Azịza ngwa ngwa
Atụmatụ enzymatic ligation kwesịrị ịmalite site na eserese nke njikọ na ihe fọdụrụ na ngwaahịa ahụ.. Aha enzyme na-abịa nke abụọ. Ihe na-akpali akpali nwere ike ime…
Enzymatic Peptide Synthesis - Nkọwapụta oru ngo maka Njikọta kpọmkwem
Peptides Ghk Cu Ngwọta Peptide Atụmatụ enzymatic ligation kwesịrị ịmalite site na eserese nke njikọ na ihe fọdụrụ na ngwaahịa ahụ.. Aha enzyme na-abịa nke abụọ. Ihe mkpali nwere ike isonyere ndị mmekọ dị nke ọma mgbe ọ na-ahapụ njikọ na-agbanwe nnwale ahụ. The bara uru ajụjụ bụ ma ya substrate chọrọ, njedebe ikpeazụ na nkewa mgbada ala niile dabara na molekul e bu n'obi.
Maka ọtụtụ ọrụ, ntụnyere bara uru bụ ligation na-eme ka enzyme na-aga n'ihu na ụzọ njikọ kemịkalụ. Ha abụọ nwere ike ịbanye n'iberibe ndị akwadoro, na ha abụọ dabere na ihe owuwu dị na njedebe nzaghachi. Ụzọ kachasị mma bụ nke nwere ike ịnye ma nyochaa ngwaahịa achọrọ n'okpuru ọnọdụ dakọtara.
Ntụnyere ebe a metụtara iberibe nyocha akwadoro na njikọ ikpeazụ ha. Atụmatụ ndị a na-arụ ọrụ bụ ihe atụ; ha na-akọwa ihe ha ga-eguzobe tupu ha enye onye ọkwọ ụgbọ elu iwu, kama ibu amụma mkpụrụ ebumnuche ọhụrụ ma ọ bụ dee ọnọdụ mmeghachi omume.
Okwu dị iche, nhazi, na ligation
Okwu nchikota na-eme mbido ntụgharị asụsụ ma ọ bụ ngwakọta site na ụzọ ribosomal. Mmụba yinye Ribosomal bụ N ruo C. Nhazi wee guzobe oke ndị tozuru oke ma ọ bụ njedebe reactive achọrọ maka ọrụ ọzọ. Enzymatic ligation bụ nzọụkwụ dị iche na-emepụta njikọ na ekwesịghị inwe mgbagwoju anya na nkwupụta n'onwe ya.
Nonribosomal peptide biosynthesis na-eji sistemu enzyme pụrụ iche ma bụrụ ụdị ọzọ dị iche. Eziokwu ahụ bụ na enzyme nwere ike ịmepụta njikọ peptide apụtaghị na ọrụ na-eji ụzọ peptide synthetase na-abụghị nke na-arụ ọrụ.. Kpọọ aha mgbanwe mgbanwe na ihe na-akpali akpali.
Usoro ọrụ ederede bara uru bụ: kpọmkwem precursor ma ọ bụ sịntetik iberibe → nkwadebe nke mkpụrụ okwu ọnụ achọrọ → nkwenye nke njirimara iberibe → ligation ma ọ bụ cyclization → mwepụ nke ihe na-emeghị eme na ihe na-akpali akpali dị ka achọrọ → nkwenye nke ngwaahịa tozuru okè.. Ọ bụrụ na egosipụtara otu iberibe, nhazi ya na-aga n'ihu na-eto eto bụ n'ihu ọnụ ụzọ ligation.
Ụzọ mkpirisi kemịkalụ nwere mgbagha yiri ya: Iberibe akọwapụtara → termini reactive kwesịrị ekwesị → chemical ligation → mgbanwe ọ bụla achọrọ na-esote → ịdị ọcha → nkwenye nhazi na arụ ọrụ. Ekwesịrị iji ụzọ ahụ tụnyere ngwaahịa ikpeazụ anabatara, Ọ bụghị n'ebe mgbama mmeghachi omume pụtara na mbụ.
Tulee ihe achọrọ njiri mara ya na nhazi ebumnuche
| Ụzọ | Ihe ụzọ chọrọ | Mgbe ọ nwere ike dabara | Kedu ihe a ga-enyocha |
|---|---|---|---|
| Ntugharị n'usoro n'usoro | Motif njirimara dakọtara na onye mmekọ nucleophilic maka sistemụ ụdị ahọpụtara | Mgbakwụnye saịtị akọwapụtara mgbe anabatara usoro njikọ achọrọ | Ịnweta nnabata-saịtị, usoro ngwaahịa, ngwaahịa asọmpi, na mwepụ nke ihe ndị fọdụrụnụ |
| Asx-kpọmkwem ligase dị ka butelase 1 | Nchọpụta mkpụrụ akụ dabara adaba yana usoro nsonye ọnụ | ahọpụtara cyclization ma ọ bụ intermolecular ligation atụmatụ dakọtara na enzyme | Ndakọrịta mkpụrụ nke ebumnuche na ihe akaebe maka njikọ echere |
| Ngwakọta kemịkalụ ala | N'ụdị oge gboo ya, peptide thioester na onye mmekọ cysteine N-terminal | Iberibe na-ejikọta mgbe nkwụsịtụ na nkwadebe ibe dakọtara | Ntinye njedebe dị iche iche, njirimara saịtị ligation, mmeghachi omume akụkụ, na mgbanwe ọ bụla e mechara nhazi |
N'ime Guimaraes na ndị ọrụ ibe 'ụdị-ịkpọ aha protocol, nnabata nke motif LPXTG jikọtara ya na onye mmekọ oligoglycine kwesịrị ekwesị. Usoro bụ a Capsules nke peptide mgbochi imewe kemịkal, ọ bụghị mkpado nke enwere ike iche na ọ ga-apụ n'anya. See ihe mbido, oke oke na njigide njikọ dị iche iche ka usoro mgbakwunye bara uru ghara ịghọ mgbanwe akpọpụtaghị ọkwa na ebumnuche..
Dee ngwaahịa karịa naanị ebumnuche njirimara
Maka atụmatụ ụdị ụdị echiche dakọtara, dee onye nyere onyinye ka protein-LPETG-ọdụ na onye nabata dị ka GGG-onye nta akụkọ. Mkpochapu na oke threonine-glycine na mgbakwunye nke onye na-anabata ya ga-ahapụ protein-LPET-GGG-onye nta akụkọ.. Ejidedeghị ọdụ onye nyere onyinye, ebe ihe fọdụrụ glycine nke nnabata bụ. Nke a schematics na-akọwa njikọ; ọ naghị egosi na enwere ike ịnweta mkpụrụ osisi akwadoro ma ọ bụ na-emeghachi omume.
Ugbu a tụlee ngwaahịa ahụ na ajụjụ nke ndu. Enwere ike ịnakwere onye nta akụkọ edoro anya na elu mmekọrịta n'otu nyocha, ebe ihe ndị ọzọ fọdụrụnụ nwere ike imebi ọmụmụ ihe kpọmkwem njedebe eke. Kpebie nhọrọ sayensị ahụ tupu ịkọwa njikọ na-aga nke ọma dị ka ihe ịga nke ọma maka ọrụ ahụ. Ọ bụrụ na enweghị njikọ anabataghị, dekọọ nke ahụ dị ka mmachi nhọrọ-ụzọ.
Nguyen na ndị ọrụ ibe butelase izizi 1 mụọ ihe na-egosipụta cyclization dabere na Asx na ligation na mkpụrụ ahọpụtara. Ọ na-enye ihe mere a ga-eji nyochaa nhazi dakọtara, karịa nkwa maka peptide enweghị njikọ. Ezipụta ihe njirimara ọnụ ọnụ na-eri na nke fọdụrụ; nkọwa ọrụ sara mbara nke enzyme enweghị ike dochie akaụntụ ọkwa ngwaahịa ahụ.
Dawson na ndị ọrụ ibe ọmụmụ ligation kemịkalụ na-enye comparator kemịkalụ dabere na iberibe akwadoro nke ọma. Ọ bụ njikọ amide ikpeazụ ka akọwara dị ka nwa amaala. Mpịakọta na oxidation bụ ọrụ dị iche iche na ngosipụta, Ya mere, e kwesịghị igosi nhazi njikọ ziri ezi dị ka ihe akaebe na ebumnuche ọhụrụ enweelarị usoro apịaji a chọrọ. Ụlọ ahịa Peptides
N'ofe ụzọ atọ ahụ, tụlee solubility na nnweta nke n'ezie reacting iberibe. Usoro dakọtara na usoro nwere ike ka siri ike iji ma ọ bụrụ na ihe akwadoro anọghị n'okpuru ọnọdụ atụpụtara.. Enwere ike ime njem gụnyere nchacha na mgbake yana nhazi njikọ.
Tulee ntụgharị na ngwaahịa nwere ike nwetaghachi
Na a hypothetical pilot, ihe ekenyere 100 nmol nke onye mmekọ mmachi na-abanye na mmeghachi omume. A na-ekenye usoro ọnụọgụgụ dabara adaba 80 nmol gaa na conjugate a chọrọ tupu kewapụ ya, mana naanị 45 a na-enweta nmol na ọdọ mmiri ikpeazụ anabatara. Ntughari na ngwaahịa ekenyere bụ 80% na ndabere ntinye ahụ; mgbake dịpụrụ adịpụ bụ 45%; mgbake nke ngwaahịa ugbua kpụrụ bụ 45/80, ma ọ bụ gbasara 56%. Ọnụ ego ndị a echepụtara na-akọwa njedebe atọ dị iche iche.
Ụzọ ntụgharị dị elu nwere ike ịnọgide na-adị mma ma ọ bụrụ na ngwaahịa na onye na-ede akụkọ na-adịghị mma siri ike ikewa. N'aka nke ọzọ, Ntugharị mmeghachi omume na-adịghị mma na ịdị ọcha dị mma kwesịrị iduzi mmepe n'ihu ngosipụta mkpụrụ okwu ma ọ bụ nguzobe njikọ. Tụọ ọnụọgụ molekụla atụnyere n'ọkwa ndị dabara adaba; mpaghara ọnụ ọgụgụ kacha elu sitere na matrices dị iche iche anaghị enye ọnụọgụ na mgbako a ozugbo.
Mpempe akwụkwọ nwere ike imeju maka ọrụ a kapịrị ọnụ njikọ
Atumatu ntule. Otu otu chọrọ itinye onye nta akụkọ peptide sịntetik na mpaghara C-terminal nke protein nyocha gosipụtara. Ọmụmụ sayensị na-enye ohere usoro njikọ akọwapụtara na Peptides Ghk Cu ọnọdụ ahụ, mana otu ahụ ahọpụtabeghị ya. Mgbanwe a na-eme ka ligation na-eme ka enzyme na-eme ka ọ dị mma iji tụnyere ụzọ kemịkalụ kwesịrị ekwesị; Ọ naghị egosi na enzyme ọ bụla ga-arụ ọrụ.
Mezue ubi ndị a tupu ịrịọ nkwado ụzọ. Dochie ederede ihe atụ na ozi ọrụ n'ezie ma jigide ihe edozibeghị kama ịkọ nkọ.
| Ogige dị nkenke | Ntinye oru ngo nwere ike imeju | Ihe mere otu ahụ ji chọọ ya |
|---|---|---|
| Ebumnuche sayensị | [Nnwale na nkwubi okwu ahụ ga-akwadorịrị] | Na-akọwa mgbanwe nhazi na njikwa ndị anabatara |
| Ọdịdị molekụla ikpeazụ | [Protein na peptide usoro, njedebe, nhazi, na ntinye akwụkwọ akụkọ] | Na-egbochi ụzọ mara mma ka ọ ghara ịdị jụụ ịgbanwe ebumnuche |
| Mgbanwe nkwụsị | [Kpọmkwem nkwekọrịta achọrọ, ma ọ bụ ihe fọdụrụ njikọ anabatara nke ọma] | Na-ekpebi ma enwere ike ịnabata chọrọ nnabata enzyme |
| Iberibe dị | [Isi mmalite, nhazi steeti, ngwụcha otu, ndabere ego, na ihe akaebe nyocha] | Na-egosi ma ihe ndị dị mkpa dị n'ezie |
| Mmachi ndakọrịta | [Amaara oke nke mpịachi, aha, disulfides, solubility, na njikwa] | Na-achọpụta ọnọdụ ma ọ bụ mgbanwe chọrọ nyocha |
| Nbufe ikpeazụ | [Ego ebumnuche achọrọ, nhazi, aliquots, ihe ndekọ, na ezubere iji] | Na-edozi nhota okwu gburugburu otu ebe njedebe |
| Ihe akaebe nnabata | [njirimara njikọ, ihe fọdụrụnụ, ihe owuwu dị mkpa, na njikwa ọrụ] | Na-akọwapụta ihe ga-agụta dị ka ọrụ na-aga nke ọma |
Maka oru echiche a, sortase na-aghọ onye ndoro-ndoro anya ma ọ bụrụ na nkwụsị nke enwetara nnabata kwesịrị ekwesị na-anabata yana ịnweta ya. Ọ bụrụ na ajụjụ sayensị chọrọ kpọmkwem njikọ nke obodo na ụzọ enzyme a chọrọ ga-agbanwe, otu ahụ kwesịrị ịtụgharị uche n'ụzọ ahụ ma ọ bụ chọpụta ụzọ ọzọ ziri ezi. O kwesịghị iji nwayọ kọwapụta ebumnuche ka ọ dabara na ihe na-akpali akpali.
N'otu aka ahụ, Ụzọ kemịkalụ chọrọ thioester ma ọ bụ njedebe ọzọ na-emeghachi omume ga-agụnye nkwadebe na njirimara ya. Tụnyere naanị nzọụkwụ ikpeazụ ligation ga-ahapụ ọrụ nwere ike ikpebi ihe ga-ekwe omume, ọnụ ahịa, na nhazi oge.
Jụọ ajụjụ ise na-ekpughe ezi mkpebi ụzọ
- Kedu njikọ kpọmkwem na usoro fọdụrụnụ ga-adị na nkwụsịtụ mgbe usoro nhazi ọ bụla gasịrị?
- Kedu njirimara nke iberibe anyị n'ezie na-akwado ndakọrịta na usoro enzyme ma ọ bụ ụzọ kemịkal a chọrọ?
- Kedu ka a ga-esi amata ngwaahịa a chọrọ na ngwaahịa hydrolysis, iberibe iberibe, na njikọ ọzọ?
- Kedu ka ọ ga-esi mee, inyeaka reagent, na oke ihe mmekọ ga-ewepụ ma ọ bụ tụọ ebe ọ dị mkpa na nyocha ahụ?
- Kedu nsonaazụ ga-eme ka ndị otu ahụ gbanwee ụzọ kama ikwugharị otu ọnọdụ ahụ?
Ajụjụ ndị a na-eme ka ejighị n'aka mee ihe. Ọ bụrụ na edozighi njirimara mkpụrụ osisi, nzọụkwụ ọzọ bụ ọmụmụ ndakọrịta ezubere iche. Ọ bụrụ na akwado nkwado mana ịdị ọcha siri ike, nsogbu bụ nkewa nke ala. Ọ bụrụ na njikọ ahụ ziri ezi na kemịkalụ mana ọrụ na-agbanwe, Nchọpụta kwesịrị inyocha structural na assay pụta kama iche na ligation dara. Ụlọ nyocha ọrụ mgbanwe Peptide
Nye onye na-anya ụgbọelu otu mkpebi ka ọ dozie
Kewapụ ule njirimara na ule ikpeazụ-conjugate ọrụ. Onye na-anya ụgbọelu nke mbụ nwere ike ịjụ ma ihe ndị ahụ n'ezie na-emepụta njikọ achọrọ na profaịlụ ngwaahịa enwere ike ịkọwa. Ntụnyere kwesịrị ekwesị nwere ike ịgụnye ndị mmekọ dị iche na ngwakọta na-enweghị enzyme, na nyocha nwere ike ịmata ọdịiche mmalite ihe site na ngwaahịa. Azịza sitere na ngwakọta agwakọta naanị nwere ike chehie ụzọ dị ka mgbakwunye covalent.
Ọ bụrụ na edozie ajụjụ ahụ mana conjugate dịpụrụ adịpụ na-akpa àgwà dị iche, gaa na njikwa na-akpa oke mmetụta njikọ, mmetụta onye nta akụkọ na omume nne na nna-protein. Ịmeghachi nnwale njirimara agaghị aza ajụjụ ndị ahụ ọzọ. Kwuo ihe nchọta ga-akwụsị ụzọ a: usoro ejigidere na-adịghị anabata, Njikọta ọzọ edozibeghị, ma ọ bụ nkewa nke na-enweghị ike ibuga ihe nyocha ahụ chọrọ.
Jiri ihe akaebe nọọrọ onwe ya maka topology mgbe achọrọ ịgba ígwè. Otu uka na-adaba na mfu na-eme njikọ anaghị n'onwe ya guzobe nke atọm ejikọrọ. Atụmatụ nyocha kwesịrị ileba anya mgbanaka ma ọ bụ njikọ echere na ya na ụzọ ndị ọzọ nwere ike ịkwenye.
Tinye njikwa ọrụ kwesịrị ekwesị, dị ka nne na nna na-agbanwebeghị, onye nta akụkọ dị mkpa ma ọ bụ njikwa mmekọ, na ntụnyere na-anwale ma njikọ ahụ na-agbanwe nyocha. Njirimara kemịkalụ na ọrụ metụtara mana ajụjụ nnabata dị iche. Njikọta na-arụ ọrụ anaghị arụkọ ọrụ ozugbo, na conjugate homogeneous adịghị adabara ozugbo maka nkọwa ndu.
Zipu nkenke emecha ya na ndekọ isi mmalite maka iberibe abụọ ahụ. Rịọ maka atụmatụ ụzọ na-akpọ echiche, akwadoro ihe akaebe, na ihe nkwụsị. Nke ahụ na-enye ndị ọrụ aka otu nsogbu nsogbu iji dozie ma na-enye ụlọ nyocha ahụ nsonaazụ ọ nwere ike nyochaa.
Ajụjụ a na-ajụkarị
Enzymatic ligation bụ otu ihe ahụ dị ka okwu recombinant? Mba. Nkwupụta na-emepụta ihe mmalite ma ọ bụ protein site na ntụgharị asụsụ; ligation na-ejikọta substrates kwesịrị ekwesị na mgbanwe dị iche. Otu oru ngo nwere ike iji ha abụọ.
Ụzọ enzyme na-ahọrọ mgbe niile karịa ụzọ kemịkal? Nhọrọ nke dabere na ihe mkpali, mkpụrụ, na ọnọdụ. Nchọpụta enzyme nwere ike ịba uru, ma motifs achọrọ, mmeghachi omume asọmpi, na ngwaahịa ikpeazụ ka chọrọ nkwenye.
Gịnị ma ọ bụrụ na ihe na-akpali akpali na-arụ ọrụ ma hapụ ihe ndị na-achọghị? Nke ahụ bụ mgbanwe na-aga nke ọma nke imewe na-ezighị ezi. Nyochaa njikọ anabatara ma ọ bụ ụzọ tupu ịtụkwuo ihe; nsonaazụ mmeghachi omume anaghị enye ikike ịgbanwe ebumnuche sayensị.
Kedu ihe akaebe kacha mkpa maka ebumnuche cyclic? Ihe akaebe maka njikọta echere, ya na njirimara, mkpa adịghị, ego, na ọrụ. Otu oke na-adakọghị ọnụ anaghị ewepụta topology mgbanaka.
