Tataiso ea Peptide Synthesis — Arohaneng ea ho bala ka Tatelano ea N-to-C ho Kopano
Lehae Liprotheine le Peptides Laeborari e amohela rekoto ea synthesis e thathamisang lysine pele, ha peptide e laetsoeng e qala ka glycine. Ho ikhanyetsa hoo ho bonahalang e ka ba ntho e tloaelehileng ka ho feletseng. Tatelano ea li-peptide e ngotsoe ka tloaelo ho tloha ho N terminus ho ea ho C terminus, empa mokhoa o tloaelehileng oa ho kopanya peptide o tiileng hangata o kopanya ketane ka tatellano e fapaneng ea masalla.. Ho ferekanya taelo e ngotsoeng le taelo ea kopano ho ka etsa hore mohlahlobi a fetole sepheo se nepahetseng.
Poleloana ea ho batla "peptide synthesis N to C terminus" ka hona e hloka karabo e ikhethileng.. Phetolelo ea Ribosomal e lelefatsa ketane qetellong ea eona ea C-terminal, ho fana ka kgolo ya N-to-C. SPPS e tlwaelehileng hangata e qala ka masala a C-terminal a hoketsweng ho tshehetso mme e eketsa masalla ho leba pheletsong ya N.. Maano a khethehileng a lik'hemik'hale a teng, kahoo rekoto ea tsela e bohlokoa ho feta molao o felletseng mabapi le motsoako oohle.
Sepheo sa tataiso ena ke phetiso e ka fetisoang. Laboratori e 'ngoe e lokela ho khona ho tsosolosa molek'hule e reriloeng, utloisisa tlaleho ea kopano, le ho khetholla bopaki ba taelo ea masalla ho bopaki bo tšehetsang tlhamo feela.
Bapisa litsela le moo libonto tse ncha li etsoang teng
Ho SPPS e tloaelehileng, ketane e ntseng e hola e bolokiloe ka tšehetso e tiileng ha ts'ebetso e latellanang ea ts'ireletso le ho kopanya e pepesa le ho atolosa pheletso ea eona ea N-terminal.. Boithuto ba mantlha ba Merrifield bo thehile kopano ea mekhahlelo e tiileng ka mohlala o itseng oa tetrapeptide. Ts'ebetsong ea morao-rao e eketsa ts'ireletso e mengata, sehokelo, le likhetho tsa lisebelisoa, empa ha ba fetole kopano bakeng sa ho ngola tatellano ea ho qetela.
Ka phetolelo ea ribosomal, li-amino acid li kenyelelitsoe ho latela tatellano ea likhoutu e fetoletsoeng, mme ketane e qalang e hola ho tloha ho N ho ea ho C. Mosebetsi oa meralo oa Nissen le basebetsi mmoho le ona o fana ka bopaki ba mantlha mabapi le setsi sa ribosomal peptide-bond-forming center.. Phapang ea tataiso ha e hloke ho amohela tlhaloso e 'ngoe le e 'ngoe ea histori e tsoang pampiring eo.
| Tsela | Khopolo ea kopano | Lintlha tse hlokahalang bakeng sa phetiso | Moeli oa bohlokoa |
|---|---|---|---|
| SPPS e tloaelehileng | C-terminal residue e tlameletsoe ke tšehetso; katoloso ea ketane e tsoela pele ho leba Nterminus | Tatelano ea ho qetela ea N-to-C, ho kenya boitsebiso, leano la tshireletso, sehokelo, le sephetho sa cleavage | Taelo ea kopano ha e hlalose bocha tatellano ea tatellano; termini ea ho qetela e ipapisitse le tsela |
| Tlhaloso ea Ribosomal | Ketane e fetoletsoeng e holisa N ho C | Aha, selelekela se fetoletsoeng, mehato ea ho sebetsa, le tlhahiso ea lihlahisoa tse holileng | Selelekela se boletsoeng ha se peptide e ikhethileng ka bo eona |
| Tharollo-mohato oa ho kopanya lik'hemik'hale | Masala a sirelelitsoeng kapa likhechana li kopantsoe ho latela tsela e khethiloeng | Boitsebahatso ba sekhechana, mapheletso a sebetsang, taelo ea ho kopanya, le histori ea tšireletso | Ha ho na tataiso e le 'ngoe e khuts'oane e hlalosang moralo o mong le o mong oa sekhechana sa converrgent |
| Native chemical ligation | Peptide thioester e loketseng le sekhechana sa N-terminal cysteine li kopantsoe mateanong a boletsoeng. | Meeli e arohaneng, k'hemistri e kopanyang, le liphetoho life kapa life tse latelang | Katleho ligation ha e iketsetse ho phuthoa ha ho qetela kapa tšobotsi e 'ngoe le e 'ngoe ea sebopeho |
Boithuto ba Dawson le basebetsi mmoho le bona ba native chemical ligation e fana ka mohopolo o fapaneng oa tsela: ka nepo likhechana tse sebetsang li kopanngoa ho theha matsoalloa Khoasolla peptide tlamo. Litlhoko tsa eona tsa sekhechana ha lia lokela ho hatelloa setšoantšong se le seng sa tlatsetso e le 'ngoe joalo ka SPPS. Ketane ea ho qetela e ntse e na le taelo ea N-to-C le ha likhechana tse 'maloa le ts'ebetso ea morao-rao e e hlahisa.
Morero oa ho ruta: ho dumellana le taelo ntle le ho kgutlisa sepheo
Morero oa ho ruta oa boikaketsi. Sepheo ke linear H-Leu-Ala-Phe-Thr-OH, e ngotsoe H-LAFT-OH, ka litlhophiso tse reriloeng tsa L, mahala termini mme ha ho na liphetoho tse eketsehileng. Taelo e reriloeng e lokisoa pele ho khethoa tsela. Ha ho chai, bohloeki kapa motsoako o atlehileng o nahanoa mosebetsing ona oa moralo.
Ho SPPS e tloaelehileng, Thr4 ke masala a C-terminal a khomaretsoeng ka tšehetso / sehokelo se khethiloeng. Phe3, Ka mor'a moo, Ala2 le Leu1 li hlahisoa ho N terminus. The Setsi sa mantlha sa Mokhatlo oa Amerika oa Peptide SPPS e hlalosa mohopolo wa kopano e akaretsang, empa mohlala oa eona oa Rink-amide ha o hlalose tšehetso bakeng sa sepheo sena sa mahala-acid. Sehlopha sa ho qetela se tlameha ho reroa ka thoko.
Lenane la tšebetso Thr, Phe, Ala, Ka hona Leu e lumellana le LAFT. Leibole ea sehlahisoa sa ho qetela ea TFAL e hlalosa taelo e fapaneng ea masala. Pele o phatlalatsa phoso ea ho khutlisa, tsebahatsa hore na lenane le tlaleha sehlahisoa se lakatsehang, tshehetso loading, kapa diketsahalo tse latelang tsa tlatsetso. Sehokelo sa ho kopanya se ka amohela sepheo sa ho qetela sa N-to-C mme sa hlahisa tatellano ea ts'ebetso ka hare; ho fetola seo u se kentseng ho ka baka phoso. LBH
Latela ketane ea tšehetso ka mor'a mohato o mong le o mong o atlehileng oa mohopolo: T, ebe FT, ebe AFT, ebe LAFT. E ngotsoe N ho C, masalela a macha a hlaha ka letsohong le letšehali la ketane e teng. Boikoetliso bona ba ho latela mohlala bo ka tšeptjoa ho feta ho tšoara ka hlooho hore motsoako ke "morao,” hobane e bontša hore na ke pheletso efe ea limolek’hule e fetohang ’me e boloka linomoro tse setseng tse lebisitsoeng hohle.
E boetse e beha phapang pakeng tsa li-log. Haeba ketsahalo ea tlatsetso ea Ala2 e le sieo, tlatsetso ea morao-rao ea Leu ho FT e tla lumellana le mokhethoa oa ho hlakola LFT tlasa nalane eo e nolofalitsoeng. Haeba masala a mane a le teng empa rekoto ea ho qetela e re TFAL, taba e mabapi le tatellano kapa ho ngola ho ena le masalla a sieo. Bana ke bonkgetheng bakeng sa dipatlisiso, eseng mafu a tsoang ho logong feela: karabelo e sa fellang le ho sa rekotiloeng bocha ho ka hlahisa mefuta e meng.
LAFT le TFAL li na le sebopeho se tšoanang sa masalla le boima bo tšoanang ba mohopolo ha liforomo tsa bona tsa terminal li bapa.. Boima bo lebelletsoeng bo ka thusa ho lemoha tse ling tse hlakotsoeng, empa e ke ke ea rarolla phetoho ena. Khetha bopaki ba tatellano bakeng sa khang ea taelo le bopaki ba sehlopha sa terminal bakeng sa phehisano ea mahala-acid-khahlanong le amide; lebokose le le leng la boitsebiso bo akaretsang le pata phapang.
Bakeng sa mokhethoa ea nolofalitsoeng ea sieo-Ala LFT, boima bo sa jeleng paate bo lebelletsoeng bo ka tlase ho LAFT ka monehelo o le mong oa masala a alanine, eseng ka boima ba amino acid e sa lefelloeng. Ho hlakolwa ho fetola lethathamo la masala le palo ea Mofuta oa B Peptide litlamo tsa mokokotlo; residue accounting e se e kenyelletsa phapang eo. Tlhōrō ea boima bo lekanang e ka fana ka mabaka a ho etsa lipatlisiso mabapi le ho hlakoloa, empa likabelo tse ling le mefuta ea li-ion li ntse li hloka ho qheleloa ka thoko pele u li reha.
Ka hona setšoantšo sa litsela se ka hlahisa lipotso tse peli tse fapaneng tsa tlhahlobo. Phetoho e belaelloang e botsa hore na masalla a tšoanang a etsahala ka tatellano e fosahetseng; e belaelloang hore e hlakotsoe e botsa hore na masalla a le mong ha a eo. Ea pele e ka boloka boima bo sa fetoheng, athe ea bobeli e fetola sebopeho. Ho bolela phapang eo pele u kopa tlhahlobo e eketsehileng ho etsa hore lipatlisiso li be tse tobileng ho feta ho kopa setifikeiti sa bobeli. Khampani ea Peptide Synthesis
Tsela e kopanetsoeng e tla hloka selelekela se fetoletsoeng le mokhoa o loketseng oa ho fumana tripeptide e lakatsehang.. Bakeng sa sepheo sena se senyenyane sa ho ruta, SPPS e tloaelehileng e fana ka moralo o otlolohileng oa moralo hobane lihlopha tse kopiloeng li ka hlalosoa ka kotloloho. Ena ke khetho e nepahetseng ea morero, eseng polelo e akaretsang ea hore peptide e 'ngoe le e' ngoe e khuts'oane e bonolo kapa e theko e tlase ka lik'hemik'hale.
Haeba morero o fetoha karolo e telele ea protheine e mennweng, papiso ea litsela e fetoha. Tlhaloso, fragment ligation, kapa leano le leng la lik'hemik'hale le ka khahla. Bolelele feela ha bo rarolle qeto; liphetoho, ho phutha, ho hlaphoheloa, le bopaki ba sehlahisoa sa ho qetela le bona ba bohlokoa.
Boloka bonyane rekoto ho tloha ho sepheo ho isa ho sampole e ikhethileng
Setšoantšo sa tatellano ha se phepelo e felletseng ea tlhahiso. Boloka lintlha tsa sepheo li arohane le litaelo tsa kopano, 'me u li boloke ka bobeli li hokahane le sampole e ikhethileng. Sena se thibela mokhoa oa shorthand hore o se ke oa etsoa ka phoso bakeng sa tlhaloso ea sehlahisoa.
| Rekote e fokolang | Lintlha tse hlokahalang | Ke eng e ke keng ea phethoa haeba e le sieo |
|---|---|---|
| Sepheo sa ho qetela | Tatelano ya N-to-C, tlhophiso ea masalla, termini, liphetoho, le likhokahano | Liphetho tseo tse peli tsa litsela li hlalosa molek'hule e le 'ngoe |
| 'Mapa oa tsela | Ts'ehetso ea ho kenya kapa boitsebiso ba selelekela, maqhetso a meeli, le taelo ea ts'ebetso | Hore na phetoho e hlakileng ea tatelano ke phoso ea 'nete |
| Nalane ea ts'ebetso | Tšireletso, qhetsola, ho tlosa tag, ligation, le diphetoho tse ding tse amehang | Hore sehlahisoa se arohaneng se na le lihlopha tsa li-terminal tse reretsoeng |
| Tlaleho ea tlhoekiso | Likaroloana, liqeto tsa ho kopanya, maemo a mokhoa, le mohlala oa ho qetela oa 'mapa | Hore karolo e hlahlobiloeng e emela vial e fanoeng |
| Sephutheloana sa tlhahlobo | Bopaki ba boitsebiso, mokhoa oa chromatographic, data e tala, le mefokolo | Tatelano, tlhophiso, le bohloeki bo feletseng ho tloha boleng bo le bong ba boima |
| Bongata le tšebeliso | Motheo oa chelete, boemo ba mohlala, teko e reriloeng, le mekhoa ea kamohelo eo ho lumellanoeng ka eona | Boima bo lekanang boo bo fana ka litekanyo tse lekanang tsa sepheo |
Bakeng sa polelo, kenyeletsa N- le meeli ea C-terminal ka mor'a ho sebetsa. Letlapa la fusion le ka thusa tlhahiso empa la siea masala a sa batleheng kapa baahi ba sa hloekang haeba moralo oa ts'ebetso o sa phethahala.. Bakeng sa SPPS, ngola sehlahisoa se reriloeng sa cleavage ho fapana le ho fana ka asiti ea mahala kapa amide ho tsoa ho tatellano ea litlhaku feela.
Bakeng sa litsela tsa likhechana, boloka boitsebiso ba sekhechana se seng le se seng sa ho kenya le bopaki ba sebaka sa sona sa ho kopanya. Boima ba ho qetela bo lumellanang le kakaretso ea likarolo ha bo tiise hore tlamo e 'ngoe le e' ngoe e thehiloe sebakeng se reriloeng. Potso ea sebopeho e lokela ho fana ka qeto ea potso ea analytical.
Hlahloba liphapang ka tatellano e tsitsitseng
Bala litlhaloso tsa ho qetela ka lentsoe le phahameng ka tatellano ea N-to-C. Ea bobeli, tseba hore na lenane ka leng la tšebetso le hlalosa tatellano ea sepheo, taelo ya tlatsetso, kapa taelo ea sekhechana. 'Mapa oa boraro ts'ebetso e' ngoe le e 'ngoe ho ea pheletsong e nepahetseng ea limolek'hule. Ea bone bapisa sehlahisoa se lebeletsoeng se sebelitsoeng le bopaki ba tlhahlobo ea sampole e ikhethileng.
Boloka litsamaiso tse hokahantsoeng ka bobeli rekotong: ketsahalo ea tlatsetso boraro e ka lumellana le masalla a mabeli a ketane ea ho qetela, ho ipapisitse le hore na ho kenya ts'ehetso ho baloa joalo ka ketsahalo. Bolela molao oo oa ho bala. Litlaleho tsa othomathike tse nolofatsang lits'ebetso 1, 2, 3 le 4 ka tsela e 'ngoe e ka abela sampole kapa ho hloleha ho kopanya ho masalla a fosahetseng. Sebelisa lihokahanyo tsa sepheo sa ho qetela bakeng sa likabelo tsa tlhahlobo 'me u boloke linomoro tsa ts'ebetso bakeng sa lipatlisiso tsa ts'ebetso.
Haeba tlhahisoleseding e sieo feela ke leibole e lethathamong la tlatsetso, kopa tlhakisetso pele o etsa tlhahiso ea resynthesis. Haeba chemistry ea 'nete ea terminal e sa hlalosoa, boitsebiso ba sehlahisoa bo lula bo sa phethahala le ha taelo ea masalla e hlakile. Haeba boima bo belaetsang bo ts'oana le li-isomer tse 'maloa tsa tatellano, ho fetela ho mokhoa o ka rarollang ho se hlaka ho itseng.
Ho hloleha ho tloaelehileng ho kenyelletsa ho kopitsa lenane la tlatsetso ka morao ho foromo ea odara, ho tshoara tatellano ya selelekela joalo ka sehlahiswa se hodileng, le ho nka hore peresente e phahameng ea sebaka sa chromatographic e paka taelo e nepahetseng ea masala. Tsena ke mathata a rekoto le a tlhaloso joalo ka mathata a k'hemistri.
Bakeng sa phetiso ea tsela, hlakisa phapang e le 'ngoe e tiileng ho e-na le ho hokela lethathamo le sa lebelloang la ho bala. “Lethathamo le thathamisa likeketso C ho N, ha foromo ea odara e thathamisa ketane ea ho qetela ea N ho ea ho C” e rarolla bothata ba lintlha. "Chemistri ea tokollo ea linker ha e ngotsoe" e supa bothata bo sa rarolloang ba boitsebahatso. Ha ho polelo e 'ngoe e bontšang hore na pial e ka thōko e hlile e na le eng.
Lipotso tse botsoang khafetsa
Na peptide synthesis kamehla e tsoela pele ho N ho C? Che. Phetolelo ea Ribosomal e etsa joalo, ha SPPS e tloaelehileng hangata e bokana ho tloha masalla a C-terminal ho leba Nterminus. Maano a likarolo tsa lik'hemik'hale a hloka tlhaloso ea tsela ea bona.
Na ke lokela ho khutlisa tatellano ha ke odara SPPS e tloaelehileng? Che. Kenya tatelano ea ho qetela kopanong e lumellanoeng ea N-to-C. Sehlopha sa synthesis se fetolela sepheo seo ho leano la kopano ea ts'ebetso.
Na mass spectrometry e ka paka hore tatellano e nepahetse? Boima bo sa fetoheng bo le bong bo ke ke ba khetholla li-isomer tsa tatelano tse nang le sebopeho se ts'oanang. Litekanyo tse loketseng tsa tatellano li ka fana ka bopaki bo eketsehileng, ho itšetlehile ka sepheo le mokhoa.
Ke eng eo laboratori e 'ngoe e lokelang ho e fumana pele? Tlhaloso e felletseng ea sepheo le 'mapa oa litsela o ngotsoeng ka ho hlaka. Tsena li theha molek'hule e reriloeng le moelelo oa rekoto ea ts'ebetso pele liphetho tsa tlhahlobo li hlalosoa.
