxyl ea lehlakore le mokokotlo oa boahelani oa amide.. Maikutlo a latelang a ka hlahisa mefuta e fapaneng ea sebopeho. Ho ba teng ha masala a Asp feela ha ho hlahise palo kapa boitsebiso ba litšila leha e le life morerong o mocha..
Thuto ea Abdel-Aal le basebetsi mmoho le Hmnb e bonts'a ts'ireletso ea mokokotlo ka kakaretso e khethiloeng- le mehlala e tloaelehileng ea aspartimide. Kenyelletso le ho tlosoa ha eona ke liphetoho tse ling, eseng feela switch e tlosang kotsi e le 'ngoe. Pele o alima mokhoa oo bakeng sa sepheo sa li-tag tse peli, hlahloba hore na ts'ebetso e hlokoang hamorao e boloka li-tag le hore na ho tlosoa ho siea mokokotlo o reriloeng o ntse o le teng.
Racemization le tšireletseho e sa phethahalang li hloka lipotso tse fapaneng. Sehlopha se setseng se thibelang se ka thibela ho kopanya ho lakatsehang ntle le ho fetola tlhophiso; phetoho ea tlhophiso e ka siea sebopeho sa lebitso se sa fetohe. Hape e ke ke ea fumanoa feela ka karabelo e tlase ea ho qetela ea lileibole. Latela phapang e belaelloang ea limolek'hule le bohareng boo e ka beng e hlahile ho eona.
Tšireletso e sa phethahalang e ka siea sebaka sa marang-rang se reriloeng se sa fumanehe. Leha ho le joalo, tlhahiso e tlase ea li-label e na le litlhaloso tse ling tse ka bang teng, ho kenyeletsa le maikutlo a hlolisanoang, thepa e sa fihlelleheng, kapa tahlehelo nakong ea ho sebetsa. Hlalosa hore na motho ea amehang ea mahareng o ne a hlile a le teng pele a bolela hore ho hloleha ha sehlopha se sireletsang. Peptide Bakeng sa ho ruruha
Chromatogram e tala e ka senola liphapang tse lokelang ho etsoa lipatlisiso, empa nako ea ho boloka feela ha e khetholle sehlahisoa se lehlakoreng. Boima bo sa fetoheng bo ka ts'ehetsa likabelo tsa ho qapa ha li ntse li haelloa ke phapang ea maemo kapa ea stereochemical. Sebelisa mokhoa o belaelloang ho khetha litekanyo tse ling le lisebelisoa tsa litšupiso; boloka litlhaloso tse ling ho fihlela bopaki bo li khetholla.
Fetisetsa tsela e le tatellano ea libaka tsa lik'hemik'hale tse hlahlobiloeng
Rekoto e tlase e kenyelletsa tatelano e felletseng ea sepheo le linomoro, tlhophiso, pheletso ea ho qetela, tokiso e 'ngoe le e 'ngoe e reriloeng le bonto ea sehokelo, le boitsebiso ba sehlopha ka seng se sireletsang setšeng ka seng. E boetse e kenyelletsa tšehetso kapa sehokelo, mofuta oa tsela, histori ea tshebetso, li-identifiers tsa mehlala tse mahareng, liqeto tsa tlhoekiso, le sephutheloana sa ho qetela sa tlhahlobo.
Bakeng sa mohato ka mong, hlalosa sehlopha se reretsoeng ho tlosoa, tšobotsi e 'ngoe le e' ngoe e tlamehang ho phela, le tlhokomeliso e ka khethollang lipakeng tse reriloeng ho tse ling tse utloahalang. Bakeng sa sethala sa ho hlahisa Lys8, seo se bolela bopaki ba Lys8 e fumanehang hammoho le ts'ireletso ea Lys13 e bolokiloeng le tag ea pele e tiileng. Setifikeiti sa ho qetela se ke ke sa etsa papiso ea mahareng e sieo.
Ngola mekhoa ea phekolo e pheta-phetoang, liehiloe tsa ho sebetsa le li-intermediate tse nchafalitsoeng e le karolo ea nalane ea lik'hemik'hale. Haeba sehlopha se le seng se hloka nako e eketsehileng ea ho tlosa, bapisa mefuta e amehang e sirelelitsoeng le e pepesitsoeng pele u etsa qeto ea hore bopaki ba pele ba ho lumellana bo ntse bo sebetsa. Boloka likabelo tse mahareng tse atlehileng le tse sa fihlelleheng.
Hlahloba tšebelisano pele u amohela tatelano ea ts'ebetso. Hlahloba lintlha tse sa hloekang le tse mahareng pele u khetha tlhoekiso. Hlahloba boitsebiso ba sebaka sa ho qetela, tshireletso e setseng, kabelo ea chelete, le tshebetso e amehang pele o amohela sehlahiswa bakeng sa teko ya sona e rerilweng. Tsena ke liqeto tse fapaneng 'me li ka hloka mekhoa e fapaneng ea tlhahlobo.
Haeba bopaki bo tobileng ba sebaka bo le sieo, qeto e ka tšeptjoang e ka ’na ea e-ba “mofuta o nang le sebōpeho se lebeletsoeng ka kakaretso,” eseng “mokopanyi oa Lys8 o kopiloeng.” Haeba lirekoto tse mahareng li le sieo, laboratori ea morao-rao e ka hlahisa risepe ea lebitso ntle le ho khona ho hlalosa sephetho se fapaneng. Koala likheo pele u tšoara tsela e le e ka fetisetsoang.
Ha ho bapisoa litsela tse peli, bala hofeta mehato e kopanyang ka lebitso. Morero o khuts'oane o ka hloka karohano e thata ea morao-rao ea li-isomer tsa boemo, ha moralo o molelele o ka fana ka phihlello ea sebaka se hloekileng empa oa hlahisa potso e 'ngoe ea botsitso ba tag. Papiso e molemo ke bopaki le lintho tse reriloeng tse fumanehang ho tsoa tseleng e 'ngoe le e 'ngoe e felletseng, ho kenyeletsa le tse salang di sa rarollwa ka mora tlhoekiso.
Lipotso tse botsoang khafetsa
Na Fmoc khahlano le Boc ke qeto eohle ea sehlopha se sireletsang? Che. Leano la alpha-amino ke karolo e le 'ngoe feela. Khetho ea lehlakore-ketane, likotsi tsa mokokotlo, boits'oaro ba linker, botsitso ba tag, le tatellano ea liphetoho tsa morao-rao le eona e lekanyetsa ho lumellana.
Na tšireletso ea orthogonal e fana ka tiiso ea ho khetha li-labeling? E fana ka motheo oa moralo bakeng sa phihlello e ikhethileng, empa sephetho sa 'nete sa mahareng le sa karabelo se hloka netefatso. Ho tlosoa ho sa phethahalang, kgahlamelo e sa lebelloang, kapa maikutlo a tlholisano a ntse a ka nyenyefatsa khetho.
Haeba peptide e 'ngoe le e' ngoe e nang le Asp e lokela ho sebelisa tšireletso ea mokokotlo? Ha ho molao o akaretsang o latelang ho tsoa lithutong tse boletsoeng. Tatelano moelelo, kgahlamelo e bokellaneng, e hlokometse boitšoaro bo litšila, 'me litšenyehelo tsa mehato e eketsehileng ea litsela li lokela ho tataisa qeto e tobileng.
Ke lokela ho botsa eng pele ke fetisetsa litsela tse ngata? Kopa 'mapa oa ts'ireletso ea sebaka ka seng, bopaki bakeng sa phetoho e 'ngoe le e 'ngoe e khethiloeng, data e tala ea mahareng le ea ho qetela, le lethathamo la likhakanyo tse sa lekoang tsa ho lumellana. Litlaleho tseo li etsa hore meeli ea tsela e bonahale.
