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如何储存多肽?
对于多肽的长期储存,我们建议将多肽作为固体粉末储存,因为未加工粉末状态的多肽可以储存在 -20 °C 或更低的温度下,以尽量减少降解。我们还建议每两年对定制的多肽进行一次纯度复检。
2.溶液中的多肽 溶液中的多肽稳定性较差,容易降解。用于溶解多肽的水溶液应无菌、纯净。 在溶液中,一定量的多肽可能会降解,这取决于序列中存在的氨基酸。
下面是几个例子:
- 由于氧化作用,含有蛋氨酸、半胱氨酸或色氨酸残基的肽在溶液中的储存时间有限。这些肽应溶解在无氧溶剂中。
- 谷氨酰胺和天冬酰胺可分别脱酰胺为谷氨酸和天冬氨酸。 - 半胱氨酸可发生氧化环化,形成 Cys-Cys 二硫键(可形成二硫键内或二硫键间)。
- 带电荷的残基(Asp、Glu、Lys、Arg、His)具有吸湿性(从空气中的水分中吸水),很容易形成粘稠的透明油状物,这种物理变化可能不会影响肽的特性。
建议首先冻干此类多肽以去除微量水分,用氮气脱气以确保小瓶中没有水蒸气,然后迅速盖上盖子。
为防止反复冻融造成损坏,我们建议用户只溶解当前实验所需的多肽量。多余的溶液应储存在 ≥ -20 °C 的温度下,直到需要时再取出。
避免潮湿 由于湿度会大大降低多肽的长期稳定性,我们建议多肽在打开小瓶前应在干燥器中平衡至室温。多肽分装后,用无水氮轻轻吹扫试管中剩余的多肽,盖上容器盖,用密封膜密封,并保存在 -20 °C 下。
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常见问题
那个猪肉巴尼,我这个老混蛋只搞砸了一英镑,英国女王的小伙子玩得很开心,一杯焦糖,真是的。
冻干多肽
为了长期储存多肽,我们建议将多肽作为固体粉末储存。冻干多肽可保存在 -20 °C 或更低的温度下,几乎不会发生降解。建议客户自 QC 发布之日起每两年重新检查一次定制的多肽。
溶液中的多肽
溶液中的多肽稳定性较差,容易降解。 用于溶解多肽的水溶液应无菌并经过纯化。
在溶液中,根据序列中氨基酸的不同,部分肽可能会发生降解。 以下是其中的几个例子:
- 由于氧化作用,含有蛋氨酸、半胱氨酸或色氨酸残基的肽在溶液中的储存时间有限。这些肽应溶解在无氧溶剂中。
- 谷氨酰胺和天冬酰胺可分别脱氨成 Glu 和 Asp。
- 半胱氨酸可发生氧化环化作用,形成 Cys-Cys 二硫桥(可形成内部或之间的二硫桥)。
- 带电残基(Asp、Glu、Lys、Arg、His)具有吸湿性(从空气中的水分中吸水),很容易形成粘稠的清油。 这种物理变化可能不会影响肽的特性。 建议首先冻干此类多肽以去除微量水分,用 N2 除气以确保小瓶中没有水蒸气,然后迅速盖上瓶盖。
为防止反复冻融循环造成任何损坏,我们建议用户只溶解当前实验所需的多肽量。 多余的溶液应储存在 ≥ -20 oC 的温度下,直到需要时再取出。
避免潮湿
由于湿气会大大降低多肽的长期稳定性,我们建议在打开小瓶之前,先将多肽放在干燥器中平衡至室温。 多肽分装完毕后,应使用无水氮轻轻吹扫试管中剩余的多肽,重新盖上容器盖,用保鲜膜密封,并保存在 -20 °C 温度下。
不同多肽的溶解特性差异很大。Ala、Cys、Ile、Leu、Met、Phe 和 Val 等残基会增加多肽在水溶液中的疏水性和溶解性,因此建议客户在定制多肽时遵守以下准则。
溶解特性
肽的溶解度在很大程度上取决于氨基酸序列。自然界中的疏水性多肽(A、F、G、V、L、I、M、W、P 的倾向性较高)需要有机溶剂才能溶解。酸性肽(肽序列中 D、E 的高倾向性)需要碱性水缓冲溶液才能溶解,而碱性肽(K、H 和 R 的高倾向性)需要酸性水缓冲溶液才能溶解。
溶剂的选择
考虑到检测的局限性,我们建议使用以下准则来确定溶解多肽的最佳溶剂
疏水性肽
重组疏水性多肽时,加入 100 µL 的二甲基亚砜(DMSO)并超声,直至形成均匀的溶液。然后,加入所选的缓冲液,形成 1 mg/mL 的溶液(肽的浓度越高,需要的二甲基亚砜量越多)。
亲水(酸性)肽
重组酸性多肽时,在 1 毫克多肽中加入 100 微升 1% NH4OH,然后涡旋。 形成透明溶液后,加入所选缓冲液,形成 1 毫克/毫升的溶液。
亲水(碱性)肽
重组碱性多肽时,在 1 毫克多肽中加入蒸馏水并涡旋。
使用和储存
冲调好的多肽可在 -20°C 下冷冻保存一段时间,但建议制备多个等分试样,以避免多次冻融循环。如果多肽要在 -20 oC 长期保存,我们建议将所有等分溶液冻干。
具有聚集倾向的肽
对于因含有多个半胱氨酸而容易聚集的多肽,我们建议在脱气溶液和/或酸性条件下溶解。
此外,某些类型的肽在溶解后容易形成二级和三级结构。 我们建议首先将这些肽溶解在 HFIP(六氟异丙醇)等溶剂中,然后用氮气流蒸发。 HFIP 有助于打破氢键网络,从而有助于形成二级和三级结构。
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