पेप्टाइड संशोधन
पेप्टाइड बायोटिनाइलेशन
पेप्टाइड बायोटिनाइलेशन क्या है??
उपयुक्त रूप से टैग किए गए पेप्टाइड्स या बायोटिनाइलेटेड पेप्टाइड्स का पता लगाना (उदाहरण के लिए:. लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ)बायोटिनाइलेटेड पेप्टाइड्स या टैग किए गए पेप्टाइड्स को अनटैग किए गए पेप्टाइड्स से अलग करना (उदाहरण के लिए:. बंधी हुई एंटीबॉडी के साथ)
टैग बायोटिन जैसे छोटे कार्बनिक अणु हो सकते हैं (जो स्ट्रेप्टाविडिन से मजबूती से और गैर-सहसंयोजक रूप से बंधता है) या एक छोटा पेप्टाइड अनुक्रम. टैग के रूप में उपयोग किए जाने वाले पेप्टाइड अनुक्रमों के सबसे प्रमुख उदाहरण फ्लैग टैग जैसे एपिटोप टैग हैं, HA टैग और Myc टैग. हाल ही में विकसित एक टैग ALFA पेप्टाइड टैग है. सभी टैग के लिए, एंटीबॉडीज़ व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं. संबंधित अनुक्रमों के लिए नीचे देखें.
MOL Changes routinely synthesizes tagged peptides carrying various tags. The tags are usually attached at the N-terminus or the C-terminus (via lysine or cysteine), but in principle can be positioned anywhere. All tags can be separated from the peptide by a variety of different so called linkers or spacer molecules of varying length and polarity. If desired, linkers can be made cleavable, उदाहरण के लिए:. by reduction of sensitive disulfide bonds. Have a look at a list of available linker / spacer / PEGylations. Here is a representation of frequently incorporated tags.
Biotinylated and Tagged Peptides
Affinity tags such as biotin can be used for
·The detection of suitably tagged peptides or biotinylated peptides (उदाहरण के लिए:. लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ)
·The separation of biotinylated peptides or tagged peptides from untagged ones (उदाहरण के लिए:. बंधी हुई एंटीबॉडी के साथ)
टैग बायोटिन जैसे छोटे कार्बनिक अणु हो सकते हैं (जो स्ट्रेप्टाविडिन से मजबूती से और गैर-सहसंयोजक रूप से बंधता है) या एक छोटा पेप्टाइड अनुक्रम. टैग के रूप में उपयोग किए जाने वाले पेप्टाइड अनुक्रमों के सबसे प्रमुख उदाहरण फ्लैग टैग जैसे एपिटोप टैग हैं, HA टैग और Myc टैग. हाल ही में विकसित एक टैग ALFA पेप्टाइड टैग है. सभी टैग के लिए, एंटीबॉडीज़ व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं. संबंधित अनुक्रमों के लिए नीचे देखें.
MOL Changes routinely synthesizes tagged peptides carrying various tags. The tags are usually attached at the N-terminus or the C-terminus (via lysine or cysteine), but in principle can be positioned anywhere. All tags can be separated from the peptide by a variety of different so called linkers or spacer molecules of varying length and polarity. If desired, linkers can be made cleavable, उदाहरण के लिए:. by reduction of sensitive disulfide bonds.
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Affinity Tag
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अनुक्रम
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Comment
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Flag tag |
DYKDDDDK |
एंटी फ़्लैग एंटीबॉडी |
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हा दिन |
YPYDVPDYA |
एंटी एचए एंटीबॉडी |
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बहुत सारा समय |
EQKLISEEDL |
एंटी माइसी एंटीबॉडी |
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सीपीपी
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अनुक्रम
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Comment
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|---|---|---|
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गूंथना (47-57) |
वाईजीआरकेकेआरआरक्यूआरआर |
कोशिका-मर्मज्ञ पेप्टाइड |
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ओलिगो-आर्जिनिन |
आरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआरआर |
कोशिका-मर्मज्ञ पेप्टाइड |
एमओएल चेंजेस आपको पेप्टाइड्स से जुड़े प्रतिक्रियाशील लेबल की एक विस्तृत श्रृंखला भी प्रदान करने में सक्षम है. उदाहरणों का परिचय है
- Azides (एल्काइन के साथ प्रतिक्रिया - रसायन विज्ञान पर क्लिक करें)
- पेंटिंग में (थिओल्स के साथ प्रतिक्रिया, उदाहरण के लिए:. सीआईएस)
- थिओल्स (मेलिमाइड्स के साथ प्रतिक्रिया)
- सीआईएस(पीआईएस/एनपीआईएस) (डाइसल्फ़ाइड बनाने के लिए थायोल्स के साथ प्रतिक्रिया)
विशेष उद्धरण
माइलॉयड विशिष्ट मानव CD33 फॉस्फेटेस SHP-1 और SHP-2 को भर्ती करने में विभेदक ITIM फ़ंक्शन के साथ एक निरोधात्मक रिसेप्टर है।
CD33 सियालिक एसिड-बाइंडिंग रिसेप्टर परिवार का एक माइलॉयड विशिष्ट सदस्य है और यह माइलॉयड पूर्वज कोशिकाओं पर अत्यधिक लेकिन विभेदित कोशिकाओं में बहुत कम स्तर पर व्यक्त होता है।. मानव CD33 के साइटोप्लाज्मिक डोमेन में दो टायरोसिन अवशेष हैं (Y340 और Y358). जब फॉस्फोराइलेट किया जाता है, ये टायरोसिन फॉस्फेटेस के लिए डॉकिंग साइट के रूप में कार्य कर सकते हैं, SHP-1 और/या SHP-2, CD33 को एक निरोधात्मक रिसेप्टर के रूप में कार्य करने में सक्षम बनाना. यहां हम प्रदर्शित करते हैं कि CD33 फॉस्फेट अवरोधक की उपस्थिति में टायरोसिन फॉस्फोराइलेटेड है, pervanadate, और SHP-1 और SHP-2 की भर्ती करता है. सह-अभिव्यक्ति अध्ययनों से पता चलता है कि एसआरसी-फैमिली काइनेज एलसीके फॉस्फोराइलेटिंग Y340 में प्रभावी है, लेकिन Y358 नहीं, यह सुझाव देते हुए कि ये अवशेष एडाप्टर अणुओं की चयनात्मक भर्ती में कार्य कर सकते हैं और अलग-अलग कार्य कर सकते हैं. ओवरलैपिंग के लिए अतिरिक्त समर्थन, लेकिन निरर्थक, Y340 और Y358 के लिए भूमिकाएं पेप्टाइड-बाइंडिंग अध्ययनों से आती हैं, जिसमें SHP-1 और SHP-2 दोनों की Y340 में भर्ती का पता चला है, लेकिन Y358 में केवल SHP-2 की भर्ती हुई है।. SHP-1 के म्यूटेंट का उपयोग करते हुए विश्लेषण से पता चला कि CD33 के Y340 को बांधना मुख्य रूप से SHP-1 के एमिनो Src होमोलॉजी-2 डोमेन से था।. निरोधात्मक रिसेप्टर के रूप में कार्य करने की CD33 की क्षमता को U937 में CD64-प्रेरित कैल्शियम जमाव को कम करने की क्षमता द्वारा प्रदर्शित किया गया था।. SHP-1 पर इस निषेध की निर्भरता को प्रमुख नकारात्मक SHP-1 के साथ CD33-मध्यस्थता प्रभावों को अवरुद्ध करके प्रदर्शित किया गया था।. इस परिणाम से पता चलता है कि CD33 एक निरोधात्मक रिसेप्टर है और यह भी कि SHP-1 फॉस्फेट की CD33 फ़ंक्शन की मध्यस्थता में महत्वपूर्ण भूमिका है. रिसेप्टर की पहचान के लिए आगे का अध्ययन आवश्यक है(एस) CD33 विवो में और माइलॉयड वंश विकास में इसके कार्य को रोकता है.
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