Тиҙ яуап
You already have a platform reversed-phase gradient that carries your screening and trending work. The question is whether it can also carry a release, compara…
Ниндәй платформа ВЭЖХ ысулы өсөн GLP-1 бысраҡлыҡты анализлау ысынында үлсәй — һәм нимә ул түгел .
Платформа кире фазалы градиент пептидтарҙы башлыса дөйөм гидрофоблыҡ һәм ҡулайлы поляр булмаған өҫтө буйынса айыра, эҙмә-эҙлеклелек үҙенсәлеге буйынса түгел, тимәк, бер ҡалдыҡ алмаштырыу йәки позицион изомер биологик эшмәкәрлекте ныҡ үҙгәртә ала, шул уҡ ваҡытта етештереү үҙгәрештәрен һаҡлау бәләкәйерәк пик киңәйтеү йәки адсорбция үҙгәрмәй . (Һыуҙар’ пептид ысулы-үҫеш праймер .). Нимә ысулын үлсәй, күпме пептид-содержащий материал элюирует тәҙрә .. Нимә ул үлсәмәй, был материалдың ниндәй молекулаһы.
Асыҡлау сиген берләштерә. сәғәттә асыҡлау. 214 нм пептидтың амид бәйләнештәренә яуап бирә һәм, тимәк, асылда бөтә пептидтарҙы үҙ эсенә алған төрҙәргә, шул иҫәптән эҙмә-эҙлеклелек варианттарына һәм ҡыҫҡартыуҙарға, яуап менән күпкә аҙыраҡ бәйле хуш еҫле составына ҡарағанда 280 нм; 280 нм башлыса Trp асыҡлай, Тир һәм Фе һәм улар етешмәгән бысраҡтарҙы етешһеҙ күрһәтә ала (Һыуҙар’ пептид ысулы-үҫеш праймер .). А 280 нм-тик ысул, шуға күрә асыҡлау һуҡыр нөктәһен йөрөтә, тип а 214 нм ысулы юҡ.
Дүрт дәғүә пептид ысулы йөрөтөү өсөн һорала .
Сафлыҡ ., шәхсиәт, йөкмәткеһе һәм тотороҡлолоғо дүрт айырым дәғүә, һәм бер раҫланмаған хроматографик пик-майҙан һөҙөмтәһе дүртәүһен дә асыҡламай. Таҙалыҡ — интеграцияланған майҙандың күпме өлөшө төп түбәгә ҡарағанын сағыштырмаса үлсәү, һәм ул үҙенсәлек тураһында бер нәмә лә әйтмәй: өлгө уҡый ала 99% ВЭЖХ ярҙамында таҙа һәм һаман да дөрөҫ булмаған молекула булырға. Үҙенсәлек масса ярҙамында нығытыла ., пептид картаһы, аминокислоталар анализы йәки ЯМР, һәм ЭМА синтетик-пептид йүнәлеше сығарыу ваҡытында асыҡлау өсөн кәмендә ике ортогональ ысул тәҡдим итә, менән заявитель өсөн яуаплы күрһәтеү комбинацияһы бер һүҙһеҙ раҫлай эҙмә-эҙлеклелек.
Йөкмәткеһе — унда булған пептидтың күләме, Ғәҙәттә эталон стандартына ҡарата күрһәтелә һәм ҡаршы ион өсөн төҙәтелә, һыу һәм тоҙ .. Тотороҡлолоҡ ысулының үҙенсәлеге булып тора, шул тиклем молекула .: I Q1A(R2.) тотороҡлолоҡто өйрәнеүҙе талап итә, раҫланған тотороҡлолоҡто күрһәтеүсе процедураларҙы ҡулланыу һәм һаҡлау ваҡытында үҙгәрештәргә бирешкән атрибуттарҙы тикшерергә, стресс-тест менән деградация продукттарын һәм юлдарын асыҡлау (I Q1A(R2.)). Таҙалыҡ ысулы, бер ҡасан да күрһәтелгән хәл итеү өсөн мәжбүри-деградация төрҙәре түгел, тотороҡлолоҡ күрһәтеүсе ысул ., нимә генә уның системаһы яраҡлылыҡ һөҙөмтәһе әйтә.
Ни өсөн структур яҡтан оҡшаш GLP-1 пептидтары һәм уларҙы ҡушылмалары дөйөм кире фазалы градиентты еңә
GLP-1 пептидтары араһында структур оҡшашлыҡ мотлаҡ рәүештә оҡшаш хроматографик тәртипкә тәржемә итмәй, был ни өсөн платформа ысулы ҡушма-специфик оптимизация талап итеүе мөмкин (Термо Фишер’s аргумент, структур оҡшашлыҡ хроматографик тәртипте күҙалламай). Шул уҡ сығанаҡ хәбәр итеүенсә, күсмә фаза составы стационар фаза химияһына ҡарағанда ҡушылмаларҙы айырыуға ҙурыраҡ йоғонто яһаған ., һәм был ТЖК-содержащий күсмә фазалар йыш ҡына яҡшыраҡ пик формаһы һәм асыҡлыҡ бирә, ә ҡырмыҫҡа кислотаһы.
Бағана химияһы яуапты үҙгәртә, хатта градиент булмағанда ла. Бер ысул һәм градиент буйынса, CORTECS Премьер С18+ һәм ACQUITY Премьер пептид CSH С18 иң уникаль лираглутид варианттарын айырып алды, ә CORTECS Премьер C18+ һәм ACQUITY Премьер CSH Фенил-Гексил иң үҙенсәлекле семаглутид варианттарын айырып ала; 18-се пептид CSH C18 лираглутидты семаглутидҡа ҡарағанда яҡшыраҡ айыра һәм фенил-гексил колонкаһы киреһенсә эшләй (Һыуҙар’ бағана-һайлау өсөн сағыштырыу лираглутид һәм семаглутид .). Бер генә лә иң яҡшы бағана юҡ ., исемле аналитик өсөн иң яҡшы бағана ғына.
Һайлап алыусанлыҡты еңгән бысраҡлыҡ кластары
Ҡатнашмалар кластары молекуланы күпме үҙгәртеүе һәм был үҙгәрештең кире фазалы градиентҡа күренеүе менән айырыла.. Түбәндәге масса сменалары өсөнсө яҡтан килгән пептид һынау документы һәм химия һүрәтләү ., компендиаль сик түгел.
|
Бысраҡлыҡ класы |
Масса күсеүе |
Ни өсөн кире фаза көрәштәр |
|---|---|---|
|
Окисланыу (Осрашты, Трп, Cys) |
+16 Һәм |
Бәләкәй полярлыҡ үҙгәреше; йыш ҡына ата-әсәгә яҡын йәки аҫтында элюирлана |
|
Икеләтә окисланыу |
+32 Һәм |
Икенсе окисланыу ваҡиғаһы, кумулятив һаҡлау сменаһы |
|
Деамидациялау (Асн→Асп, Gln→Glu) |
Хобт муфтаһы +1 Һәм |
Ата-әсә менән яҡын изобарлы; классик коэлюция осрағы |
|
N-терминаль циклизация (Gln→пироГлю) |
-17 Эйе |
Пептидтар менән тәьмин итеүселәр Зарядлы N-терминалдың юғалыуы һаҡлауҙы нескә үҙгәртә |
|
Юйыу Пептидтар эҙмә-эҙлелек |
Ҡалдыҡ һәм модификация юҡлығына бәйле |
Юҡ ҡалдыҡ; ата-әсәгә ҡарағанда күберәк йәки аҙыраҡ гидрофоб булыуы мөмкин |
|
Ҡалдыҡ һаҡлаусы төркөм (tBu, Пбф, Трт) |
Уның молекуляр формулаһынан таҙа һаҡланған төркөмдө иҫәпләгеҙ |
Тулы булмаған депротекциянан гидрофоб билдә |
Һайлап алыу берҙән-бер уңышһыҙлыҡ режимы түгел .. Пептид ВЭЖХ ысулдары шулай уҡ адсорбция һәм кремнийға специфик булмаған бәйләнеш аша уңышһыҙлыҡҡа осрай., ҡалдыҡ силанолдар, металл өҫтө, фрит, трубалар, флакондар һәм фильтрҙар; рН ярҙамында агрегация һәм яуым-төшөм аша, ион ныҡлығы, температура, иреткес, концентрацияһы йәки туңдырыу-иретеү; ҡойроҡ етештереүсе икенсел стационар фазалы үҙ-ара тәьҫир итешеү аша, ярылыу йәки иретмәү; аша металл аша адсорбция бигерәк тә Asp- һәм составында Glu булған төрҙәре; тапшырыу һәм хәтер эффекттары аша; һәм колонна өҫтөндәге деградация аша (тикшерелгән пептид ВЭЖХ етешһеҙлек режимдары). Ысул һәр һайлап алыу тикшерергә мөмкин һәм һаман да системаға аналит юғалта.
Температура һәм күсмә фаза бер яҡлы рычагтар түгел .
Колонка температураһын күтәреү рефлекс нығытыу булып тора, һәм ул ышаныслы түгел. 100-ҙән башлап колонна температураһын арттырыу. 30 °C -тан . 60 °C ике тирзепатид ҡушылмаларҙы хәл итә, улар түбән температурала бергә элюирлана, әммә Hypersil GOLD C4 колонкаһы һәм ТЖК-содержащий күсмә фазалар менән семаглутидта бер үк температураның артыуы асыҡлыҡты кәметә һәм ике ҡушылманы бергә элюирлай (Термо Фишер’s RPLC-УФ оптимизация өйрәнеү өсөн семаглутид һәм тирзепатид). Эффект йүнәлеше колонна һәм күсмә фаза комбинацияһына бәйле ., дөйөм ҡағиҙә буйынса түгел.
Һыуҙар температураһын өйрәнеү бер ысул сиктәрендә бер үк монотон булмаған тәртипте күрһәтә: °C температура үҙгәрештәре колонка етештереү селективлыҡ айырмаһы, лираглутид өсөн бысраҡ төрҙәренең асыҡланыуына йоғонто яһай, тирзепатид һәм семаглутид, бер тәнҡитле пар араһында иң яҡшы асыҡлыҡ менән (түбәләре 9 һәм 10) сәғәттә 55 °C һәм был ике төр бергә элюциялана 65 °C (а Гобт синтезы Һыуҙар өйрәнеү температураға бәйлелек GLP-1 айырыу). Биш градуслы үҙгәреш тәнҡитле парҙы хәл ителгәндән бергә элюциялауға күсерҙе, Ҡайһы лабораториялар араһындағы күсермәләрҙең йәшәү өсөн тейешле маржаһы.
Ҡайҙа УФ майҙаны проценты булыуҙан туҡтай оборонительный таҙалыҡ һаны
Майҙанды нормалаштырыу оператив таҙалыҡ сараһы булып тора .. Уны масса йәки моляр өлөшөнә үҙгәртеү тейешле яуап-фактор фараздарын талап итә ., асыҡлауҙы ҡаплау һәм интеграциялау. Төрлө ҡалдыҡ составы йәки ярлыҡтар төрлөсә яуап бирергә мөмкин, һәм асыҡланмаған йәки бергә элюциялаусы төрҙәр артабан баһалауҙы талап итә.
Асыҡлау тулҡын оҙонлоғо хәл итә, ниндәй ҡушылмалар иҫәпләүгә инә бөтөнләй. Сөнки 280 нм башлыса Trp асыҡлай, Тир һәм Фе, Ҡалдыҡтары булмаған бысраҡлыҡ был тулҡын оҙонлоғонда етешһеҙ күрһәтелгән йәки күренмәгән булыуы мөмкин, шул арала 214 нм асылда бөтә пептидлы төрҙәргә яуап бирә (Һыуҙар’ пептид ысулы-үҫеш праймер .). Ҡаршы уҡыу ЭМА талап, ысулдары өсөн яраҡлы булырға 0.1% отчет сиге, а 280 нм-тик ысул йөрөтә асыҡлау айырмаһы өсөн ароматик булмаған пептид-ҡағылышлы ҡушылмалар, тип йүнәлеш ғәфү итмәй ..
Коэлюция эҙемтәһе
ЭМА йүнәлеше бергә күҙәтелгән бысраҡтарҙы бер пик һәм мөмкин булған бойондороҡһоҙ ысулдар кәрәклегенә мөрәжәғәт итә .. Тейешле квалификация баһаһын үлсәү комбинациялы кимәлгә ҡулланыу .; интерпретацияламағыҙ 1.0% айырым шәхестәрҙе күҙ уңынан ысҡындырыу рөхсәте булараҡ йәки отчет биреүҙең сиген үҙгәртеү булараҡ.
Практик осраҡ яҡшы документлаштырылған .. Пептид уҡый ала 98% таҙа ВЭЖХ ярҙамында, ә а +16 Да юлдаш түбәһе, өлөшләтә окисланыу төп пик менән бергә элюциялана, УФ-ҡа күренмәй һәм масса буйынса асыҡ күренә. LC-UV/MS эше термик көсөргәнешле экзенатид ете пик тапты һиҙелерлек күтәрелгән пик майҙаны, масса детекторы менән +16 Да окисланыу айырмаһы −1,3 минут тотоу-ваҡыт сменаһы һәм ферментһыҙ ярылыу фрагменты 1,3 минут 3,254.1 Һәм (LC-UV/MS бысраҡлыҡты профилләштереү көсөргәнешле экзенатид). УФ эҙе генә таҙалыҡ һаны тураһында хәбәр итер ине, тип масса мәғлүмәттәре ҡапма-ҡаршы килә.
Нисек квалификациялы платформа ысулы өсөн маҡсатҡа ярашлы яңы эҙмә-эҙлеклелек һеҙ уға таянғансы
Квалификация тәғәйенләнгән маҡсаттан башлана ., ысулынан түгел. ICH Q14 аналитик маҡсатлы профилде аналитик үлсәүҙең тәғәйенләнгән маҡсатын һәм көтөлгән етештереүсәнлек критерийҙарын һүрәтләгән етештереүсәнлек характеристикаларының перспективалы йыйынтығы булараҡ билдәләй ., һәм тип белдерә, АТФ аналитик технология һайлау драйверҙары һәм йәшәү циклы дауамында һаҡлана, процедураны тәьмин итеү өсөн тәғәйенләнгән маҡсатҡа яраҡлы булып ҡала . (ICH Q14’s аналитик маҡсатлы профиль). Яңы эҙмә-эҙлеклелек өсөн АТФ яҙығыҙ тәүҙә, Һуңынан уға ҡаршы платформа ысулын һынап ҡарағыҙ.
Өс ҡатламлы дәлилдәр көтөү шунан килә. Скрининг һәм характеристика һығылмалылыҡ һәм тулы булмаған ныҡлыҡ мәғлүмәттәрен түҙә, әгәр сикләүҙәр теркәлгән; иртә клиник йәки үҫеш һынауҙары билдәләнгән өлгө әҙерләү менән квалификация талап итә, тейешле спецификлыҡ, алдан билдәләнгән теүәллек һәм аныҡлыҡ, Ҡулланыу диапазоны һәм төп система яраҡлылығы; ебәрергә, тотороҡлолоҡ һәм файл-ярҙам һынауҙары алдан билдәләнгән ҡабул итеү критерийҙары талап итә, раҫланған йәки квалификациялы башҡарыу, аналитиктар араһында ныҡлыҡ, көндәр һәм ҡорамалдар ., контролдә тотолған стандарттар һәм дәлилдәр ысулы тотороҡлолоҡ-күрһәтеүсе ҡайҙа кәрәк (фазаға ярашлы аналитик контроль стратегияһы). Һеҙ ярус дәлилдәр ҡуя, һәм ярусҡа күтәрелеү - был ҡарар, ысул түгел’абруй.
Ҡапҡа критерийҙары
Был тәртиптә эшләү аша, һәм беренсе уңышһыҙлыҡта туҡтағыҙ.
-
Тәғәйенләнгән маҡсат яҙылған .. АТФ үлсәү өсөн атрибуттарҙы атай, Һөҙөмтәлелек үҙенсәлектәре һәм улар менән бәйле критерийҙар, аша ИЧ Q14. Күмәртәләп һатыу пептидтары
-
Асыҡлау отчет сиге өсөн етерлек. Ысул ҡәнәғәтләндерер өсөн яраҡлы булырға тейеш Ph .. Евро. 0.1% синтетик пептидтар өсөн отчет сиге, буйынса ЭМА синтетик-пептид йүнәлеше. А 280 нм-тик ысул был ҡапҡаны хуш еҫле булмаған төрҙәр өсөн етешһеҙлектәргә дусар итә.
-
Спецификлығы өс ИЧ Q2-нең береһе менән күрһәтелә.(R2.) маршруттар. Ҡатнашыу булмауы ., ортогональ процедура менән сағыштырыу, йәки процедураның нигеҙендә ятҡан фәнни принциптар; һайлап алыусанлыҡты күрһәтергә мөмкин, хатта процедура аныҡ булмағанда ла (I С2.(R2.)).
-
Яуап факторҙары хәл ителә теләһә ниндәй бысраҡлыҡ өсөн, уның яуабы белешмә материалынан айырыла, аша ИЧ Q2(R2.).
-
Тотороҡлолоҡто күрһәтеү мөмкинлеге күрһәтелә мәжбүри деградация аша, аша ИЧ Q1A(R2.).
-
Система яраҡлылығы процедураһы буйынса билдәләнә, бүлектән фаразланмаған.. USP <621> анализға тиклем һәм барышында тулы аналитик системаның тейешле кимәлдә эшләүен күрһәтеүҙе талап итә, монография йәки аналитик процедура менән билдәләнгән критерийҙар менән; гармонизацияланған бүлектә пик симметрияһы талабы өҫтәлә. 0.8 тиклем 1.8 һәм ярты бейеклектәге түбә киңлегенән асыҡлыҡты иҫәпләй (USP <621> система яраҡлылығы). Үткән система яраҡлылыҡ кәрәкле шарт булып тора ., маҡсатҡа яраҡлы түгел.
Ысулды көсөргәнешле һәм шпилькалы өлгөләр менән даулау
Мәжбүри деградация һәм шпикинг нимә ҡапҡа тикшерелгән исемлек дәлилдәргә әйләндерә. AQbD экзенатид тикшерелгән дүрт параметр скрининг (колонка химияһы, органик үҙгәртеүсе, кислоталы үҙгәртеүсе, градиент ваҡыты), асыҡланған һәм өлөшләтә хәл ителгән 19 процесс- һәм продукт менән бәйле бысраҡлыҡ пиктары, һәм һуңғы MODR-верификация хроматограммаһын эшләне. 20 интеграль майҙанында түбәләре 0.05% йәки ҙурыраҡ, ҡаршы оптимизация маҡсатлы USP ҡарар кәмендә 1.5 асыҡланған продукт менән бәйле ҡушылмаларҙың күпселеге өсөн (AQbD экзенатид ысулын үҫтереүҙе өйрәнеү). Шулар 20 түбәләр асыҡланған түбәләр, сиктәр түгел, һәм араһындағы айырма. 19 скрининг ваҡытында һәм 20 тикшергәндә был ысулға ышаныу түгел, ә уға ҡаршы сығыу ҡиммәте. Кайзер һынауы өсөн пептидтар
Ҡасан оптимизация етә, һәм һеҙ аныҡ ҡына нимә үҙгәртә
Оптимизациялау, ҡасан ышаныслы үҙгәрештәр аналитик маҡсатлы профиль ҡәнәғәтләндерә ала. Параметрҙарҙы үҙгәртеү һайлап алыусанлыҡты, шулай уҡ һаҡлау һәм һөҙөмтәлелекте үҙгәртә ала. Өҫтәү ортогональ процедура йәки ысулын үҙгәртеп ҡороу, ҡасан һөҙөмтәлә дәлилдәр тейешле булып ҡала ..
Нимәне үҙгәртергә ., тәртиптә
Һайлау структуралы оптимизация планы өсөн ысын тәнҡит парҙар .. Күсмә фаза, стационар фаза, градиент һәм температура үҙ-ара тәьҫир итә; бер һатыусы сағыштырыу үҙгәрештәрҙең мотлаҡ тәртибен йәки универсаль градиент ҡалҡыулығын булдырмай.
Ҡасан һеҙгә кәрәк ортогональ ысулдар йәки ҡушма-конкрет ысулын эшләү
Ортогональ ысулдар кәрәк, ҡасан ысул айыра алмай, бөтә пептид менән бәйле ҡушылмалар ., ҡайһыһы ЭМА синтетик-пептид йүнәлеше өҫтәмә бойондороҡһоҙ ысулдар кәрәк булыуы мөмкин һәм бергә элюирлаусы ҡушылмалар 1990 й. 1.0% квалификация сиге, әгәр аҡланмаһа. Был теоретик положение түгел .. Шул уҡ экзенатид тикшергән деамидация парын күрһәтә, унда РПЛК кәрәк булған һөҙәк . 0.5% органик минутына градиент өҫтөндә 114 минут тик өлөшләтә асыҡлыҡ өсөн пик фронтинг менән, БЕХ Амид ХИЛИК уларҙы хатта 100-ҙә лә бергә элюирлай. 150 мм, һәм БЭХ ХИЛИК өлөшләтә хәл итеүгә өлгәшкән. 1% 2012 йылда минутына органик. 45 минуттар, анализ ваҡытын икеләтә кәметергә һәм бер үк ваҡытта үткәреүсәнлекте икеләтә арттырырға 100 мм бағана оҙонлоғо (Һыуҙар’ RPLC/HILIC ортогональ профилләштереп өйрәнеү экзенатид).
Ортогональ режимды һайлау
Һайлау нимәнән килә, беренсел режим күрә алмай .. HILIC варианттары өсөн документлаштырылған тулыландырыусы булып тора, тип кире фазаһы башланғыс линияһы-хәл итә алмай ., һәм режим мәсьәләләре эсендә HILIC: БЕХ Амид һәм БЕХ ХИЛИК бер үк деамидация парында үҙҙәрен төрлөсә тота. Күмәк асыҡлау — үҙенсәлек һәм бергә элюциялаусы төрҙәр өсөн тулыландырыусы., сөнки масса детекторы төп УФ-пик аҫтында ҡалған бысраҡлыҡтың характерлы масса күсеүен уҡый ала. Масса асыҡлау сиге шунда: HRMS үҙ аллы изомер һәм изобар ҡушылмаларҙы айыра алмай ., сөнки рацемизация ата-әсә препараты менән бер үк массалы D-аминокислота ҡушылмаларын етештерә, һәм иондарҙы парлаштырыусы агент булараҡ ҡулланылған ТФА масс-спектрометрҙа пептидтар ионлашыуын баҫа (1-се аналитик проблемалар буйынса LCGC интервьюһы). Бер үк һуҡыр нөктәне бүлешкән ортогональ ысул ортогональ түгел ..
Ҡасан ҡушма-специфик үҫеш намыҫлы яуап
Ҡатнашма-специфик үҫеш намыҫлы яуап ҡасан АТФ ҡаршы ала алмай ниндәй ҙә булһа комбинацияһы платформа параметрҙары һәм ортогональ режимдар аналит тирәләй ысулын үҙгәртеп ҡороуһыҙ .. Дәлилдәр дөйөм класс өсөн шулай күрһәтә: тикшеренеүҙең һығымтаһы буйынса, ысулды оптимизациялау берләшмәгә хас булырға тейеш һәм универсаль платформа ысулы туранан-тура төрлө GLP-1 рецепторҙары агонисттарына ҡулланыла алмай., һәр аналитҡа ярашлы хроматографик шарттар менән (Термо Фишер’s RPLC-УФ оптимизация өйрәнеү өсөн семаглутид һәм тирзепатид). Норматив-хоҡуҡи база был аша урынлаштырыу ICH Q14, был мөмкинлек бирә минималь (традицион) алым йәки көсәйтелгән алым элементтары, алдан белем һәм хәүефте баһалауҙы ҡулланып, йоғонтоло параметрҙарҙы билдәләү һәм бер йәки күп вариантлы тикшеренеүҙәр аша МОДР булдырыу өсөн көсәйтелгән алым менән (I 14-се һорау). Платформа белемдәре башланғыс нөктә булып тора .; АТФ ни тиклем алыҫҡа алып барыуын хәл итә.
Нимә тапшырыу һәм яҙмалар пакеты йөрөтөргә тейеш, шулай сопоставимость дәғүә иҫән ҡала тикшерергә
Ысул тапшырыу өсөн пептидтар уңышһыҙлыҡҡа осрай деталдәр буйынса, тип бәләкәй молекулалы тапшырыу түҙемле. Системаның йәшәү күләмендәге айырмалар йыш осрай., тапшырыу етешһеҙлектәренең баһаланмаған сығанағы, сөнки пептидтар айырыу бик һөҙәк градиенттарға таяна, һәм колонна температураһы һәм ағым тиҙлеге пептидтар өсөн бәләкәй молекулаларға ҡарағанда эҙемтәлерәк, сөнки ҙур молекулалар яйыраҡ диффузиялана . (LCGC’s практик фекер алышыу GLP-1 ысулын тапшырыу). Һай градиент приборҙар араһындағы һәр күләм айырмаһын көсәйтә.
Яҙма бойондороҡһоҙ рецензентҡа һәр лаборатория нимә эшләгәнен реконструкцияларға рөхсәт итергә тейеш. Тимәк, ысулдың үҙенсәлеге һәм версияһы; бағана етештереүсе, химия, үлсәмдәре, киҫәксә һәм поралар ҙурлығы, сериялы йәки лот номеры, кондиционирование тарихы, инъекциялар һаны, һаҡлау һәм алмаштырыу критерийҙары; Программа һәм прошивка версиялары менән приборҙар һәм детекторҙар идентификаторҙары; үлсәү йәки квалификациялы йәшәү күләме менән үлсәү ысулы һәм теләһә ниндәй компенсация ҡулланыла; Ысынбарлыҡта теркәлгән температура һәм тигеҙләү ваҡыты менән колонка-мейес һәм автопробирка ҡуйылған нөктәләр; һәм күсмә фазалы әҙерләү деталдәре, шул иҫәптән иреткес һәм реагенттар сорттары, тәьмин итеүсе һәм лот номерҙары, һыу сығанағы, рН һәм көйләү реагенты, әҙерләү көнө һәм ваҡыты, әҙерләүсе һәм тикшереүсе, фильтрлау һәм газһыҙландырыу, һаҡлау һауыты һәм ғәмәлдән сығыу йәки тотоу ваҡыты (FDA’s сағыштырыу һәм ысул-тапшырыу өмөттәре).
Мәғлүмәттәр бөтөнлөгө ҡатламы
Яҙма тик яҡлана, әгәр нигеҙендә мәғлүмәттәр ALCOA өмөттәренә яуап бирә. МХРА ALCOA-ны атрибутив тип билдәләй, уҡымлы, заманса, оригиналь һәм дөрөҫ, плюс менән тулыһынса һылтанма, тотороҡло, ныҡлы һәм бар, һәм сеймал мәғлүмәттәре эшмәкәрлекте тулыһынса реконструкциялау мөмкинлеген бирергә тейеш һәм мәғлүмәттәр динамик хәлдә алынған һәм электрон рәүештә генерацияланған тип белдерә., ҡағыҙ күсермәләре сеймал мәғлүмәттәре тип иҫәпләнмәй (МХРА’s ALCOA хроматографик сеймал мәғлүмәттәре өсөн өмөттәр). Хроматография өсөн был специфик: баҫылған хроматограмма мәғлүмәттәрҙе яңынан эшкәртеү һәм башланғыс һыҙыҡты киңәйтеү мөмкинлеген юғалта, был тап мөмкинлек рецензент кәрәк, ҡасан берлектәге элюция һорауы барлыҡҡа килә.
Ҡайҙа тоташтырылған мәғлүмәт пакеты ярҙам итә
Ғәмәли уңышһыҙлыҡ тапшырыуҙа юҡ документ түгел, ә документтар араһындағы бәйләнеш юҡ. Ҡасан ысул версияһы ., бағана өлөшө, йәшәү күләмен үлсәү һәм интеграция ҡарарҙары айырым файлдарҙа йәшәй, рецензент лабораториянан һорамайынса йүгереүҙе реконструкциялай алмай, һәм сағыштырмаса дәғүә ларектар хатлашыу түгел, ә фән. Тоташтырылған мәғлүмәт пакеты, метод яҙмаһын һаҡлай, прибор яҙмаһы һәм сеймал хроматографик мәғлүмәттәр менән бәйле бер үк өлгө һәм йүгерә идентификаторҙары был реконструкциялау аҙымын юя. Бына тар ., практик роль уйнай бындай пакет бында: был рецензенттың реконструкцияһы мөмкин булған һорауҙар туры булмаһа.
Дөйөм хаталар, ысул һорауын подача һорауына әйләндерә
Беренсе хата системаһы яраҡлылығын маҡсатҡа яраҡлылыҡ тип ҡарау. USP <621> тейешле кимәлдә эшләү өсөн тулы аналитик система талап итә, процедура билдәләгән критерийҙар менән, һәм ул универсаль хәл итеү ҡиммәтен йөкмәтмәй (USP <621> система яраҡлылығы). Үткән яраҡлылыҡ системаһы бөгөн үҙен тота ти, метод тәғәйенләнгән һорауға яуап бирә тип түгел.
Икенсеһе - уҡыу УФ таҙалыҡ һанын үҙенсәлек йәки тулылыҡ дәғүәһе булараҡ .. Хәл ителгән пик билдәләнгән пик түгел, һәм а 98% майҙаны процент түгел, тип дәлилдәр ҡалған 2% яҡшы сирле. Өсөнсөһө - хәл ителгән пикты бер төр тип фаразлау: бер пик булараҡ күҙәтелгән бергә элюирлаусы ҡушылмалар ҡабул итә 1.0% квалификация сиге, әгәр башҡаса нигеҙләнмәһә (ЭМА синтетик-пептид йүнәлеше). Дүртенсе фаразлау уңышлы өйҙә күсерергә тигәнде аңлата ысул күсерелгән ., Ҡасан двел күләме һәм һөҙәк градиенттар приборҙар араһында һайлап алыусанлыҡты күсерә (LCGC’s практик фекер алышыу GLP-1 ысулын тапшырыу).
Йыш бирелгән һорауҙар
Үткән система яраҡлылыҡ тигәнде аңлатамы платформа ысулы маҡсатҡа яраҡлы?
Юҡ. USP <621> анализға тиклем һәм барышында тулы аналитик системаның тейешле кимәлдә эшләүен күрһәтеүҙе талап итә, һәм ул универсаль асыҡлыҡ ҡиммәтен ҡуймай; критерийҙары монографиянан йәки аналитик процедуранан килә (USP <621> система яраҡлылығы). Маҡсатҡа яраҡлылыҡ айырым һорау ., ҡаршы яуап бирҙе аналитик маҡсатлы профиль билдәләнгән ICH Q14 (I 14-се һорау).
УФ майҙаны проценты таҙалыҡ һаны булып хеҙмәт итә аламы өсөн сығарыу спецификацияһы?
Ул таҙалыҡ сараһы булып хеҙмәт итә ала ., әммә квалификацияһыҙ кеше булараҡ түгел. Майҙанды нормалаштырыу моль өсөн сағыштырмаса яуапты күҙ уңында тота, һәм мин Q2.(R2.) йүнәлткән, тип сағыштырмаса яуап факторҙары иҫәпләнә, унда аналитик’яуап һылтанма материалынан айырыла (I С2.(R2.)). Асыҡлау тулҡынының оҙонлоғо шулай уҡ ниндәй төрҙәрҙең иҫәпкә инеүен билдәләй, бирле 280 нм башлыса Trp асыҡлай, Тир һәм Фе (Һыуҙар’ пептид ысулы-үҫеш праймер .).
Мин нисек белергә, оптимизациялау йәки ортогональ барырға?
Оптимизациялау, ҡасан проблема параметр диапазоны һәм тәнҡитле пар яуап бирә мобиль фазаһы ., колонка химияһы, температура йәки градиент ҡалҡыулығы. Барырға ортогональ ҡасан пар яуап бирмәй, бер ниндәй ҙә шул, экзенатид пролин-инсерция варианты менән кеүек, тип RPLC башланғыс линияһы-киң оптимизациянан һуң хәл итә алманы, ә HILIC Rs = 1 етте. 2.94 (Һыуҙар’ RPLC/HILIC ортогональ профилләштереп өйрәнеү экзенатид).
Нимә эшләй пептид ысулын тапшырыу лабораториялар араһында уңышһыҙлыҡҡа осрай?
Йыш һәм баһаланмаған сәбәп булып тора двел күләме айырмаһы, сөнки пептидтар айырыу бик һөҙәк градиенттарға таяна, ә колонна температураһы һәм ағым тиҙлеге пептидтар өсөн бәләкәй молекулаларға ҡарағанда күберәк әһәмиәткә эйә (LCGC’s практик фекер алышыу GLP-1 ысулын тапшырыу). Шуға күрә тапшырыу яҙмаһы үлсәү ҡалдырыу күләмен һәм үлсәү ысулын йөрөтөргә тейеш ., бағана лоты менән бергә, кондиционирование тарихы һәм күсмә-фаза әҙерләү деталдәре (FDA’s сағыштырыу һәм ысул-тапшырыу өмөттәре).
Һығымта
Ҡарар дөрөҫ тәртиптә бирелгән бер һорауға килә .: тәғәйенләнгән маҡсат нимә талап итә, һәм платформа ысулы уға тап киләме? Тәүҙә аналитик маҡсатлы профилде яҙығыҙ ., аша ИЧ Q14, Һуңынан ысулды ЭМА-ға ҡаршы һынап ҡарағыҙ 0.1% отчет сиге, ИЧ Q2(R2.) спецификлыҡты күрһәтеү өсөн маршруттар, һәм мәжбүри деградация дәлилдәре тотороҡлолоҡ-күрһәтеү мөмкинлеге. Әгәр ысул шул ҡапҡаларҙы таҙарта, уны ҡулланыу-был һәм сикләүҙәрҙе теркәү. Әгәр ҙә ул параметрҙар диапазонында уңышһыҙлыҡҡа осраһа, оптимизациялау тәртибендә, был мөһим: күсмә фаза, колонка химияһы, температура, һуңынан градиент ҡалҡыулығы. Әгәр ҙә ул һайлап алыу буйынса уңышһыҙлыҡҡа осраһа, бер үк һуҡыр нөктәне бүлешмәгән ортогональ режим өҫтәү. Әгәр АТФ аналит тирәләй ысулын тергеҙмәйенсә ҡаршы ала алмаһа, Ҡатнашма-специфик үҫешкә йөкләмә ала, был нимәне класс кимәлендәге дәлилдәр раҫлай.
Трансфер пакеты ҡайҙа ҡарар башҡа кеше һынау .. Ҡулланыу күләме үлсәү, Колонка күп һәм кондиционирование тарихы, күсмә фазалы әҙерлек яҙмаһы һәм сеймал электрон мәғлүмәттәр, сөнки MHRA’s реконструкциялау талабы нимә рецензент ҡулланыласаҡ. Киләһе аҙым-был һеҙҙең алдығыҙҙа эҙмә-эҙлеклелек өсөн АТФ алыу һәм уны ҡаршы алты ҡапҡа критерийҙары йүгерә .; әгәр һеҙ был баһаға икенсе пар күҙҙәр теләйһегеҙ икән, эксперт менән һөйләшеү ысулы инә алдынан подача.
