पेप्टाइड संश्लेषण में उपोत्पाद उपज - सामग्री-संतुलन सीमा निर्धारित करें
पेप्टाइड्स की खरीदारी करें रॉयल पेप्टाइड कच्चे तेल की उपज से पृथक उपज को घटाने से उपोत्पाद निर्माण का आकलन नहीं होता है. एक मान नमक युक्त पाउडर का वर्णन कर सकता है, एक और सौंपा गया लक्ष्य, और एक तिहाई चयनित क्रोमैटोग्राफ़िक चोटियों में डिटेक्टर प्रतिक्रिया. पहला कार्य प्रत्येक संख्या के पीछे आणविक मात्रा और प्रक्रिया सीमा की पहचान करना है. तभी अंकगणित बता सकता है कि लक्ष्य कहां से प्राप्त हुआ, यह कहां रहता है और क्या मापा नहीं गया है.
एक उपयोगी संतुलन चार परिणामों को अलग करता है: स्वीकृत उत्पाद में लक्ष्य, अन्य मापी गई धाराओं में लक्ष्य, परिवर्तन के पहचाने गए उत्पाद और एक अनसुलझा शेष. ये श्रेणियां विभिन्न विकास निर्णयों की ओर ले जाती हैं. अस्वीकृत अंश में पुनर्प्राप्ति योग्य लक्ष्य एक पृथक्करण प्रश्न है; एक पहचाना गया अनुक्रम संस्करण एक रसायन विज्ञान प्रश्न हो सकता है; एक अस्पष्टीकृत अवशेष प्रारंभ में एक माप-और-लेखा प्रश्न है.
नीचे दी गई संख्याएँ काल्पनिक शिक्षण मूल्य हैं, प्रयोगात्मक परिणाम या विशिष्ट उद्योग प्रदर्शन नहीं. वे जानबूझकर सरल हैं ताकि भेदों की जाँच की जा सके. वास्तविक असाइनमेंट में विधि की सीमाएँ और अनिश्चितता शामिल होनी चाहिए.
एक ही प्रक्रिया सीमा पर तीन लेखांकन दृष्टिकोणों की तुलना करें
निष्पक्ष तुलना के लिए, प्रारंभिक सामग्री या चरण को परिभाषित करें, लक्ष्य संरचना, प्रासंगिक राशि का आधार, और वह बिंदु जिस पर सामग्री एकत्र की जाती है. एक मार्ग के कच्चे पाउडर की तुलना दूसरे मार्ग के शुद्ध लक्ष्य से न करें और अंतर को केवल रसायन विज्ञान के रूप में न समझें.
| फ़ायदा | परिसीमन | लागू शर्तें | सत्यापन विधि |
|---|---|---|---|
| रिकॉर्ड को संभालने के लिए सकल बरामद द्रव्यमान सरल और उपयोगी है. | पानी होने पर यह लक्षित उपज नहीं है, लवण, अशुद्धियों, या अवशिष्ट घटक योगदान करते हैं. | भौतिक संग्रहों की तुलना तभी करें जब उनकी नमूना स्थिति और आधार स्पष्ट रूप से बताए गए हों. | वजन की पुष्टि करें, कंटेनर सुधार, नमूना स्थिति, और रचना संबंधी जानकारी. |
| निर्दिष्ट लक्ष्य राशि पृथक उपज और लक्ष्य पुनर्प्राप्ति गणना का समर्थन करती है. | यह एक उपयुक्त मात्रात्मक पद्धति और निर्दिष्ट प्रजातियों की स्पष्ट परिभाषा पर निर्भर करता है. | परिभाषित इनपुट और आउटपुट चरणों में समान लक्ष्य की तुलना करना. | अंशांकन की समीक्षा करें, नमूना तैयार करना, पहचान, मात्रा के आधार पर, और अनिश्चितता. |
| स्ट्रीम-दर-स्ट्रीम संतुलन यह पहचानता है कि सामग्री का हिसाब कहां लगाया जाता है. | अनिर्धारित धाराएँ और अनिर्धारित प्रजातियाँ अंतराल छोड़ती हैं; अंतराल कोई नामित उपोत्पाद नहीं है. | दस्तावेज़ीकृत इनपुट के साथ एक परिभाषित ऑपरेशन की जांच करना, आउटपुट, और नमूनाकरण. | प्रासंगिक धाराओं को लगातार मापें और बनाए गए नमूनों या एकत्रित अंशों की दोहरी गिनती से बचें. |
क्रोमैटोग्राफ़िक क्षेत्र शुद्धता एक अन्य उपयोगी वर्णनकर्ता है, लेकिन यह चौथा विनिमेय उपज माप नहीं है. यह एक निर्दिष्ट विधि के तहत निर्दिष्ट एकीकरण में शामिल सापेक्ष डिटेक्टर प्रतिक्रिया की रिपोर्ट करता है. विभिन्न घटकों की अलग-अलग प्रतिक्रियाएँ हो सकती हैं, और कुछ सामग्री का पता नहीं लगाया जा सकता है या एकीकृत नहीं किया जा सकता है.
मेलानसन और सहकर्मियों का एंजियोटेंसिन II संदर्भ-सामग्री अध्ययन एक परिभाषित शुद्धता असाइनमेंट के लिए मात्रात्मक दृष्टिकोण को जोड़ता है. यह बताता है कि राशि का आधार क्यों निर्दिष्ट किया जाना चाहिए. एक सापेक्ष क्रोमैटोग्राफ़िक प्रतिशत को केवल निर्दिष्ट लक्ष्य द्रव्यमान अंश के लिए प्रतिस्थापित नहीं किया जा सकता है क्योंकि दोनों को प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया जाता है.
एक काल्पनिक अपरिष्कृत और पृथक उपज गणना के माध्यम से काम करें
की स्पष्ट रूप से परिभाषित सैद्धांतिक लक्ष्य राशि मान लें 1.000 mmol और औसत दाढ़ द्रव्यमान 1,000 निर्दिष्ट तटस्थ पेप्टाइड के लिए g/mol. इसी पेप्टाइड्स के बारे में सब कुछ सैद्धांतिक लक्ष्य द्रव्यमान है 1,000 एमजी. यह हर एक शिक्षण धारणा है; एक वास्तविक संश्लेषण को इसकी प्रारंभिक मात्रा और स्टोइकोमेट्रिक आधार को उचित ठहराना चाहिए.
काल्पनिक कच्चे संग्रह का वजन होता है 1,200 एमजी. एक उपयुक्त मात्रात्मक असाइनमेंट इसे स्थापित करता है 35.0% उस आपूर्ति किए गए द्रव्यमान का निर्दिष्ट लक्ष्य पेप्टाइड है. पेप्टाइड औषधियाँ इसलिए, क्रूड संग्रह में शामिल हैं 1,200 × 0.350 = 420 मिलीग्राम लक्ष्य, या 0.420 mmol. इसकी लक्ष्य उपज बताई गई सैद्धांतिक मात्रा के सापेक्ष है 42.0%.
को कॉल कर रहा हूँ 1,200 एमजी कच्चे तेल का संग्रह "120% पेप्टाइड उपज" इसकी संरचना को छुपाएगा. सकल द्रव्यमान अनुपात से अधिक है 100% क्योंकि संग्रह को शुद्ध लक्ष्य नहीं माना गया है. यह अतिरिक्त पेप्टाइड के निर्माण को प्रदर्शित नहीं करता है या गैर-लक्ष्य सामग्री की पहचान नहीं करता है.
शुद्धि के बाद, काल्पनिक पृथक पाउडर का वजन होता है 250 मिलीग्राम और इसका एक निर्धारित लक्ष्य द्रव्यमान अंश है 80.0% आपूर्ति के समान आधार पर. इसलिए इसमें शामिल है 200 मिलीग्राम लक्ष्य, या 0.200 mmol. पृथक लक्ष्य उपज है 20.0%, जबकि इस शुद्धिकरण के माध्यम से लक्ष्य की वसूली होती है 200/420 × 100 = लगभग 47.6%.
| शिक्षण मात्रा | गणना | अर्थ |
|---|---|---|
| सकल क्रूड द्रव्यमान अनुपात | 1,200/1,000 × 100 = 120% | सैद्धांतिक लक्ष्य द्रव्यमान के सापेक्ष भौतिक संग्रह, लक्ष्य उपज नहीं |
| क्रूड लक्ष्य उपज | 420/1,000 × 100 = 42.0% | परिभाषित सैद्धांतिक मात्रा के सापेक्ष क्रूड संग्रहण में निर्धारित लक्ष्य |
| पृथक लक्ष्य उपज | 200/1,000 × 100 = 20.0% | अंतिम पृथक सामग्री में समान सैद्धांतिक मात्रा के सापेक्ष निर्धारित लक्ष्य |
| शुद्धिकरण लक्ष्य पुनर्प्राप्ति | 200/420 × 100 ≈ 47.6% | स्वीकृत अंतिम संग्रह में इनपुट लक्ष्य का अंश पुनर्प्राप्त किया गया |
यदि पृथक नमूना भी है 98% क्रोमैटोग्राफिक क्षेत्र शुद्धता, स्वचालित रूप से गुणा न करें 200 एमजी द्वारा 0.98. इस उदाहरण में, the 80.0% असाइनमेंट पहले से ही निर्दिष्ट लक्ष्य अंश को दर्शाता है. परिभाषाओं को समझे बिना एक और शुद्धता सुधार लागू करने से मात्रा दोगुनी हो जाएगी. "कुल पेप्टाइड सामग्री" असाइनमेंट के लिए एक अलग व्याख्या की आवश्यकता हो सकती है.
किसी उपोत्पाद का आविष्कार किए बिना अपूर्ण शेष की जांच करें
काल्पनिक शुद्धि उदाहरण जारी रखें. की 420 एमजी इनपुट लक्ष्य, 200 एमजी को अंतिम संग्रह सौंपा गया है, 160 अस्वीकृत भिन्नों को mg, और 25 दर्ज की गई धुलाई के लिए मिलीग्राम. इसका हिसाब है 385 मूल लक्ष्य का मिलीग्राम, नाममात्र को छोड़कर 35 माप से पहले मिलीग्राम अंतर पर अनिश्चितता पर विचार किया जाता है.
अंतराल स्वचालित रूप से गिरावट नहीं है. इसमें बिना मापे स्थानांतरण शामिल हो सकते हैं, नमूने बरकरार रखे, सोखना, उपकरण से अपूर्ण पुनर्प्राप्ति, एक विश्लेषणात्मक पूर्वाग्रह, या रासायनिक परिवर्तन. जांच को वास्तविक प्रक्रिया धाराओं और माप सीमाओं का पालन करना चाहिए. एक क्रोमैटोग्राम लुप्त को लेबल नहीं कर सकता 35 अतिरिक्त सबूत के बिना एमजी.
स्पष्ट गायब राशि के आगे अनिश्चितता रखें
काल्पनिक मानक अनिश्चितताओं के साथ उदाहरण का विस्तार करें: 20 इनपुट लक्ष्य असाइनमेंट के लिए mg और 15 संयुक्त मापा आउटपुट के लिए मिलीग्राम. यदि ये दोनों अनुमान स्वतंत्र हैं, उनके अंतर की मानक अनिश्चितता √ है(20² + 15²) = 25 एमजी. नाममात्र 35 इसलिए एमजी गैप ही है 1.4 उस मानक अनिश्चितता का समय. यह गणना हानि तंत्र की पहचान नहीं करती है, बिना किसी और धारणा के, आत्मविश्वास का स्तर स्थापित करें.
The मापन में अनिश्चितता की अभिव्यक्ति के लिए जेसीजीएम गाइड, अनुभाग 5.1-5.2 स्वतंत्र और सहसंबद्ध इनपुट को अलग करता है. साझा अंशांकन या तैयारी कारक इनपुट और आउटपुट अनुमानों को सहसंबद्ध बना सकते हैं, इसलिए वर्गों के मूल-योग की सरल गणना अनुपयुक्त हो सकती है. केवल संतुलन को बंद दिखाने के लिए सुविधाजनक ± मान निर्दिष्ट करने के बजाय वास्तविक माप मॉडल का वर्णन करें. पॉली पेप्टाइड
किसी ख़राब उत्पाद की तुरंत खोज करने की तुलना में कम से कम जानकारीपूर्ण माप में सुधार करना अधिक उपयोगी हो सकता है. नमूना प्रतिनिधित्वशीलता का पुनर्मूल्यांकन करें, राशि आवंटन और लुप्त धाराएँ. यदि उन जाँचों के बाद कोई विश्वसनीय अवशेष बचता है, वह अवलोकन एक केंद्रित रासायनिक जांच को उचित ठहरा सकता है. यह अभी भी लापता प्रजातियों की पहचान प्रदान नहीं करता है.
किसी विशिष्ट उपोत्पाद की मात्रा निर्धारित करने के लिए उसकी पहचान और उचित प्रतिक्रिया या राशि असाइनमेंट की आवश्यकता होती है. एक अलग काल्पनिक गणना के लिए, मान लीजिए कि दाढ़ द्रव्यमान के साथ एक परिभाषित उपोत्पाद है 550 g/mol को स्वतंत्र रूप से एक मात्रा दी गई है 55 एमजी. वह है 0.100 mmol. बताए गए के सापेक्ष 1.000 एमएमओएल प्रारंभिक आधार, इसकी दाढ़ उपज होगी 10.0%, बशर्ते स्टोइकोमेट्रिक संबंध उस हर को उचित ठहराए. हमें पेप्टाइड कंपनियाँ
यह कहने से भिन्न है कि ए 10% डिटेक्टर-क्षेत्र शिखर एक का प्रतिनिधित्व करता है 10% दाढ़ उपज. यह प्रत्येक अप्रयुक्त लक्ष्य अणु को उपोत्पाद के रूप में मानने से भी भिन्न है. बताएं कि क्या शेष राशि लक्ष्य राशि के अनुरूप है, एक विशेष तत्व, श्रृंखला समकक्ष, या कुल द्रव्यमान; रासायनिक परिवर्तन उन संतुलनों को गैर-विनिमेय बना सकते हैं.
एक संरक्षित लेखा इकाई चुनें
कल्पना करना, एक अन्य काल्पनिक मॉडल में, 0.100 मूल पेप्टाइड का mmol एक रीढ़ की हड्डी के दरार से गुजरता है और उत्पादन करता है 0.100 दो टुकड़ों में से प्रत्येक का mmol. खंड मात्राएँ जोड़ने पर प्राप्त होता है 0.200 उत्पाद अणुओं का mmol, लेकिन केवल 0.100 मूल अणुओं के mmol को परिवर्तित किया गया. रिपोर्टिंग ए 20% यदि प्रारंभिक मूल राशि होती तो सारांशित खंड मोल से मूल रूपांतरण गलत होगा 1.000 mmol. स्टोइकोमेट्रिक संबंध, उत्पाद शिखरों की संख्या नहीं, हर की आपूर्ति करता है.
धारा सीमाएँ एक अलग जाल बनाती हैं. कल्पना करना 50 एक अंश में निर्धारित लक्ष्य का मिलीग्राम: 10 एमजी को एक संग्रह में वापस ले लिया गया है 40 एमजी एक पूल में आगे बढ़ता है. मूल अंश की गिनती, संग्रह और पूल तीन समानांतर आउटपुट के रूप में रिपोर्ट करेंगे 100 उन्हीं में से एमजी 50 एमजी. स्थानांतरणों को समझाने के लिए मध्यवर्ती मापों का उपयोग करें, लेकिन केवल संतुलित सीमा के गैर-अतिव्यापी आउटपुट की गणना करें.
इंसुएस्टी सेपेडा और सहकर्मियों का क्रमिक ठोस-चरण निष्कर्षण अध्ययन परिभाषित लक्ष्यों और विधियों के साथ शुद्धिकरण का एक उदाहरण है. एक नए सिलसिले के लिए, पूछें कि कौन से अंश इच्छित अणु को बनाए रखते हैं और कौन से स्वीकार किए जाते हैं. एक स्वच्छ चयनित पूल और एक बड़ी पुनर्प्राप्त लक्ष्य राशि अलग-अलग परिणाम हैं; प्रकाशित पुनर्प्राप्ति आंकड़े आयात करने के बजाय दोनों का मूल्यांकन करें.
प्रमाणपत्र फ़ील्ड को अलग-अलग दावों के रूप में पढ़ें
| प्रमाणपत्र या रिकॉर्ड फ़ील्ड | पूछने के लिए प्रश्न | जिसे वह अकेले स्थापित नहीं कर सकता |
|---|---|---|
| एचपीएलसी क्षेत्र की शुद्धता | कौन सा डिटेक्टर, तरीका, एकीकरण, और बहिष्कृत सिग्नल प्रतिशत को परिभाषित करते हैं? | पूर्ण लक्ष्य राशि या सभी गैर-पेप्टाइड घटक |
| पेप्टाइड सामग्री या परख | क्या इसका मतलब कुल पेप्टाइड सामग्री या निर्दिष्ट लक्ष्य है, और किस नमूने के आधार पर? | असाइनमेंट को समझे बिना दूसरा सुधार कारक |
| पहचान परिणाम | विधि किन संरचनात्मक विशेषताओं और विकल्पों को संबोधित करती है? | हर क्रम, अवस्था का, या अकेले अक्षुण्ण द्रव्यमान से स्टीरियोकेमिकल भेद |
| जल एवं प्रतिवाद संबंधी जानकारी | क्या इन्हें इस लाट के लिए मापा गया था, और वे राशि की गणना कैसे दर्ज करते हैं? | एक सार्वभौमिक सुधार दूसरे बैच से कॉपी किया गया |
| उपज या वसूली | अंश क्या हैं, भाजक, प्रक्रिया सीमा, और इकाइयाँ? | किसी अन्य मार्ग से अस्पष्टीकृत प्रतिशत के साथ तुलनीयता |
प्रयोगों की तुलना करने से पहले लेखांकन परिभाषाओं को फ़्रीज़ करें. मात्रा का आधार बनाए रखें, नमूना वापसी, गणना के अलावा भिन्न संबंध और अनिश्चितता मॉडल. यदि पूलिंग सीमा या राशि असाइनमेंट बदलता है, शेष राशि को स्पष्ट रूप से संशोधित करें. व्यापक सीमा द्वारा उत्पन्न कम अस्पष्टीकृत अवशिष्ट का मतलब यह नहीं है कि रसायन विज्ञान में सुधार हुआ है.
अगला उपयोगी कदम मौजूदा उपज विवरण को एक वाक्य के रूप में फिर से लिखना है: “हमने इस चरण में इस परिभाषित इनपुट से इस निर्दिष्ट प्रजाति की यह मात्रा पुनर्प्राप्त की है, इस माप का उपयोग करना।" यदि कोई भाग गायब है, मार्गों की तुलना करने या उपोत्पादों को नुकसान का कारण बताने से पहले इसका समाधान करें.
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्नों
क्या क्रूड की पैदावार इससे ज्यादा हो सकती है 100%? सकल द्रव्यमान अनुपात से अधिक हो सकता है 100% जब संग्रह में अन्य सामग्री शामिल हो. इसका मतलब यह नहीं है कि निर्दिष्ट लक्ष्य का उत्पादन उसकी उचित सैद्धांतिक मात्रा से अधिक किया गया था.
पृथक उपज शुद्धि पुनर्प्राप्ति के समान है? नहीं. पृथक उपज आमतौर पर एक परिभाषित प्रारंभिक या सैद्धांतिक राशि को संदर्भित करती है, जबकि शुद्धिकरण पुनर्प्राप्ति एक विशेष अलगाव में प्रवेश करने और छोड़ने वाले लक्ष्य की तुलना करती है.
क्या अशुद्धता चरम क्षेत्र उपोत्पाद उपज को मापता है?? स्वचालित रूप से नहीं. एक यौगिक-विशिष्ट राशि के लिए उचित पहचान और मात्रात्मक साक्ष्य की आवश्यकता होती है. डिटेक्टर प्रतिक्रिया प्रतिशत सार्वभौमिक दाढ़ या द्रव्यमान अंश नहीं हैं.
क्या एक संतुलन जो अनिश्चितता के भीतर बंद हो जाता है, यह साबित करता है कि कोई उपोत्पाद नहीं बना है? नहीं. विभिन्न प्रजातियाँ अनसुलझी रह सकती हैं, और चुना गया शेष केवल निर्दिष्ट लक्ष्य को ट्रैक कर सकता है. क्लोजर बताए गए लेखांकन मॉडल का मूल्यांकन करता है; रासायनिक पहचान के लिए उपयुक्त माप की आवश्यकता होती है.
