Tlhahiso ea lihlahisoa ho Peptide Synthesis - Beha moeli oa ho leka-lekana ha lintho
Reka li-Peptides Royal Peptide Ho tlosa chai ho tsoa ho chai e tala ha ho lekanye sebopeho sa sehlahisoa. Boleng bo le bong bo ka hlalosa phofo e nang le letsoai, sepheo se seng se abetsoeng, 'me ea boraro ke karabelo ea sebui litlhōrōng tse khethiloeng tsa chromatographic. Mosebetsi oa pele ke ho khetholla bongata ba limolek'hule le moeli oa ts'ebetso ka morao ho nomoro ka 'ngoe. Ke hona feela moo lipalo li ka bolelang hore na sepheo se ile sa fumanoa hokae, moo e dulang teng le se esong ho lekanngwe.
Ho leka-lekana ho molemo ho khetholla liphetho tse 'nè: sepheo sa sehlahisoa se amohelehang, sepheo sa melapo e meng e lekantsoeng, lihlahisoa tse khethiloeng tsa phetoho le se setseng se sa rarolloang. Mekhahlelo ena e lebisa liqetong tse fapaneng tsa ntlafatso. Sepheo se ka khutlisoang karolong e hanoang ke potso ea karohano; phapang e khethiloeng ea tatellano e ka ba potso ea k'hemistri; masalla a sa hlalosoang qalong ke potso ea tekanyo le tlaleho.
Linomoro tse sebelisitsoeng ka tlase ke litekanyetso tsa thuto tse inahaneloang, eseng liphetho tsa liteko kapa ts'ebetso e tloaelehileng ea indasteri. Li bonolo ka boomo e le hore liphapang li ka hlahlojoa. Likabelo tsa 'nete li lokela ho kenyelletsa mefokolo ea mekhoa le ho se tsitse.
Bapisa mekhoa e meraro ea accounting moeling o ts'oanang oa ts'ebetso
Bakeng sa papiso e loketseng, hlalosa sehloho kapa sethala, sebopeho sa sepheo, motheo oa chelete o amehang, le ntlha eo boitsebiso bo bokelloang ka eona. Se ke oa bapisa phofo e tala ea tsela e le 'ngoe le sepheo se hloekisitsoeng sa tsela e' ngoe 'me u hlalose phapang e le k'hemistri feela.
| Molemo | Moedi | Maemo a sebetsang | Mokhoa oa ho netefatsa |
|---|---|---|---|
| Gross recovery mass e bonolo ebile e na le thuso bakeng sa ho sebetsana le litlaleho. | Ha se chai e lebeletsoeng ha metsi, letsoai, litšila, kapa likarolo tse setseng li kenya letsoho. | Ho bapisa likoleke tsa 'mele hafeela boemo ba bona ba mohlala le motheo li boletsoe ka ho hlaka. | Netefatsa boima ba 'mele, ditokiso tsa setshelo, boemo ba mohlala, le tlhahisoleseding ya tlhamo. |
| Chelete e abetsoeng e tšehetsa kotulo e ikhethileng le lipalo tsa ho khutlisa sepheo. | E itšetlehile ka mokhoa o nepahetseng oa palo le tlhaloso e hlakileng ea mefuta e fanoeng. | Ho bapisa sepheo se ts'oanang methating e hlalositsoeng ea ho kenya le ea tlhahiso. | Hlahloba teka-tekano, ho lokisetsa mohlala, boitsebiso, palo motheo, le ho hloka bonnete. |
| Ho leka-lekana ha stream-by-stream ho bontša hore na boitsebiso bo baloa hokae. | Melapo e sa lekanyetsoang le mefuta e sa abuoang e siea likheo; lekhalo ha le bitsoe ka sehlahisoa. | Ho batlisisa ts'ebetso e hlalositsoeng ka lintlha tse ngotsoeng, lihlahisoa, le sampole. | Lekanya melapo e amehang khafetsa, 'me u qobe lisampole tse bolokiloeng tse baloang habeli kapa likaroloana tse kopaneng. |
Bohloeki ba sebaka sa Chromatographic ke tlhaloso e 'ngoe ea bohlokoa, empa ha se tekanyo ea bone ea kotulo e fapanyetsanoang. E tlaleha karabelo ea detector e amanang e kenyellelitsoeng khokahanyong e boletsoeng tlasa mokhoa o boletsoeng. Likarolo tse fapaneng li ka ba le likarabo tse fapaneng, 'me lintho tse ling li ka 'na tsa se ke tsa bonoa kapa tsa kopanngoa.
Melanson le basebetsi-'moho le eena 'angiotensin II referense-material thuto kopanya mekhoa e mengata bakeng sa kabelo e hlalositsoeng ea bohloeki. E bontša hore na ke hobane'ng ha motheo oa chelete o lokela ho boleloa. Peresente e lekanyelitsoeng ea chromatographic e ke ke ea nkeloa sebaka bakeng sa karoloana ea boima e fanoeng hobane ka bobeli li hlaha e le liperesente..
Sebetsa ka lipalo tse inahaneloang tsa lihlahisoa tse tala le tse ikhethileng
Nka palo e hlalositsoeng ea theory ka ho hlaka ea 1.000 mmol le ka karolelano boima ba 'mele oa 1,000 g/mol bakeng sa peptide e sa nke lehlakore e boletsoeng. Tse tsamaellanang Tsohle ka Peptides theoretical target mass is 1,000 mg. Lekhalo lena ke mohopolo oa thuto; motsoako oa sebele o tlameha ho lokafatsa palo ea eona ea ho qala le motheo oa stoichiometric.
Pokello ea bokhopo e inahaneloang e boima 1,200 mg. Mosebetsi o loketseng oa palo o tiisa seo 35.0% boima ba 'mele bo fanoeng ke peptide e boletsoeng. Lithethefatsi tsa Peptide Ka hona, pokello e sa jeleng paate e na le 1,200 × 0.350 = 420 mg target, kapa 0.420 mmol. Kotulo ea eona ea sepheo e amanang le palo e boletsoeng ea theory ke 42.0%.
Ho letsetsa 1,200 mg crude collection "120% peptide chaie" e ka pata sebopeho sa eona. Karolelano ea boima bo feteletseng e feta 100% hobane pokello ha e nkoe e le sepheo se hloekileng. Ha e bontše tlhahiso ea peptide e eketsehileng kapa ho tseba lintho tseo e seng tsa sepheo.
Ka mor'a tlhoekiso, phofo e inahaneloang e ka thōko e boima 250 mg mme e na le karoloana e abetsoeng ea boima ba 80.0% ka mokhoa o ts'oanang le o fanoeng. Ka hona e na le 200 mg target, kapa 0.200 mmol. Kotulo e ikhethileng ea sepheo ke 20.0%, ha a ntse a hlaphoheloa shebiloeng ka tlhoekiso ena ke 200/420 × 100 = hoo e ka bang 47.6%.
| Bongata ba ho ruta | Palo | Tlhaloso |
|---|---|---|
| Gross crude mass ratio | 1,200/1,000 × 100 = 120% | Pokello ea 'mele e amanang le boima ba sepheo sa theory, e sa lebiseng tlhahiso |
| Kotulo e hlabosang ea sepheo | 420/1,000 × 100 = 42.0% | Sepheo se abetsoeng pokellong e sa jeseng litheohelang ho ipapisitsoe le palo e hlalositsoeng ea theory |
| Kotulo e ikhethileng ea sepheo | 200/1,000 × 100 = 20.0% | E abetsoe sepheo ho thepa ea ho qetela e ka thoko e amanang le palo e tšoanang ea theory |
| Tlhoekiso sepheo sa ho hlaphoheloa | 200/420 × 100 ≈ 47.6% | Karolo ea sepheo sa ho kenya e fumanoe pokellong ea ho qetela e amoheloang |
Haeba sampole e ka thoko e boetse e na le 98% bohloeki ba sebaka sa chromatographic, o seke oa ikatisa ka bohona 200 mg ka 0.98. Mohlaleng ona, the 80.0% mosebetsi o se o ntse o bolela karoloana e boletsoeng. Ho sebelisa tokiso e 'ngoe ea bohloeki ntle le ho utloisisa litlhaloso ho ne ho tla lokisa palo eo habeli. Mosebetsi oa "peptide content" o ka hloka tlhaloso e fapaneng.
Batlisisa tekanyo e sa fellang ntle le ho qapa sehlahisoa
Tsoela pele ka mohlala oa ho itlhoekisa o inahaneloang. Ea ho 420 mg sepheo sa ho kenya, 200 mg e abeloa pokellong ea ho qetela, 160 mg ho likaroloana tse lahliloeng, le 25 mg ho litlhatsoa tse rekotiloeng. Seo se ikarabella bakeng sa 385 mg ea sepheo sa mantlha, ho siea lebitso 35 lekhalo la mg pele tekanyo ea ho hloka botsitso e nahanoa.
Lekhalo ha se ho theoloa ka bohona. E ka kenyelletsa phetisetso e sa lekanyetsoang, disampole tse bolokilweng, adsorption, ho hlaphoheloa ho sa phetheheng ho tsoa lisebelisoa, leeme la ho sekaseka, kapa phetoho ea lik'hemik'hale. Patlisiso e tlameha ho latela melapo ea 'nete ea ts'ebetso le mefokolo ea litekanyo. Chromatogram e ke ke ea tšoaea tse sieo 35 mg ntle le bopaki bo eketsehileng.
Beha ho se kholisehe ka thōko ho chelete e bonahalang e sieo
Eketsa mohlala ka ho se tiisehe ha maemo a inahaneloang: 20 mg bakeng sa kabelo ea sepheo sa ho kenya le 15 mg bakeng sa liphetho tse kopaneng tse lekantsoeng. Haeba likhakanyo tsena tse peli li ikemetse, maemo a ho hloka bonnete ba phapang ea bona ke √(20² + 15²) = 25 mg. Lebitso 35 ka hona lekhalo la mg ke feela 1.4 nako eo maemo a ho hloka botsitso. Palo ena ha e khetholle mokhoa oa tahlehelo kapa, ntle le menahano e meng, theha boemo ba ho itšepa.
The JCGM Tataiso ea Pontšo ea ho se Tiisehe ka Tekanyo, likarolo 5.1–5.2 kgetholla ditlhahiso tse ikemetseng le tse amanang. Likarolo tse arolelanoang kapa lintlha tsa tokiso li ka etsa hore likhakanyo tsa kenyelletso le tlhahiso li hokahane, kahoo palo e bonolo ea motso-sum-of-squares e ka 'na ea se ke ea nepahala. Hlalosa mohlala oa 'nete oa tekanyo ho e-na le ho fana ka litekanyetso tse loketseng ± ho etsa hore tekanyo e bonahale e koetsoe. Poly Peptide
Ho ntlafatsa tekanyo e fokolang ea boitsebiso ho ka ba molemo ho feta ho batla sehlahisoa se senyehang hang-hang. Lekola boemeli ba mohlala, palo ya kabelo le melapo e sieo. Haeba masala a tšepahalang a sala ka mor'a licheke tseo, temoho eo e ka lokafatsa lipatlisiso tse tsepamisitsoeng tsa lik'hemik'hale. E ntse e sa fane ka boitsebiso ba mofuta o sieo.
Ho lekanya sehlahisoa se itseng ho hloka boitsebiso ba sona le karabo e nepahetseng kapa kabelo ea chelete. Bakeng sa lipalo tse inahaneloang tse arohaneng, nka hore sehlahisoa se hlalositsoeng se nang le boima ba molar 550 g/mol e abeloa ka boikemelo palo ea 55 mg. Ke hore 0.100 mmol. E amanang le tse boletsoeng 1.000 mmol motheong oa ho qala, tlhahiso ea eona ea molar e ne e tla ba 10.0%, e fane ka kamano ea stoichiometric e lokafatsa mofuta oo. Rona Likhamphani tsa Peptide
Sena se fapane le ho re a 10% tlhoro ea sebaka sa detector e emela a 10% kotulo ea molar. E boetse e fapane le ho tšoara molek'hule e 'ngoe le e 'ngoe e sa bokelloang e le sehlahisoa. Hlalosa hore na chelete e lekantsoeng e latela chelete e reriloeng, ntho e itseng, tse lekanang le ketane, kapa boima bo felletseng; liphetoho tsa lik'hemik'hale li ka etsa hore litekanyo tseo li se ke tsa fetoha.
Khetha yuniti e bolokehileng ea accounting
Ha re re, moetsong o mong oa boinahanelo, 0.100 mmol ea peptide ea motsoali e phunyeha lesapo le le leng la mokokotlo ebe e hlahisa 0.100 mmol ho e 'ngoe le e' ngoe ea likhechana tse peli. Ho eketsa likhechana tsa chelete ho fana 0.200 mmol ea limolek'hule tsa sehlahisoa, empa feela 0.100 mmol ea limolek'hule tsa motsoali e ile ea fetoloa. Ho tlaleha a 20% ho sokoloha ha motsoali ho tsoa ho li- fragment moles e ka ba phoso haeba chelete ea motsoali ea qalang e ne e ka ba phoso 1.000 mmol. Kamano ea stoichiometric, eseng palo ea litlhōrō tsa lihlahisoa, e fana ka denominator.
Meeli ea ho phalla e etsa leraba le arohaneng. Nahana 50 mg ea sepheo se fanoeng ka karoloana: 10 mg e huleloa polokelong ea polokelo le 40 mg e fetela ka letamong. Ho bala karoloana ea pele, polokelo ea litlaleho le letamo e le liphetho tse tharo tse bapileng li tla tlaleha 100 mg ho tsoa ho tsona 50 mg. Sebelisa litekanyo tse mahareng ho hlalosa phetiso, empa bala feela liphetho tse sa fetelletseng tsa moeli o leka-lekaneng.
Insuasty Cepeda le boithuto ba basebetsi-'moho le bona bo matla ba ho hula ke mohlala oa tlhoekiso o nang le lipheo le mekhoa e hlalositsoeng. Bakeng sa tatellano e ncha, botsa hore na ke likaroloana life tse bolokang molek'hule e reriloeng le hore na ke life tse amoheloang. Letamo le hloekisitsoeng le hloekisitsoeng le palo e kholoanyane e fumanoeng ke liphetho tse fapaneng; lekola ka bobeli ho fapana le ho tlisa palo e phatlalalitsoeng ea ho hlaphoheloa.
Bala libaka tsa setifikeiti e le likopo tse arohaneng
| Setifikeiti kapa sebaka sa rekoto | Potso eo u ka e botsang | Seo e ke keng ea se theha e le mong |
|---|---|---|
| Bohloeki ba sebaka sa HPLC | Sesupa sefe, mokhoa, kopanyo, le matshwao a sa kenyeleditsweng a hlalosa peresente? | Chelete e felletseng ea sepheo kapa likarolo tsohle tseo e seng tsa peptide |
| Likahare tsa peptide kapa tlhahlobo | Na see se bolela thepa eohle ea peptide kapa sepheo se boletsoeng, le hore na ke mohlala ofe? | Ntlha ea bobeli ea tokiso ntle le ho utloisisa kabelo |
| Sephetho sa boitsebiso | Ke likarolo life tsa sebopeho le mekhoa e meng eo mokhoa o sebetsanang le eona? | Tatelano e nngwe le e nngwe, maemo, kapa phapang ea stereochemical ho tloha boima bo sa fetoheng feela |
| Boitsebiso ba metsi le counterion | Na tsena li ne li lekantsoe bakeng sa lotho ena, le hore na ba kenya palo ea palo ea chelete joang? | Tokiso e akaretsang e kopitsoe ho tsoa sehlopheng se seng |
| Kotulo kapa ho hlaphoheloa | Nomoro ke eng, sehloho, moeli oa tšebetso, le diyuniti? | Ho bapisa le peresente e sa hlalosoang ho tsoa tseleng e 'ngoe |
Fokotsa litlhaloso tsa accounting pele u bapisa liteko. Boloka motheo oa bongata, mohlala oa ho tlosoa, likamano tsa likaroloana le mohlala oa ho hloka botsitso ka thoko ho lipalo. Haeba moeli oa ho kopanya kapa kabelo ea chelete e fetoha, fetola tekanyo ka ho hlaka. Masala a tlase a sa hlalosoang a hlahisoang ke moeli o pharaletseng ha a bolele hore k'hemistri e ntlafetse..
Mohato o latelang oa bohlokoa ke ho ngola bocha polelo e teng ea chai e le polelo: "Re khutlisitse palo ena ea mofuta ona o boletsoeng molemong ona o hlalositsoeng mothating ona, sebelisa tekanyo ena. ” Haeba karolo efe kapa efe e sieo, e rarolle pele ho bapisa litsela kapa ho beha tahlehelo ho lihlahisoa.
Lipotso tse botsoang khafetsa
Kotulo e tala e ka feta 100%? Karolelano ea boima bo feteletseng e ka feta 100% ha pokello e kenyelletsa lintho tse ling. Seo ha se bolele hore sepheo se boletsoeng se hlahisitsoe ka holimo ho palo ea eona ea theory.
E arotsoe ka lihlahisoa tse tšoanang le ho hlaphoheloa ho hloekisa? Che. Kotulo e ikhethileng hangata e bolela palo e hlalosoang ea ho qala kapa ea khopolo-taba, ha ho hlatsuoa ho hlaphoheloa ho bapisa sepheo se kenang le ho tlohela karohano e itseng.
Na sebaka sa tlhoro ea litšila se lekanya tlhahiso ea lihlahisoa? Eseng ka boomo. Chelete e ikhethileng e kopantseng e hloka boitsebiso bo nepahetseng le bopaki ba palo. Liphesente tsa karabo ea detector ha se likaroloana tse akaretsang tsa molar kapa boima.
Na ho leka-lekana ho koalang ka har'a ho hloka botsitso ho paka hore ha ho na lihlahisoa tse entsoeng? Che. Mefuta e fapaneng e ka lula e sa rarolloe, 'me tekanyo e khethiloeng e ka latela feela sepheo se abetsoeng. Ho koaloa ho lekola mokhoa o boletsoeng oa accounting; boitsebiso ba lik'hemik'hale bo hloka litekanyo tse loketseng.
