不同肽的溶解特性差异很大。丙氨酸 (Ala)、半胱氨酸 (Cys)、异亮氨酸 (Ile)、亮氨酸 (Leu)、蛋氨酸 (Met)、苯丙氨酸 (Phe) 和缬氨酸 (Val) 等残基会增加肽的疏水性和在水溶液中的溶解度，建议客户在定制肽时遵循这些准则。

溶解特性

肽的溶解度在很大程度上取决于氨基酸序列。天然疏水性多肽（A、F、G、V、L、I、M、W、P 的倾向性较高）需要有机溶剂才能溶解。酸性肽（肽序列中 D、E 的倾向性较高）需要碱性水缓冲液来增溶，而碱性肽（K、H 和 R 的倾向性较高）需要酸性水缓冲液来增溶。

溶剂选择

考虑到检测的局限性，我们建议使用以下指南来确定溶解多肽的最佳溶剂

疏水肽

要重新溶解疏水性多肽，可加入 100 µL 的二甲基亚砜（DMSO）并进行超声处理，直至形成均匀的溶液。然后，加入所选的缓冲液，配成 1 mg/mL 的溶液（多肽浓度越高，所需的 DMSO 量越大）。

亲水性（酸性）多肽

要重新溶解酸性肽，在 1 mg 肽中加入 100 µL 1% NH 4 OH 并涡旋。待溶液清澈后，加入所选的缓冲液，配成 1 mg/mL 的溶液。

亲水（碱性）肽

重组碱性多肽时，在 1 毫克多肽中加入蒸馏水并涡旋。

行业标准是以冻干形式提供毛重肽。 肽毛重 是冻干粉中所有成分的总重量。其中包括相关多肽、任何多肽杂质、水、残留溶剂和反离子。

相反 净值 肽重量计算得出 净肽含量的权重。 只有肽 冻干粉中的成分。这样就能为后续的多肽溶液提供更精确的浓度。因此，我们推荐的多肽净重量为 定制多肽 订单。

净肽含量 测量方法是氨基酸分析法（AAA；准确度有限，但所需材料量少）或元素分析法（CHN；需要毫克肽，但更准确）。这两种方法都能得出一个百分比值（即 75% 的净肽含量）。

净肽含量取决于存在的反离子量*，而反离子量又取决于肽的序列。基本上，肽电荷越高，肽含量就越低。

*注：用于计算肽净含量的元素以肽反离子为基础。这样做是为了确保反离子不会影响肽的含量。例如，当反离子是反式脂肪酸或醋酸时，使用氮，因为氮存在于肽中，而不存在于反式脂肪酸或醋酸中。出于同样的原因，当氯化物是反离子时，也可以使用碳或氮。

肽净重计算

净肽量（肽总量） - 我们使用这种方法来处理净定制多肽订单。

用净肽含量百分比（十进制形式）乘以肽毛重，得出净肽数量（肽总量）。

例如
5 毫克毛肽/小瓶：
肽净含量为 84%。
总肽的精确量 = 0.84*5 毫克=4.2 毫克总肽

感兴趣肽的净数量--最准确 - 客户可自行使用此方法计算所感兴趣的多肽。

将净肽含量百分比乘以肽毛重和肽纯度（通过 HPLC），即可计算出您所拥有的相关肽的确切含量。多肽净含量百分比（十进制）乘以多肽纯度（十进制）。

例如
5 毫克毛肽/小瓶，含
肽净含量为 84%。
相关多肽的精确含量 = 0.84*0.96*5 毫克=4.03 毫克

MOL Changes 采用固相 Fmoc 化学而非 BOC 化学。Fmoc 化学可在多肽伸长过程中使用温和的条件去除保护基团，而 BOC 化学则需要在多肽伸长过程中使用强酸去除保护基团。 此外，Fmoc 化学使用三氟乙酸 (TFA) 从树脂中去除多肽，而 BOC 化学则使用氢氟酸 (HF)。 氢氟酸无色、腐蚀性强，是一种接触性毒物。 

因此，MOL Changes 采用了 Fmoc 化学，因为与 BOC 化学相比，Fmoc 化学更温和、更灵活、用途更广。     

摩尔浓度是指溶液的摩尔浓度，即 1 升溶液中溶解的溶质摩尔数，用 mol/L 或 M 表示。

摩尔浓度 [M] = 质量/（体积 x 摩尔质量）；摩尔 = 浓度（克/升）x 体积（升）/摩尔质量（克/摩尔）。

例如
给定：1 毫克肽干粉，分子量：20KDa（肽的摩尔质量为 20 克/摩尔）
在已知质量和已知体积的情况下测定摩尔浓度
对于这种多肽的 1 毫升溶液：
摩尔浓度 = 质量 (0.001g) / (体积 (0.001L) x 摩尔质量 (MW 20,000) = 50μM

确定达到一定摩尔浓度的质量：
如果化验需要在 1 毫升水中加入 0.01 毫摩尔的工作肽溶液，那么所需质量的计算方法如下：

质量 = 摩尔浓度 x 体积 x 摩尔质量
质量 = 0.01mM x (1/1000 L) x 20,000g/mol = 0.0002g

因此，您需要 0.2 毫克/毫升的多肽才能得到 0.01 毫摩尔的工作溶液。

我们提供冻干或未加工的粉末和多肽溶液。

多肽在特定溶剂中的溶解度取决于氨基酸序列，通常很难预测。 对于目录中的多肽，溶解度信息列在 QC 数据表中。 对于定制多肽，请参阅 "如何溶解我的多肽 "部分。

肽含量并不能说明肽的纯度，因为这是两种不同的测量方法。纯度由高效液相色谱分析确定，并表明是否存在其他肽污染物（即截断肽）。

肽的净含量决定了样品中肽（感兴趣的肽以及肽污染物）的实际含量。肽净含量的传统测量方法是氨基酸分析法（AAA；准确度有限，但所需材料量少）或元素分析法（CHN；需要毫克肽，但准确度更高）。

MOL Changes 多肽一般采用反相制备型高效液相色谱法纯化，使用 2 种含有 0.1% 三氟乙酸 (TFA) 的缓冲液。 第一种缓冲液（缓冲液 A）由去离子水中的 0.1 % TFA 组成，第二种缓冲液（缓冲液 B）由乙腈（ACN）中的 0.1 % TFA 组成。

一般来说，粗肽首先溶解在缓冲液 A、一定量的缓冲液 B 或有机极性溶剂（如 DMSO）的溶液中。 如果使用的是有机极性溶剂或缓冲液 B，则先用缓冲液 A 稀释清液。 利用优化的方法梯度，然后根据吸光度读数收集馏分。 然后通过分析 HPLC 对每个馏分进行分析，以确保每个馏分的纯度符合所需的纯度规格。 

然后将这些 "纯 "馏分集中起来冻干。 然后对 "纯 "粉末进行纯度和特性检测，以确保生产出正确的多肽。

最后，由 AnaSpec 的一个独立质量控制小组再次对多肽进行测试，以确保所有测试属性都符合所要求的规格。

序列终端使用的国际术语如下：

- N 末端：H 表示游离胺（NH2-），Ac 表示乙酰基 [CH3C(O)-NH-]，Pyr 表示焦谷氨酸
- C 末端：OH 表示游离酸 (-COOH)，NH2 表示酰胺 [-CONH2]

- 氨基酸侧链上的修饰在相应氨基酸后的括号内描述。例如，磷酸化丝氨酸 = S(PO3H2) 或ε-N-乙酰化赖氨酸 = K(Ac)

在肽生产过程中，合成和纯化溶液中的离子会与肽带电的氨基酸侧链结合，形成盐。这些离子被称为肽反离子，有助于平衡肽的电荷。

三氟乙酸（tfa）常用于肽的合成和纯化。

它与碱性氨基酸（例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸）和游离的n端胺形成三氟乙酸盐。因此，三氟乙酸盐往往是默认的反离子。

与肽结合的tfa分子的最小数量与给定肽序列中碱性残基的数量成正比。因此，肽中存在的碱性残基数量越多，冻干粉的净肽含量就越低。为了将样品中存在的tfa或水的含量考虑在内，我们建议对每个定制肽都进行肽含量测定。

水和三氟乙酸 (TFA) 是纯化过程中的副产物。然而，TFA 可能会对 内和临床前研究造成毒性担忧。因此，MOL Changes 提供无毒的醋酸盐、氯化物或铵 盐交换剂。

含有 Cys、Met 或 Trp 的肽在合成和获得高纯度产品方面具有挑战性。这主要是由于这些官能团的不稳定性和易氧化性。在使用和储存这些肽时需要特别注意，避免反复打开小瓶。