Ke Hobane'ng ha "Mahala ea Liphoofolo" e se e sa Emisa ka Botlolong
Mantsoe ao batho ba a sebelisang ka ho fapanyetsana ha a tšoane, 'me phapang ke moo kotsi ea teko e ipatang teng.
An ntle le phoofolo (kapa karolo ya phoofolo) Sehlahisoa ha se na lisebelisoa tsa mantlha tse tsoang liseleng tsa liphoofolo 'me ha se entsoe ho sebelisoa likarolo tsa liphoofolo. A xeno-mahala sehlahiswa se qoba dintho tsa diphoofolo tseo e seng tsa motho empa se ntse se ka sebedisa dikarolo tse nhilweng ke batho kapa tse kopanyang batho. A e se nang serum sehlahisoa se siea feela serum. Feela a e hlalosoang ka dikhemikhale medium e hlalosa karolo e 'ngoe le e' ngoe le mahloriso a eona hantle - ha ho serum, ha ho na li-hydrolysate tse sa hlalosoang, ha ho metsoako ea likokoana-hloko e bulehileng.
Likarolo tsena ke tsa bohlokoa hobane li etsa qeto ea hore na ho na le phapang e kae e sa laoleheng. Tataiso ea NC3RS mabapi le mecha ea litaba ea setso e se nang liphoofolo e hlokomela hore litlatsetso tse nang le likarolo tse hlalositsoeng ka botlalo li na le kotsi e tlase ea litlamorao tse sa reroang tsa liteko le phapang ea batch-to-batch.. Kakaretso ea ATCC ea mecha ea litaba e se nang karolo ea liphoofolo e hlahisa ntlha yona eo: lihlahisoa tsa liphoofolo li hlahisa phapang lipakeng tsa lihlopha, e thatafatsang maemo le diphetho tse ka ikatisang.
Tlhokomeliso e tšepahalang, eo bafani ba thepa ba ithaopang ka seoelo, ke hore “ho se be le liphoofolo” ha ho “hlahisoe ka lik’hemik’hale” ka bohona. Sebopeho se ka se be le liphoofolo empa se ntse se itšetlehile ka likaroloana tsa tlhaho tse nchafalitsoeng kapa tse ntlafalitsoeng tse fapaneng ka lotho.. Ha sepheo ke defensible cross-laboratory data, bar ke tlhaloso ea lik'hemik'hale, eseng feela ho ba sieo ha FBS.
Key Takeaway: Botsa hore na thepa e mahareng kapa e tala e hlalosoa ka lik'hemik'hale, eseng feela ntle le phoofolo. Tlhaloso - ho tseba karolo e 'ngoe le e' ngoe le mohopolo oa eona - ke hona ho u rekelang ho ikatisa.
Kamoo Phapang ea Raw-Material e Senyang Peptide Bioassay Reproducibility
Tlhahlobo ea lisele bakeng sa li-peptide e na le maikutlo a sa tloaelehang tikolohong ea eona. Phello ea peptide e baloa ka ho kopanela le receptor, phetisetso ea lets'oao, le bophelo bo botle ba lisele, kaofela ha tsona li arabela matrix a likokoana-hloko tse li potolohileng.
Serum ea fetal bovine ke eona e bakang molato oa archetypal. Lotho e 'ngoe le e 'ngoe e tšela mali a tsoang sehlopheng se itseng sa masea a bokeletsoeng ka nako le sebaka se itseng, kahoo litaba tsa eona tsa lintlha tsa kholo, lihomone, lipids, le liprotheine tse tlamang li fetoha lipakeng tsa lihlopha. Ho tlhahlobo ea interlaboratory ea in vitro bioassays, liprothokholo tse tloaelehileng tse nang le maemo a hlalositsoeng li fane ka liphetho tse ka hlahisoang ka har'a li-laboratory - hantle hobane bangoli ba tlositse semelo sa baeloji se sa laoleheng seo ka tsela e 'ngoe se senyang papiso..
Peptide Synthesis Mekhoa eo ho fapana ha FBS e senyang data ea tlhahlobo ke ea mochini, eseng anecdotal:
-
Boima ba li-receptor le phenotype drift. Lintho tse feto-fetohang tsa kholo li lula li le bohlokoa kapa li hatella litsela tsa matšoao, ho fetola palo ea li-receptor tse sebetsang sebakeng sa sele pele tlhahlobo e qala.
-
Maqhubu a feto-fetohang. Lotho tse ling tsa serum li tšehetsa kholo e matla, ho atolosa fensetere ea pontšo; ba bang ba e hatella. Sena se tsamaisa likhakanyo tsa EC50/IC50 le matla a bonahalang le ha peptide ka boeona e sa fetohe..
-
Ho fumaneha ha mahala-peptide ho fetotsoe. Liprotheine tsa serum li tlama li-peptide ka likhato tse fapaneng ho pholletsa le lotho, ho fetola karoloana ea mahala e fumanehang ho receptor le ho batalatsa li-curve tsa karabelo ea lethal dose.
-
Lerata la bokamorao. Liprotheine tse sa hlalosoang, lipids, lihomone, le lits'ila tse silafatsang li phahamisa ts'ebetso ea baqolotsi ba litaba tse sa tobang le ho pata litlamorao tse nyane tsa peptide.
Mokhoa oa ho hloleha ha o tsejoe: lab e le 'ngoe e tiisa tlhahlobo ho lotho e le' ngoe ea serum, lab ea bobeli e sebelisa e 'ngoe, 'me ha ho phetiso ea likhakanyo tsa lab kapa meeli ea kamohelo. Lefats'eng la data e ka kopitsoang ea peptide, sebaka se seng le se seng se tsamaisitse mokhoa o fapaneng ka nepo.
Tšilafalo E Eketsa Motsotsoana, Mokhoa o ikhethileng oa ho hloleha
Hofeta ho feto-fetoha, li-reagents tse entsoeng ke liphoofolo li na le litšila tse senyang ka ho toba liteko tsa peptide. BSA ke mohlala oa khale. E sebelisoa e le sesebelisoa sa ho thibela le ho tsamaisa thepa, bovine serum albumin ka boeona e ka sebelisana ka mokhoa o sa tobang le li-peptide le libaka tsa tlhahlobo.
Leraba le phatlalalitsoeng tlhahlobong ea li-anti-peptide li bonts'itse hore BSA e silafalitsoeng ke li-immunoglobulins e bakile maikutlo a fosahetseng le ho pata lets'oao la 'nete la anti-peptide - ho hlapolla kapa ho thibela ka har'a buffer e nang le BSA e khopamisitse ho lemoha peptide e thehiloeng ho ELISA. Endotoxin ke moferefere o mong o khutsitseng. Bacterial lipopolysaccharide e etsa hore motho a tsoe ho itšireletsa mafung le khatello ea maikutlo meleng e mengata ea lisele, kahoo endotoxin-hitchhiking peptide e ka hlahisa ntho e sa tsitsang, ho bala ho sa khethehe ho sa amaneng le boitlamo ba li-receptor.
Bakeng sa letšoao le tlaase, Mechane-sensitive system - liteko tse tlamang li-receptor, potency bioassays, moqolotsi oa litaba - litšila tsena li ka laola tekanyo. Ho bala ho haufi ke ho sebelisana le ligand-receptor, ho senya le ho feta tšitiso.
Ke Hobane'ng ha Taolo e Fallisoa ho ea ho Inputs
Haeba tšilafalo le phapang ke likotsi, e ka ba ho utloahalang ho leka ho li hlahloba ka peptide e felileng. Boiphihlelo bo ka holimo-limo bo bua se fapaneng: tlhahlobo ea sehlahisoa sa ho qetela e ke ke ea lefella ka botlalo ho se tsitse ha thepa ea ho qala.
Peptide e bokelloa ho tsoa libolokong tsa moaho tsa amino-acid. Haeba liboloko tseo tsa mohaho li fapana ka tšimoloho, k'hemistri ea tšireletso, kapa boemo bo sa hloekang, ketane e feliloeng e rua ho fapana. Monahano o tšoanang o fetela ho li-resin, ho kopanya li-reagents, li-cocktails tse monate, le mecha ea litaba le li-enzyme tse sebelisoang ho biosynthesis le litekong tse tlase. Tšimoloho ea lintho tse tala e ngotsoeng - ho kenyelletsa le ho ba sieo ha phoofolo e nkiloeng - e theko e tlaase, e tshepehang ho feta, le ho sireletsa haholoanyane ho laola mohloling ho feta ho lelekisa lotho e 'ngoe le e 'ngoe e lokolotsoeng.
Ke ka lebaka lena Tataiso ea EMA mabapi le nts'etsopele le tlhahiso ea li-peptide tsa maiketsetso e eletsa ka ho hlaka hore liasiti tsa liamino tsa tlhaho tsa motho kapa tsa liphoofolo li qojoe moo ho khonehang. Lebaka le leng ke la taolo - Tekolo ea kotsi ea TSE/BSE bakeng sa thepa e 'ngoe le e 'ngoe e tala e kenya maano a ho laola API a maiketsetso a peptide - mme karolo e 'ngoe ea saense: kenyeletso ya tse tsebahalang, Sebopeho se hlalosoang ke se kentsoeng se ke keng sa kenya lerata la batch-to-batch tlase ho metsi.
Bakeng sa Keletso: Tšoara tlhahiso ea lintho tse tala e le kenyelletso ea moralo, eseng teko ea tokollo. Haeba u ka ngola amino-acid, resin, mecha ea litaba, le ketane ea phepelo ea reagent joalo ka ha e hlalositsoe ebile e se na liphoofolo, o tlosa sehlopha sohle sa ho feto-fetoha pele peptide e le 'ngoe e etsoa.
Litokomane Tse Etsang Hore Data e Sireletsehe Ho Felletse ka Lilaboratori
Bareki ha ba romelle li-peptide lipakeng tsa laborateng feela. Ha mofani a fetisetsa tlhahlobo ho tloha sebakeng se seng ho ea ho se seng, kapa e hokahanya lintlha tsa tlhahlobo ea pele ho nts'etsopele ea pele ho kliniki, potso hase hore na liphello lia lumellana empa hore na li ka bontšoa hore li lumellana ka mabaka a tlas’a taolo ea rasaense.
Seo se hloka sephutheloana sa litokomane se fihlang ho feta setifikeiti sa leqephe le le leng. Ho taka ka moralo oa litokomane tsa boleng ba litšiea tse hlano bakeng sa li-peptide tsa lipatlisiso, Defensible cross-lab data e thehiloe:
-
Litlaleho tsa analytical tse khethehileng, e seng disetifikeiti tsa template — data e tala ya HPLC/HR-MS e kopantsweng ka botlalo, nete Li-Peptide tsa Synthetic litaba tsa peptide, le licheke tse setseng tsa solvent le elemental, kahoo profiles tse sa hloekang ke tsa 'nete ebile li ka bapisoa le batch.
-
Likakaretso tsa netefatso ea mekhoa e tsamaellana le mekhoa ea ICH Q2, ho netefatsa hore lits'ebetso tsa tlhahlobo ke tse ikhethang, linearity, nepahalo, le LOD/LOQ-e netefalitsoe.
-
Tšebeliso ea lintho tse tala, ho kenyelletsa bohloeki ba chiral, solvent, tšepe, le taolo ea endotoxin, kahoo phapang e ka amahanngoa le kenyelletso e tsejoang ho e-na le ho hoholeha ho sa hlalosoang.
-
Boemo ba botsitso le ho senyeha, kahoo sephetho sa teko ha se sothoe ke lotho e senyehileng e seng e sa emela tatellano e reriloeng.
-
Phetoho-taolo le litumellano tsa boleng, e le hore phetoho efe kapa efe ea ts'ebetso e ka sutumelletsang boemo bo sa hloekang kapa karo-karolelano ea likhakanyo e tšoauoa pele e fetola bioassay ka khutso..
Ka lehlakoreng la taolo, Ke Q7 e hloka lisebelisoa tse tala tsa API hore li hlahlojoe ka tlhahlobo kapa tlhahlobo ea mofani oa thepa ka ho nepahala ho tlalehiloeng, nakong eo Ke Q11 e sutumelletsa lifeme ho lokafatsa khetho ea ho qala bakeng sa lintho tsa maiketsetso tse kang li-peptide. Ka kopanelo tsena li etsa hore tlhahiso ea li-amino acid le lintho tse ling e be karolo ea pale ea boleng, eseng lintlha tsa theko.
Bakeng sa CRO, teko e sebetsang e bonolo: na u ka fa mohlahlobi sehlopha se bontšang moo thepa e 'ngoe le e 'ngoe e tala e tsoang teng, kamoo e mong le e mong a neng a tšoaneleha kateng, le hore na ke bopaki bofe ba tlhahlobo bo pakang lotho ke seo mokhoa o se bolelang? Haeba ho se joalo, "Reproducibility" eo moreki oa hau a e bolelang ke ketso ea tumelo.
Lethathamo la Litšoaneleho tsa Peptide CROs le Bareki ba tsona
Ha u le ka lehlakoreng la ho reka - ho khetha CRO ho fana ka li-peptide tse reretsoeng ho hlahlojoa ka lisele - pale e holimo e se nang liphoofolo le litokomane e lokela ho fetola tsela eo u tšoanelehang morekisi ka eona..
Qala ka ketane ea lintho tse tala. Na mofani oa thepa o sala morao liboloko tsa moaho tsa amino-acid, resin, li-enzyme, le mecha ea phatlalatso ho khutlela ho bahlahisi ba tšoanelehang? Na ba ka hlahisa litokomane tse se nang liphoofolo, e hlalosoang ka dikhemikhale, kapa boemo ba tlhahlobo ea kotsi ea TSE bakeng sa lintho tse kenang moo ho leng bohlokoa? Peptide e tla lula ka har'a bioassay e thehiloeng liseleng e hloka taolo e ngotsoeng ea endotoxin, eseng feela peresente ea bohloeki.
E 'ngoe, sheba sephutheloana sa tlhahlobo. Kopa ea sebele, setifikeiti se khethehileng haholo se nang le bopaki bo tala ba HPLC/MS ho fapana le template e hatisitsoeng ka kakaretso. Netefatsa hore mekhoa e netefalitsoe le hore litaba tsa net peptide lia tlalehoa, hobane ho etsa tlhahlobo ea bioassay ka boima ba phofo e kholo ho ka khelosa ka mokhoa o khutsitseng lipalo tsa ketsahalo..
Ebe khatello-teko phetoho taolo. Ha morekisi a chencha morekisi oa resin kapa a lokisa mohato oa ho kopanya, na u fumana lintlha tsa ho bapisa pele liphetho tsa hau tsa tlhahlobo li ameha? Morekisi ea sa khoneng ho hlalosa mokhoa ona ke morekisi eo sehlopha sa hae se latelang se ka fetolang fensetere ea hau ka khutso. Tlhahiso ea Peptide
Qetellong, lekanya lekhalo la baeloji le k'hemistri. Peptide CROs e fapana haholo eseng tabeng ea hore na ba ka lelefatsa ketane empa hore na ba utloisisa seo tlhahlobo ea receptor e tla se etsa ka thepa.. Morekisi ea tsebang k'hemistri ea lintho tse phelang le biology ea ho lemoha a ka lebella hore na ho na le litšila hokae., counterion/, kapa trace tšilafalo e tla hlakola 'malo o thehiloeng ho lisele - ho fapana le ho e fumana ho data ea hau.
Ho Tšoara Lisebelisoa tse tala e le Chelete ea Reproducibility
Bakeng sa baetsi ba peptide, motsamao ntle le phoofolo ha e sa le noto karolong ea mekhoa. Ke 'nete e sebetsang: seo o se kenyang motswakong, le hore na u e ngola ka nepo hakae, e etsa qeto ea hore na bioassay ea hau e tla tšoarella hammoho lilaboratoring, ho pholletsa le lihlopha, le ho pholletsa le tlhahlobo.
Molekane ea nkang tlhaloso ea lintho tse tala le litokomane tsa tlhahlobo e le lisebelisoa tsa moralo oa boemo ba pele - ho fapana le litifikeiti tsa morao-rao - ke molekane eo thepa ea hae e ka fanang ka tšireletso., liphetho tse fetisoang. Eo ke filosofi ea ts'ebetso ka morao ho MOL Changes, setsi se kopaneng sa peptide ea tloaelo le sethala sa lipatlisiso se etselitsoeng sena hantle: tloaelo ea peptide synthesis hore sekala ho tloha ho milligram screening ho tshebetso ntshetsopele ka bohloeki bo phahameng, taolo ea boemo bo tlase ba endotoxin, tšehelitsoe ke tlhahlobo ea peptide hore litokomane bohloeki, boitsebiso, nyopa, le endotoxin ka bongata.
Ha u khetha moo data ea tlhahlobo e sa tšepahaleng e ke keng ea pholoha ho hlahlojoa, tokiso e theko e tlaase ke ka seoelo e leng teko e betere qetellong. Ke lipeeletso tse betere, e ngotsoe hantle, qalong.
