SNAP-8

SNAP-8 相关研究

根据对动物进行的科学研究，研究人员确定 SNAP-8 是通过增强 SNAP-25 N 端的调节特性来发挥作用的。这种增强可使 SNARE 复合物保持稳定状态；因此，SNARE 复合物可使 SNAP-25 保持稳定。此外，研究人员还发现 SNAP-8 可抑制儿茶酚胺的释放；儿茶酚胺是一类神经递质，是氨基酸酪氨酸的衍生物，含有胺和儿茶酚基团。这种抑制作用也在通过激活 Ca2+ 离子调节肌肉收缩的稳定过程中发挥作用。

在动物实验对象身上进行的科学实验表明，SNAP-8 与乙酰六肽-3（SNAP-25 片段的肽衍生物）所产生的活性相似。这两种肽的结构不同，SNAP-8 是八肽，而 SNAP-25 是六肽。根据动物实验的结果，研究人员发现 SNAP-8 的稳定功能比 SNAP-25 更有效。

研究人员利用动物进行了大量研究，结果表明 SNAP-8 的关键作用是抑制肌肉收缩。凭借其抑制特性，SNAP-8 可确保肌肉达到并保持稳定的平衡水平。研究人员指出，之所以能达到这种效果，是因为 SNAP-8 影响了刺激平衡的神经递质的释放，因为它能更有效地释放这些递质。

研究人员对 SNAP-8 的安全性进行了研究，到目前为止，他们还没有观察到动物试验对象服用 SNAP-8 后出现任何明显的负面影响。在使用实验鼠进行的实验中，研究人员没有观察到正常剂量的 SNAP-8 会导致急性口服中毒。在其他一些基于动物的研究中，研究人员确定该肽不支持柠檬毒性或遗传毒性的体外研究。此外，研究人员还观察到，SNAP-8 不会带来任何与眼部刺激有关的副作用。为确定 SNAP-8 的安全性而进行的大部分测试都是在体外和体内进行的。

研究人员还进行了临床试验，以确定 SNAP-8 用于化妆品的安全性或毒理学特征。下面的临床试验只是体外试验，是在意大利的人类志愿者身上进行的。研究人员使用的 SNAP-8 粉末溶液浓度由研究人员预先确定。柠檬毒性测试的研究结果表明，没有证据表明 SNAP-8 会对人体真皮成纤维细胞产生柠檬毒性。在所检测的浓度下，研究人员也没有观察到人类表皮角质细胞出现任何柠檬毒性迹象。在艾姆斯试验（遗传毒性试验）中，研究人员在检测条件下未观察到任何遗传毒性。SNAP-8 还根据眼刺激性（NRU-中性红吸收试验）确定该化合物对眼睛无刺激性。此外，在进行 3T3 NRU 光毒性测试时，SNAP-8 也未显示出光毒性。这些结果表明，SNAP-8 具有显著的毒理学特征，可以安全使用。

还对动物试验对象进行了体内试验。在急性口服毒性试验中，研究人员得出结论：DL₅₀>因此，在任何测试剂量下，SNAP-8 均未显示出任何急性口服毒性迹象。根据《危险物质指令 67/548/EC》的规定，任何新化学实体都必须进行急性口服毒性测试。此外，还进行了体内测试，以确定皮肤致敏性（Hpeoallergenicity）。研究人员对 50 名年龄在 18 岁至 70 岁之间的人类志愿者进行了人体重复伤害贴片测试（HRIPT）。他们观察到，0.05% 的 SNAP-8 溶液没有对任何研究对象产生致敏作用。因此，可将其归类为低敏性。

研究人员还进行了体外试验，以评估 SNAP-8 在抑制 SNARE 复合物形成方面的功效。研究人员进行了一项体外试验，以监测重组 SNARE 蛋白复合物的形成和热稳定性，从而评估小肽对 SNARE 复合物稳定性的影响程度。该体外测试方法的基础是评估在SNAP-25 N-端结构域和野生型蛋白之后取样的小肽对其与突触素和语素形成SNARE复合物的拮抗竞争作用。研究结果表明，从 SNAP-25 N 端获得的短肽往往会与本地蛋白竞争，并通过影响其稳定性来抑制 SNARE 复合物的形成。关于 SNARE 复合物的形成，研究结果如下：对照组--约 95%，热--约 5%，阿基瑞林--约 50%，DD02116--约 35%，SNAP-8--约 30%。

研究人员还评估了对绒毛膜细胞儿茶酚胺释放的调节。他们通过监测神经递质去甲肾上腺素和肾上腺素来确定儿茶酚胺的释放是如何受到抑制的。他们使用三价肾上腺素/去甲肾上腺素和 SNAP-8 培养绒毛膜细胞。然后，他们使用液体闪烁计数法确定细胞的总含量和儿茶酚胺的释放量。在八肽 SNAP-8 的 µM 浓度下，他们观察到这两种神经递质受到了明显的调节，这清楚地表明了 SNAP-8 强大的抗皱特性。

在另一项研究中，研究人员比较了四种合成肽的抗皱活性单位（AAU）与儿茶酚胺抑制作用的关系。₅₀ 值。然后，他们对与抗皱粉末直接相关的外泌阻断特性进行了量化和对比。IC₅₀ 是抑制 50% 儿茶酚胺分泌的活性浓度（即 50% 抑制浓度）。较低的 IC₅₀ 这意味着抑制 50% 分泌所需的肽量更少，化合物的活性更高。根据研究结果，阿基瑞林 IC₅₀ 为 110µM，AAC 为 0.0028；SNAP-8 的 IC₅₀ 为 55µM，AAC 为 0.0056；ESUP E IC₅₀ 为 0.310 µM，AAC 为 1；BoNT A 的 IC₅₀ 为 ~0.0260 µM，AAC 为 12。尽管 ESUP E 被认为是所有合成肽中对儿茶酚胺抑制作用最强的一种，但由于它是一种长肽，不适合用于化妆品。因此，在确定 AAUs 时将其作为参考。

研究人员还评估了神经元细胞培养物对谷氨酸释放的调节作用。去极化神经元细胞对谷氨酸释放的抑制是一种公认的细胞检测方法，用于确定物质/化合物对抑制神经元外泌的潜在活性。当海马培养物的去极化受到 K⁺ 在细胞外 Ca²⁺ 导致谷氨酸的释放。谷氨酸恰好是神经系统中最具兴奋性的神经递质。研究人员将神经元原代细胞培养物在三尖谷氨酸中培养 3 小时，使其含有放射性标记的谷氨酸。然后，他们冲洗掉多余的谷氨酸，并在 37ºC 温度下将细胞培养物与测试化合物一起培养 1 小时。研究人员观察到，放射性标记谷氨酸的释放是在生理缓冲液 75mM KCI/2mM CaCl2 诱导的去极化作用下开始的，时间为 10 分钟，温度为 37ºC。在研究中，未经处理的神经元培养物为阴性对照，而用肉毒杆菌毒素 A（BoNT A）处理的神经元培养物为阳性对照。研究人员取回培养基，使用闪烁计数器测量放射性标记谷氨酸的数量。他们得到的数值是 6 次测定的平均值。这六次测定包括对照组、SNAP-8（0.75mM）、Leuphasyl（0.75mM）、SNAP-8 + Leuphasyl（均为 0.75mM）、SNAP-8（1.5mM）、Leuphasyl（1.5mM）和 BoNTA（50nM）。通过测量神经元释放的谷氨酸，研究人员能够对比 SNAP-8 和 Leuphasyl 的体外活性。联合添加 SNAP-8 和 Leuphasyl 后，谷氨酸释放的抑制潜能高于单独添加两种产品时的抑制潜能。研究人员得出结论，这两种肽在体外具有协同作用，它们的作用机制是独立的，其效果可以叠加。

在健康志愿者身上进行了体内抗皱测试。研究人员对含有 10% SNAP-8 溶液的面霜进行了皮肤地形分析，以测定其功效。研究人员在 17 名健康女性的眼睛周围区域采集了硅印记。硅胶印记是在测试开始前和使用该药膏 28 天后进行的，在整个研究期间，该药膏每天使用两次。使用共焦激光扫描显微镜对收集到的硅胶印记进行分析，以确定治疗前后皮肤表面的变化情况。经过 28 天的治疗，观察到皱纹深度明显减少，这证明了生化机制假设。研究人员将此次测试结果与之前对 10 名女性志愿者使用含有 10% 阿基瑞林溶液的面霜进行的类似测试结果进行了比较。结果显示，安慰剂的除皱效果为-2.99%，阿基瑞林的除皱效果为-27.05%，而 SNAP-8 的除皱效果为-34.98%。根据研究结果，10% SNAP-8 溶液的最大除皱值为 -63.13%。根据体外测试结果，研究人员得出结论，从 SNAP-25 序列中提取的两个额外氨基酸能够适度提高抗皱活性。