Bothata ba Enzyme Peptide e etselitsoe ho feta
Acetyl Hexapeptide 1 Morekisi Mehloli ea Peptide Sebaka se sebetsang sa Co-type nitrile hydratase se na le sebaka se tlase sa spin Co(III) karolong ea pele ea khokahanyo ea N2S3: li-nitrogen tse peli tse tsoang mokokotlong le sebabole tse tharo tse tsoang ho cysteine libakeng tse tharo tse fapaneng tsa oxidation - thiolate., sulfate le sulfinate. The 1.8 Å kristale sebopeho sa Pseudonocardia thermophila enzyme (PDB 1IRE) e rarolla αCys111 e le cysteine-sulfinic acid le αCys113 e le cysteine-sulfenic acid, mokhoa o ts'oanang o bonoang ho enzyme ea tšepe.
Ho fihla moo ha se mohato o phuthang o itlelang feela. Khōlo e hloka protheine ea activator, le bakeng sa PtNHase Zhou le basebetsi-'moho ba sisintse mochine oa ho fapanyetsana oa α-subunit: apo-α2β2 tetramer e theha pele, α-subunit e le 'ngoe e kopanya Co(II)-e nang le liprotheine tse ε, cobalt e kenngoa 'me tšepe hammoho le li-cysteine tsa equatorial li na le oxidized, 'me li-α-subunits tse seng li sebetsa li fetotsoe ho apo-tetramer. Boithuto ba Frontiers bo bolela ka ho hlaka hore ha ho tsejoe hanyane ka hore na sena se etsahala joang maemong a athomo.
Ke bona bothata ba ho toloka. Ka holoenzyme, ho kenya tšepe, cysteine oxidation, kopano ea subunit le activator activator li etsahala sebakeng se le seng ka linako tse fapanyetsanang. Phetoho ea spectroscopic sampole ea enzyme e ntseng e hola e ke ke ea abeloa e 'ngoe ea lisosa tseo, hobane ba bang ba ntse ba matha. Ho hlobolisa scaffold ha ho tlose bohlokoa; e tlosa meferefere e etsang hore sistimi ea matsoalloa e se balehe e feto-fetohang ka nako.
Se "Moetso oa Motif" se Hlalosang
Sepheo se bolokiloeng ke CXXCSCX, 'me thuto e e hlalosa e le hohle har'a NHases. Mohaho o tsoang ho PtNHase motif ke Ac-VCTLCSCY: masalla a robeli, boima ba molek'hule 933.13 Le, ka sehlopha sa acetyl ho N-terminus e kentsoeng ho matlafatsa ho qhibiliha. Peptide e ne e fanoa e le phofo ea lyophilized ea >98.5% bohloeki le sebedisoa joalo ka ha ho fanoe ka eona.
Karolo e 'ngoe le e' ngoe ea maemo e sebetsa. Sebaka sa cysteine se beha moo li-thiolates li lutseng li le haufi le tse ling le ho tšepe. Ser6 e lutse pakeng tsa li-cysteine ho hokahanya, 'me mefuteng ea computational ketane ea eona ea mahlakoreng a hydrogen-bonds ho tlama cysteine sulphurs ka metsi a mabeli a hlakileng a ka ntle.. C-terminal tyrosine e teng peptide ea liteko empa e ile ea theoleloa sehlopheng sa methyl mefuteng ea DFT., joalo ka liketane tsa mahlakoreng tse sa hokahaneng tsa Val, Thr le Leu; N-terminal acetyl e entsoe e le foryl. Hoo e ka bang liathomo tsohle tsa mokokotlo hammoho le liketane tse lehlakoreng tsa Cys2, Cys5, Ser6 le Cys7 li ile tsa bolokoa.
Moeli o tšepahalang oa kaho ke ho feto-fetoha ha maemo. Peptide e setseng e robeli ka har'a buffer ha e na geometry e le 'ngoe ea khokahano; e fana ka mehlala e mengata, ke ka lebaka leo palo ea EPR e bonts'ang linaha tse peli tsa spin ho fapana le e le 'ngoe. Mefuta e boetse e fokotsehile 'me e rarolloa ka ho tsoela pele ka polarizable (e = 80.4) hammoho le metsi a mabeli a hlakileng - phekolo e utloahalang, empa eseng peptide e felletseng.
Sephetho se boletsoeng ke se tobileng. Kepisi ea acetyl e siiloe, masalla a nkeloa sebaka, kapa cysteine paterone scrambled fetola ligand set. Ha ho spectroscopy e tlase e fumanang teko e reriloeng ho tsoa ho peptide e nang le sete e fosahetseng ea ligand; e tla tlaleha feela ka molek'hule e fapaneng e nang le boima bo batlang bo lekana.
Hobaneng ha Peptide e Khutšoane e le Mohlala o Laolehang, Ha se Enzyme e Nolofalitsoeng
Potso eo bangoli ba ileng ba e botsa e ne e le moqotetsane: na tatelano e tlamang tšepe ea NHase ka boeona e na le tlhaiso-leseling e lekaneng ea lik'hemik'hale ho tlama Co(II) le ho etsa liphetoho setsing sa tšepe le peptide ka mor'a ho pepesehela dioksijene? Eo ke potso mabapi le tatellano, 'me tatellano ke seo peptide ea maiketsetso e fanang ka eona ntle le karolo e 'ngoe ea protheine.
Sethala se tšoanang se se se sebelisitsoe ho pholletsa le litšepe. Peptide e ts'oanang e tlama Fe e phahameng(II) setsi sa anaerobically, 'me ho pepeseha ha O₂ pele ho hlahisa sekhahla sa mahareng (S = 3/2) Fe(III) setsi se fetolelang ho low-spin Fe(III) ha li-cysteine tsa equatorial li oxidize. Mohaho o ka belesoang ka tšepe ebe oa cobalt, le ho baloa ke li-spectroscopies tse tšoanang, ke bethe ea teko e ka sebelisoang hape ho e-na le molek'hule o le mong.
Papiso e haufi ka ho fetisisa ea kantle ke peptide ea SODA (ACDLPCG), tatellano ea masalla a supileng ho tloha ho nickel superoxide dismutase. Ho Thuto ea Broering le basebetsi-'moho, Co-SODA oxidized ka mehato e 'meli rarollable: ka metsotsoana feela tšepe e ile ea lula e le paramagnetic (Co²⁺) ha sulphur K-edge XAS e bonts'itse thiolate e le 'ngoe e fetoletsoeng ho sulfinate; ka lihora tse ngata, ts'oaetso ea makenete le Co K-edge XAS e bonts'itse tšepe e ea ho Co³⁺. Thiolate ea bobeli ha ea ka ea e-ba oxidize ho ea pele, 'me ha ho na lintho tse rarahaneng tse entsoeng ka matla - ka lebaka la ho ba sieo ha axial thiolate.. Eo ke peptide e fapaneng e nang le tatellano e fapaneng ea oxidation, 'me ha ea lokela ho kopanngoa le liphetho tsa Ac-VCTLCSCY; boleng ba eona mona ke mohlala oa seo metallopeptide e ka se khonang le e ke keng ea e rarolla.
Lingoliloeng tsa tlhahlobo li fana ka li-counterweight. Tlhahlobo ea Shalev ea NMR ea tšepe-peptide e hlokomela hore li-peptide li tenyetseha ka ho lekana ho lumellana le li-geometri tse fosahetseng nakong ea lipalo tsa sebopeho, ho hlahisa diphetho tse fosahetseng tsa sebopeho, le hore mefuta e tsoang ho peptide e ka tlamahane ka kamano e tlase hobane ha se likarolo tsohle tse tlamang tse bolokiloeng. Seo ha se khang khahlanong le mokhoa oo; ke lona lebaka le etsang hore meralo ea computational le li-spectroscopies tse ngata li baloe hammoho. Mohlala o fosahetseng ka ho hlalosoa, tsela e hlakileng e u bolella ho feta holoenzyme e nepahetseng ka mabaka ao ho seng motho ea ka a khethollang.
Seo Cobalt a hlileng a se entseng: Linaha tsa Coordination le Spin
Tlas'a maemo a anaerobic, mahlaseli a bonahalang a UV a Co(II)-peptide complex e bonts'itse lihlopha tse matla tsa phetisetso ea ligand-to-metal ho 305 nm (e = 2800 M⁻¹cm⁻¹) le 355 nm (e = 2180 M⁻¹cm⁻¹), e abetsoe ho cysteine thiolate-to-Co(II) qoso phetiso. Hobane lithuto tse bapisoang tsa metallopeptide li beha thiolate-Co(II) tšebelisano e ka bang 900–1200 M⁻¹cm⁻¹, matla a hlokometsoeng a lumellana le li-thiolate tse peli tse tlanngoeng, ho siea cysteine ea boraro e fokola kapa e sa kopane. Lihlopha tse fokolang tsa ligand-field hoo e ka bang 615, 685 le 735 nm (ε ≈ 300–400 M⁻¹cm⁻¹) li matla ho feta Octahedral Co(II) ka tlwaelo o fana ka, ho supa palo ya kgokahanyo ya nne kapa hlano.
Ho hlahisa apo-peptide le Co(II) ha o ntse o shebile ho monya ho ~ 685 nm ho lekana sebaka se le seng se tlamang peptide ka 'ngoe, ka se bonahalang Kd,app ea 0.45 µM. Bangoli ba hlalosa ka ho hlaka hore na palo eo e ka jara eng: hobane khatello ea peptide e feta boleng bo loketseng haholo, titration e tiisa ka thata, hoo e ka bang tlamang ea stoichiometric empa ha e fane ka qeto e tiileng ea sub-micromolar dissociation constant. Theko e ka bapisoa le e tlalehiloeng bakeng sa Co-NiSOD le Co-SODA peptide complexes.
X-band EPR ho 12 K e rarolle matšoao a mabeli. Ea pele ke rhombic low-spin Co(II) tšobotsi ka g-litekanyetso tsa 2.30, 2.25 le 2.03; L-band EPR ho 1.3 GHz e ile ea putlama g-qhoaela ho lekana ho rarolla I = 7/2 sebopeho sa hyperfine ka ho hlaka haholoanyane. Ea bobeli ke pontšo e tlaase ea amplitude e phahameng-spin pakeng tsa 1,000 le 2,000 G e nang le lintlha tse fetotsoeng tse rarollotsoeng ka g' = 5.7 le 4.8, e tsamaellanang le S = 3/2 tsamaiso. Ho kopanya ho fane ka matla a lekanang a lekanang bakeng sa bobeli tlas'a maemo a anaerobic.
DFT e ne e rata geometry e sothehileng ea tetrahedral N2S2 bakeng sa mefuta e nang le spine e phahameng le khokahanyo e mehlano., jometry e sothehileng ea lisekoere-pyramidal bakeng sa mefuta e nang le mefuta e tlase, ka mefuta e tšeletseng e hlahisitsoeng ho pholletsa le maemo a mararo a ka khonehang a CysSH e sa nke lehlakore (Cys2, Cys5 kapa Cys7). E khomiloeng g-boleng ba mefuta e mehlano e hokahanyang (1.98–2,57) oela tumellanong e utloahalang le mefuta ea liteko ea 2.03-2.40, mme mohlala o nang le thiol e sa nke lehlakore ho Cys7 e hlahisitse sebopeho sa axial sa liteko g-tensor haholo-holo hantle. Tlhaloso ea bangoli - lijeometri tse ngata tse hokahanyang tse fumanehang ka har'a scaffold e tenyetsehang - ke tlhaloso e tšehetsoang ke computation le spectroscopy hammoho., eseng sebopeho se lekantsoeng.
Oxidation: Se Fetohileng, Seo se Neng se Ipehile, le se sa kang sa Rarolloa
Ho pepesetsoa dioxygen ho ile ha tima Co(II) EPR e bontša ka potlako, e se nang phetoho e itshetlehileng ka oksijene ka tekanyo e phahameng- le mefuta ea mefuta e tlaase e ka hlahlojoang pele matšoao a fela. Papiso le Co(II) ka buffer e thehile lintho tse peli: letšoao le phahameng-spin le tsoang ho cobalt ea metsi e ne e fapane le pontšo e rarahaneng, 'me ho pepeseha moeeng ha hoa ka ha lokolla cobalt ho peptide feela. Tahlehelo ea lets'oao e tsamaellana le oxidation ho EPR-silent low-spin Co(III), mme khanya e bonahalang ea UV e ile ea fetoha ka tsela e nepahetseng - liphetoho tsa d-d lipakeng tsa 600 le 750 nm e fokotsehile mme ea nyamela ha lihlopha tse ncha li hlaha hoo e ka bang 350, 465 le 620 nm, tšobotsi ea thiolate-to-Co(III) qoso phetiso.
Ka lehlakoreng la peptide, q-TOF LC-MS e bonts'itse matšoao a lumellanang le ho kenyelletsoa ha liathomo tse ka bang tharo tsa oksijene ka mor'a ho pepesehela moea.. Mefuta e nang le oksijene e ile ea eketseha ka matla a lekanyelitsoeng ho 10 le 15 h, le holimo-m/z litlhōrō tse ka 'nang tsa lumellana le li-adducts tsa metsi. Liphetoho li tsamaisana le cysteine oxidation ho sulfenic le sulfinic acid derivatives., liphetoho tse tšoanang tse fumanoang sebakeng sa sebaka se sebetsang.
Lintho tse peli tseo data ha li thehoe, mme pampiri e rialo. Mass spectrometry ha e thehe ka ho toba boemo ba oxidation ea setsi sa tšepe. 'Me tatellano ea oxidation ea tšepe le ligand e ke ke ea theoa ho tsoa ho data e teng - liphetho li bonts'a hore lits'ebetso tsena ka bobeli li etsahala nakong ea karabelo ea dioxygen., eseng e eang pele.
Litaolo li bohlokoa joalo ka sephetho. Tharollo ea peptide feela e ile ea lula e se na 'mala moeeng empa qetellong ea putlama, mohlomong ka sebopeho sa disulfide. Mefuta e nyane ea oksijene e hlahile le ntle le cobalt, e lumellanang le boemo bo tlase ba cysteine oxidation nakong ea ho tšoara sampole. Eo ke bopaki ba boithuto ba hore semelo sa motheo sa oxidation se lebelletsoe ho fapana le ho inahanela.
Bangoli le bona ba fana ka tlhokomeliso e lebelletsoeng pele: Ho pepesehela oksijene nako e telele ho ka hlahisa mefuta e mengata ea oxidized, e ka kenyelletsang tikoloho ea bis-sulfinic-acid e ts'oanang le e oxidized, e sa sebetseng NHase. Bakeng sa mang kapa mang ea eketsang nako ea ho incubation, seo ke ponelopele ea teko, eseng sephetho se tsitsitseng.
Netefatso ya Analytical: Ke Mokhoa Ofe O Arabang Potso Efe
Mokhoa o mong le o mong thutong ena o araba potso e le 'ngoe' me o foufetse E bitsoa Peptides ba bang. Ho bala pampiri ea metallopeptide ho bolela ho tseba hore na ke efe.
Ho monyela ka mokhoa o bonahalang oa UV ho araba hore na thiolate e tlameletsoe tšepeng le hore na ke tse kae, ka matla a sehlopha sa LMCT khahlano le ~900–1200 M⁻¹cm⁻¹ benchmark ea thiolate. Ha e khone ho rarolla boemo ba spin kapa geometry, 'me e ke ke ea u bolella hore na cysteine e tlameletsoe ke efe.
MCD le EPR li araba hore na li-spin states li teng le hore na li kae; matla a kopantsoeng a EPR a fane ka karo-karolelano e batlang e lekana e phahameng-/low-spin, le qeto ea L-band e netefalitse kabelo e tlase ka sebopeho sa hyperfine. Empa EPR ha e bone EPR-silent Co(III), kahoo ho nyamela ha pontšo ho lumellana le oxidation ntle le ho ba tekanyo e tobileng ea eona.
LC–MS e araba hore na ho na le oksijene e kae ho peptide le hore na seo se tsoela pele joang ha nako e ntse e tsamaea. Ha e bue letho ka hore na sebabole se li jara, mme ha ho letho ka boemo ba oxidation ea tšepe. Meeli e akaretsang ea oxidative-modification mass spectrometry e ngotsoe hantle - liphetoho tse khethehileng tsa mosebetsi hlokomela hore ho fana ka phetoho ho masala a itseng hangata ho hloka tlhaloso ea MS/MS, le hore ho lekanya mefuta ea oxidized khahlano le unoxidized ho tsoa ho li-ion chromatograms ho nka ionization e tšoanang le katleho ea phetisetso..
DFT e araba hore na ke mefuta efe ea khokahanyo e utloahalang ka mokhoa oa jiometri le ka matla, empa feela bakeng sa mehlala e fokolitsoeng e hlileng e entsoeng computed - eseng bakeng sa peptide e tletseng tharollo.
Ka lehlakoreng la synthesis, litlhahlobo tsa boithuto ka botsona lia ruta: mahala thiols ka 0.76 MM apo-peptide stock e netefalitsoe ke tlhahlobo ea Ellman, le molar absorptivity ka 280 nm (1,096 M⁻¹cm⁻¹) e ile ea thehoa ho tloha mokhoeng o tloaelehileng e le hore mahloriso a ka tsejoa ho e-na le ho nahanoa. Hape ha se mokhoa oa ho khetholla metalloprotein, 'me bobeli ke lintho tse hlokahalang bakeng sa e le' ngoe.
Molao o sebetsang: ha ho mokhoa o le mong lethathamong lena o lekaneng. Tlaleho ea sebopeho e fanang ka e le 'ngoe feela ha e so hlahise metallopeptide.
Bohloeki, Boitsebiso, Content le Oxidation State Ke Lipotso Tse 'ne Tse Fapaneng
Mohlala e ka ba 98% e hloekile ka HPLC mme e ntse e ka se sebelisoe bakeng sa Co(II) teko. Palmitoyl Pentapeptide-4 Ho bonahala ho makatsa ho fela hang ha lipotso tse 'nè li arotsoe.
Bohloeki ke karolo ea sebaka se lekanyelitsoeng ke HPLC. E bolela hore na ke lintho tse kae tse monyang mahlaseli a UV e le tlhoro ea mantlha. Ha e bolele hore na tlhoro eo ke efe, 'me ha e khetholle cysteine e fokolitsoeng ho tloha ho e seng e ntse e na le oxidized haeba ka bobeli elute hammoho.
Boitsebiso ke netefatso ea sebopeho sa orthogonal. Mona seo se bolela mass spectrometry, 'me LC-MS ea boithuto e bontša hore na ke hobane'ng ha tekanyo e le 'ngoe ea boima e na le meeli: hang ha li-adducts tsa oksijene li fetola boima 16 Ka oksijene, peptide e nang le oxidized le peptide e fapaneng li ka ferekanngoa ntle le haeba qeto ea boima le moelelo oa chromatographic li lekane..
Litaba, kapa peptide ea net, ke boima bo leka-lekaneng - peptide plus counterion, metsi le letsoai. Ho bohlokoa ka kotloloho mona hobane stoichiometry ea titration e tlamang e ipapisitse le ho tseba hore na ha e le hantle peptide e kae ka har'a cuvette.. Khatiso e baloang ho tloha ho phofo e lekantsoeng ntle le qeto ea litaba e ka fokotsoa ka ho lekana ho fetola mothinya o tlamang..
Oxidation state ke thepa ea li-cysteine le tšepe tseo HPLC kapa boima bo sa fetoheng bo sa tlaleheng ka mokhoa o hloekileng.. A lyophilized phofo ke hore 98% pure by HPLC e kanna ea ba le karoloana e nang le moelelo ea li-cysteine tse seng li na le oxidized ho mefuta ea sulfenic kapa disulfide ho tloha ho ts'oaroa le lyophilization.. Seo se ne se tla hlahisa e le boima bo phahameng hanyane, nako e khutsitseng ea ho boloka, kapa feela e fokotsehile mahala-thiol titer ke Ellman's. Tlhokomelo ea thuto ea mefuta e nyane ea oksijene ha ho se na cobalt, e amahanngoa le mohlala oa ho tšoara, ke bopaki ba hore semelo sena ke sa nnete.
Ho latela molao oa qeto: bakeng sa mosebetsi oa metallopeptide o nang le oxidation, hlakisa litaba tsa free-thiol le profil ea oxidation e le mekhoa ea tokollo, eseng feela bohloeki ba HPLC le tlhahlobo ea bongata. Melao-motheo ea tlhahlobo ea lintlha tse joalo ke eona e boletsoeng Ke Q2(R2), e sebetsanang le boitsebiso, bohloeki le tlhahlobo joalo ka litšobotsi tse ikhethang tsa ts'ebetso ho fapana le tse ka feto-fetohang.
Tšebeliso ea Metal le Phallo ea Mosebetsi oa Oxygen-Sensitive Workflow
Seo phuputso e se tlalehang se totobetse 'me se lokela ho kopitsoa hantle. Mehlala eohle ea peptide e ile ea lokisoa tlasa maemo a anaerobic ka lebokoseng la liatlana la Coy le mahlakore a bonolo. Peptide e ile ea qhibiliha ka degassed 10 mM N-ethyl morpholine (HA HO) buffer ka pH 8.0, ho fana ka se senang mmala 0.76 mM apo-peptide stock e neng e qhibiliha mme ea netefatsoa bakeng sa li-thiols tsa mahala ke tlhahlobo ea Ellman. E 'ngoe e lekanang le CoCl₂·6H₂O, e qhibilihisitsoeng ka har'a buffer e tšoanang ka pH e tšoanang, e kenyellelitsoe ho peptide e sirelelitsoeng.
Se latelang ho tsoa ho k'hemistri ea khokahano ho fapana le ho tsoa pampiring se lokela ho hlalosoa e le mabaka a moralo. Taelo ea ho eketsa le karo-karolelano ea tšepe-to-peptide e etsa qeto ea hore na e reriloe 1:1 mefuta e rarahaneng kapa motsoako o etsa; ke ka lebaka leo titration e neng e tsamaisoa ho fapana le ho nahanoa. Khetho ea buffer e bohlokoa hobane li-buffer tse hokahanyang li qothisana lehlokoa bakeng sa tšepe, 'me NEM e khethiloe e le sesebelisoa sa morpholine se sa kopantseng. 'Me pula ea peptide feela e hlahisoang ke moea e bolela hore sebopeho sa disulfide ke tsela e hlolisanoang e tlosang peptide tharollong pele e ka tlama cobalt - mocha oa tahlehelo o lekanyang ka nako ea ho ts'oara.. Pancreatic Polypeptide
Lekhalo le tšepahalang: pampiri ha e tlalehe ts'ebetso e hlophisitsoeng ea karo-karolelano ea tšepe, tatellano ya boitsebiso ba tlatsetso kapa buffer. 'Mali ea eketsang sena o atolosa mokhoa ona, ho se kopitse, 'me ba lokela ho nka e' ngoe le e 'ngoe ea mefuta eo e le ntho e ka netefatsoang tsamaisong ea bona ho e-na le tlhokahalo e akaretsang.
Seo R&Moetapele oa D o Lokela ho Botsa Pele a Komisa Metallopeptide e Senyehileng ka Oxidation
Lipotso tse ka tlase ke tsona tse etsang qeto ea hore na metallopeptide e rekiloeng e tšehetsa teko. E 'ngoe le e' ngoe e arajoa moqoqong o khethehileng.
Tatelano le phetolelo. Na tatellano e nepahetseng - ho kenyelletsa le N-terminal acetyl le masala afe kapa afe a sa tloaelehang - a tlalehiloeng e le rekoto e laoloang ke mofuta, mme setifikeiti se se bolela? Ho hlophisa tatellano ntle le mofuta o sa fetoheng ke sesosa se atileng haholo sa teko ea metallopeptide e sa hlahisoang hape..
Boemo ba cysteine. Likahare tsa free-thiol ha li lokolloa ke life, ka mokhoa ofe, le hore na ke mefuta efe ea oxidation e boletsoeng e le meeli? Ena ke potso eo boithuto ba boithuto ba ho sebetsana le oxidation bo etsang hore e se ke ea buisanoa. Moetsi oa Acetyl Hexapeptide-1
Boitsebiso. Na ho na le netefatso ea orthogonal e fetang tekanyo e le 'ngoe ea boima, 'me na spectrometry ea boima e rarolla li-adducts tsa oksijene? Mokhoa o ke keng oa arohana +16 Da ho tsoa ho motsoali ha e khone ho tlaleha boemo ba oxidation.
Litaba. Na litaba tsa peptide tsa net li tlalehiloe ka thoko ho bohloeki ba HPLC, mme ke foromo ea counterion e boletsoeng? Stoichiometry ka titration e tlamang e itšetlehile ka ea pele; boitšoaro ba buffer le tlhōlisano ea tšepe e ka itšetleha ka ea bobeli.
Ho tshoara. Ke lintho tse fanoang ka mokhoa le sephutheloana se tšehetsang phetoho ea anaerobic, mme na litokomane li bua joalo? Phofo ea lyophilized e loketse, empa mohato oa tsosoloso ke moo oksijene e kenang teng.
Sephutheloana sa tlhahlobo. Ke li-chromatogram tse tala le spectra li fanoa ka li-identifiers tsa mekhoa - kholomo, gradient, bolelele ba maqhubu, mefuta e mengata - ho e-na le tafole ea kakaretso? Tafole ea kakaretso e ke ke ea hlahlojoa hape ha sephetho se bonahala se fosahetse.
Sekala. Haeba mohlala o fumana mangolo ho tloha ho li-milligrams ho ea ho lihlopha tse kholoanyane, na ho na le motheo o boletsoeng oa ho lebella hore profil ea oxidation e tšoarelle? Tatelano e sa utloahaleng ea oxidation ke moo liphetoho tsa ts'ebetso li hlahang pele.
Morekisi ea sa khoneng ho araba potso ea boemo ba cysteine o u bolella ho hong ka bokhoni ba tlhahlobo ka morao ho setifikeiti.. Eo ke karabo e le 'ngoe e rutang ka ho fetisisa lethathamong.
Moo Mohlala o Emisang
Peptide ha se enzyme. Ha e na β-subunit, protheine ea activator, sebaka sa bobeli sa khokahanyo le tsela ea kholo ea subunit-swapping. Papiso ea thuto ho sistimi ea matsoalloa ke papiso ea spin state le ligand modification, eseng ka ts'ebetso ea catalytic - ha ho na nitrile hydration e lekantsoeng mona.
Taelo ea tšepe khahlanong le ligand oxidation e ntse e sa rarolloe tsamaisong ena, joalo ka ha bangoli ba bolela. Nako e sa fetoheng ke boleng bo bonahalang bo lekantsoeng tlas'a maemo a sa lumelleng qeto e matla ea sub-micromolar.. Mefuta ea DFT e fokotsoe ebile e lula e rarolloa. 'Me k'hemistri ea oxidation e bonoang ke se etsahalang ho sepheo se ikhethileng - polelo e mabapi le ts'ebetso ea mantlha ea motif., eseng tseko mabapi le tatellano ea kholo ea intracellular.
Ha ho le e 'ngoe ea sena e fokolisang sephetho. E hlalosa hore na sephetho se tšehetsa eng: hore tatellano e bolokiloeng feela e na le tlhaiso-leseling e lekaneng ea lik'hemik'hale ho tlama Co(II) le ho kena ka har'a tšepe e kopantsoeng le cysteine oxidation ka ho pepesehela dioxygen.
Qetello
Peptide ea masala a robeli e bohlokoa hobane e fetola potso e ke keng ea qojoa ea kholofalo hore e be sete sa mefuta e lekantsoeng - nomoro ea khokahano., boemo ba spin, palo ea oksijene, boemo ba mahala-thiol - e 'ngoe le e' ngoe e na le mokhoa o tlalehang ka eona le sebaka se foufetseng se ngotsoeng. Ho fumana hore motif e bolokehileng feela e tlama Co(II) 'me e kopana le tšepe le cysteine oxidation moeeng ke polelo e mabapi le tlhahisoleseding ea lik'hemik'hale ea tatellano..
E tšepahala feela joaloka botšepehi ba tatellano ea mohlala, boemo ba oxidation le litokomane tsa tlhahlobo. Bakeng sa lihlopha tse hahang holim'a mofuta ona oa mohlala, mohato o latelang ke puisano e tobileng ho e-na le taelo ea ho reka: hlalosa litaba tsa mahala-thiol, meeli ea oxidation, net peptide content le sephutheloana sa data e tala pele milligram ea pele e etsoa. Liphetoho tsa MOL e fana ka li-peptide tsa tloaelo tse nang le litokomane tsa HPLC le MS, boikhethelo ba litaba tsa peptide le tlhahlobo ea ho hanyetsa, le ts'ebetso e lumellanang le anaerobic ha e kopa; matla ao a amana le lipotso tse boletsoeng ka holimo, 'me babali ba lokela ho lekanya thahasello eo ea khoebo ha ba hlahloba tataiso ea khetho ea bafani.
MOL Changes ke saense ea peptide R&D ho hlophisa le ho fana ka li-peptide tsa tloaelo le lits'ebeletso tsa tlhahlobo ea tlhahlobo. Babali ba lokela ho lekola thahasello ena ea khoebo ha ba lekola tataiso ea khetho ea barekisi sengolong sena.
Mohloli oa mantlha: Thuto ea mantlha ea cobalt metallopeptide.
