GLP-1 불순물 분석을 위한 플랫폼 HPLC 방법이 실제로 측정하는 것과 측정하지 않는 것
플랫폼 역상 구배는 주로 전체 소수성과 접근 가능한 비극성 표면을 통해 펩타이드를 분리합니다., 서열 동일성이 아닌, 따라서 단일 잔기 치환 또는 위치 이성질체는 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키면서 피크 확장 또는 흡착 변동성보다 작은 유지 변화를 생성할 수 있습니다. (Waters의 펩타이드 방법 개발 프라이머). 이 방법이 측정하는 것은 창에서 얼마나 많은 펩타이드 함유 물질이 용출되는지입니다.. 측정하지 않는 것은 그 물질이 어떤 분자인지입니다..
탐지가 한계를 복합화합니다. 감지 위치 214 nm는 펩타이드 백본 아미드 결합에 반응하므로 서열 변형 및 절단을 포함한 본질적으로 모든 펩타이드 함유 종에 반응합니다., 반응은 방향족 함량에 훨씬 덜 의존적입니다. 280 nm; 280 nm는 주로 Trp를 감지합니다., Tyr 및 Phe는 이것이 부족한 불순물을 과소대표할 수 있습니다. (Waters의 펩타이드 방법 개발 프라이머). 에이 280 따라서 nm 전용 방법에는 감지 사각지대가 있습니다. 214 nm 방법은 그렇지 않습니다.
펩타이드 방법이 수행해야 할 네 가지 주장
청정, 신원, 콘텐츠와 안정성은 네 가지 별도의 주장입니다., 검증되지 않은 크로마토그래피 피크 면적 결과 중 하나가 네 가지 모두를 확립하지는 않습니다.. 순도는 통합된 영역이 주 피크에 얼마나 속하는지를 나타내는 상대적인 척도입니다., 그리고 그 자체로는 정체성에 대해 아무 말도 하지 않습니다.: 샘플을 읽을 수 있습니다 99% HPLC로 순수하지만 여전히 잘못된 분자임. 정체성은 대량으로 확립된다, 펩타이드 매핑, 아미노산 분석 또는 NMR, 그리고 EMA 합성 펩타이드 가이드라인 출시 시 식별을 위해 최소한 두 가지 직교 방법을 권장합니다., 조합을 보여줄 책임이 있는 신청자와 함께 순서를 명확하게 확인합니다..
함량은 존재하는 펩타이드의 양입니다., 일반적으로 참조 표준에 대해 표현되고 반대 이온에 대해 수정됩니다., 물과 소금. 안정성은 분자만큼이나 분석법의 속성입니다.: 나는 Q1A(R2) 검증된 안정성 표시 절차를 사용하고 저장 중에 변경되기 쉬운 특성을 조사하기 위한 안정성 연구가 필요합니다., 분해 산물과 경로를 식별하는 스트레스 테스트를 통해 (나는 Q1A(R2)). 강제 분해 종을 해결하는 것으로 입증된 적이 없는 순도 방법은 안정성을 나타내는 방법이 아닙니다., 시스템 적합성 결과가 무엇이든 간에.
구조적으로 유사한 GLP-1 펩타이드와 그 불순물이 일반적인 역상 구배를 무력화하는 이유
GLP-1 펩타이드 간의 구조적 유사성이 반드시 유사한 크로마토그래피 동작으로 해석되는 것은 아닙니다., 이것이 바로 플랫폼 방법에 화합물별 최적화가 필요할 수 있는 이유입니다. (구조적 유사성이 크로마토그래피 동작을 예측하지 못한다는 Thermo Fisher의 주장). 동일한 출처에서는 이동상 구성이 고정상 화학보다 불순물 분리에 더 큰 영향을 미친다고 보고합니다., TFA 함유 이동상은 종종 포름산보다 더 나은 피크 모양과 분해능을 나타냈습니다..
기울기가 변하지 않는 경우에도 열 화학은 답을 변경합니다.. 단일 방법 및 그래디언트, CORTECS Premier C18+ 및 ACQUITY Premier Peptide CSH C18은 가장 독특한 리라글루타이드 변종을 분리했습니다., CORTECS Premier C18+ 및 ACQUITY Premier CSH Phenyl-Hexyl은 가장 독특한 세마글루티드 변종을 분리했습니다.; 펩타이드 CSH C18은 세마글루타이드보다 리라글루타이드를 더 잘 분리했고, 페닐-헥실 컬럼은 그 반대였습니다. (리라글루타이드와 세마글루타이드에 대한 Waters의 컬럼 선택 비교). 단일 베스트 컬럼이 없습니다., 명명된 분석물질에 대한 최상의 컬럼만 제공.
선택성을 무너뜨리는 불순물 등급
불순물 등급은 분자를 얼마나 변화시키는지, 그리고 그 변화가 역상 구배에 표시되는지 여부에 따라 다릅니다.. 아래 질량 변화는 제3자 펩타이드 테스트 문서에서 가져온 것이며 화학 반응을 설명합니다., 전서적 한도가 아님.
|
불순물 등급 |
대규모 이동 |
역상 문제가 발생하는 이유 |
|---|---|---|
|
산화 (만난, TRP, 사이스) |
+16 그리고 |
작은 극성 변화; 종종 모체에 가깝거나 아래에서 용리됩니다. |
|
이중산화 |
+32 그리고 |
두 번째 산화 이벤트, 누적 보존 변화 |
|
탈아미드화 (Asn→Asp, Gln→Glu) |
호트 커플링 +1 그리고 |
부모와 거의 등압; 고전적인 동시 용리 사례 |
|
N 말단 고리화 (Gln→pyroGlu) |
-17 예 |
펩타이드 공급업체 전하를 띤 N-말단의 손실로 인해 머무름이 미묘하게 변경됩니다. |
|
삭제 펩티드의 순서 |
누락된 잔여물 및 수정에 따라 다름 |
누락된 잔여물; 모체보다 다소 소수성이 있을 수 있음 |
|
잔류보호기 (tBu, Pbf, Trt) |
분자식으로부터 순 유지 그룹을 계산합니다. |
불완전한 탈보호로 인한 소수성 태그 |
선택성은 유일한 실패 모드가 아닙니다. 펩타이드 HPLC 방법은 흡착 및 실리카에 대한 비특이적 결합으로 인해 실패합니다., 잔류 실라놀, 금속 표면, 프릿, 관 재료, 약병 및 필터; pH에 따른 응집 및 침전을 통해, 이온 강도, 온도, 용제, 농축 또는 동결-해동; 테일링을 생성하는 2차 고정상 상호작용을 통해, 분할 또는 비탈출; 특히 Asp의 금속 매개 흡착을 통해- 및 Glu 함유 종; 이월 효과와 기억 효과를 통해; 컬럼 내 분해를 통해 (펩타이드 HPLC 실패 모드 검토). 분석법은 모든 선택성 검사를 통과하더라도 분석물질이 시스템으로 손실될 수 있습니다..
온도와 이동상은 단방향 레버가 아닙니다.
컬럼 온도를 높이는 것은 반사적 수정입니다., 그리고 그것은 신뢰할 수 없습니다. 컬럼 온도 증가 30 °C ~ 60 °C에서는 더 낮은 온도에서 동시 용리된 2개의 티르제파티드 불순물을 분리했습니다., 그러나 Hypersil GOLD C4 컬럼과 TFA 함유 이동상을 사용하는 세마글루타이드에서는 동일한 온도 증가로 분리능이 감소하고 두 가지 불순물이 함께 용출되었습니다. (세마글루타이드 및 티르제파티드에 대한 Thermo Fisher의 RPLC-UV 최적화 연구). 효과의 방향은 컬럼과 이동상의 조합에 따라 다릅니다., 일반적인 규칙이 아닌.
Waters 온도 연구는 한 가지 방법 내에서 동일한 비단조적 동작을 보여줍니다.: ±5°C의 컬럼 온도 변화로 인해 리라글루타이드의 불순물 종 분리에 영향을 미치는 선택성 차이가 발생했습니다., 티르제파티드와 세마글루타이드, 하나의 중요한 쌍 사이에서 최상의 해상도를 제공합니다. (봉우리 9 그리고 10) ~에 55 °C에서 동시에 용리되는 두 종 65 ℃ (에이 호트 합성 GLP-1 분리의 온도 의존성에 대한 Waters 연구). 5도 변화로 중요한 쌍이 분리된 상태에서 동시 용리 상태로 이동했습니다., 이는 실험실 간의 이동이 생존해야 하는 마진입니다..
UV 면적 비율이 방어 가능한 순도 수치가 아닌 경우
영역 정규화는 작동 순도 측정입니다.. 이를 질량 또는 몰분율로 변환하려면 적절한 응답 인자 가정이 필요합니다., 탐지 범위 및 통합. 잔류물 구성이나 라벨이 다르면 다르게 반응할 수 있습니다., 검출되지 않거나 동시 용출되는 종은 추가 평가가 필요합니다..
검출 파장은 어떤 불순물이 계산에 포함되는지를 결정합니다.. 왜냐하면 280 nm는 주로 Trp를 감지합니다., 티르와 페, 이러한 잔류물이 부족한 불순물은 해당 파장에서 과소대표되거나 보이지 않을 수 있습니다., ~하는 동안 214 nm는 본질적으로 모든 펩타이드 함유 종에 반응합니다. (Waters의 펩타이드 방법 개발 프라이머). 방법이 적합한지에 대한 EMA 요구 사항을 읽어보십시오. 0.1% 보고 임계값, 에이 280 nm 전용 방법은 가이드라인에서 허용되지 않는 비방향족 펩타이드 관련 불순물에 대한 검출 격차를 나타냅니다..
동시 용리 결과
EMA 가이드라인은 하나의 피크로 함께 관찰되는 불순물과 독립적인 분석법의 필요성을 다루고 있습니다.. 측정된 통합수준에 해당 자격평가를 적용; 해석하지 마세요. 1.0% 개인 신원을 간과할 수 있는 권한 또는 보고 임계값의 변경으로 임계값.
실제 사례가 잘 문서화되어 있습니다.. 펩타이드는 읽을 수 있습니다 98% HPLC로 순수하게 만든 반면 +16 다 위성 피크, 주 피크와 함께 용출되는 부분 산화, UV에는 보이지 않고 질량으로는 명백하게 보입니다.. 열적 스트레스를 받은 엑세나타이드에 대한 LC-UV/MS 연구에서 피크 면적이 상당히 증가한 7개의 피크가 발견되었습니다., 질량 검출기가 할당한 +16 -1.3분 체류 시간 이동에서의 Da 산화 차이 및 비효소 절단 단편 3,254.1 그리고 (스트레스 엑세나타이드의 LC-UV/MS 불순물 프로파일링). UV 추적만으로는 질량 데이터와 모순되는 순도 수치를 보고했을 것입니다..
플랫폼 방법을 사용하기 전에 새로운 시퀀스의 목적에 적합한지 검증하는 방법
자격은 의도된 목적에서 시작됩니다, 방법에서가 아니라. ICH Q14는 분석 대상 프로파일을 의도된 목적과 분석 측정의 예상 성능 기준을 설명하는 성능 특성의 전망적 요약으로 정의합니다., ATP는 분석 기술의 선택을 주도하고 절차가 의도된 목적에 적합한지 확인하기 위해 수명주기 동안 유지관리된다고 명시합니다. (ICH Q14의 분석 대상 프로필). 먼저 새 시퀀스에 대한 ATP를 작성합니다., 그런 다음 이에 대해 플랫폼 메서드를 테스트합니다..
3단계 증거 기대는 다음과 같습니다.. 한계가 기록된 경우 스크리닝 및 특성화는 유연성과 불완전한 견고성 데이터를 허용합니다.; 초기 임상 또는 개발 테스트에는 정의된 샘플 준비를 통한 적격성 평가가 필요합니다., 적절한 특이성, 예비 정밀도 및 정확성, 사용 가능한 범위 및 기본 시스템 적합성; 풀어 주다, 안정성 및 파일링 지원 테스트에는 사전 정의된 승인 기준이 필요합니다., 검증되거나 자격을 갖춘 성능, 분석가 전반에 걸친 견고성, 일과 장비, 필요한 경우 통제된 참조 표준 및 방법이 안정성을 나타내는 증거 (단계에 적합한 분석 제어 전략). 당신이 속한 계층이 증거를 설정합니다, 한 단계 위로 올라가는 것이 결정입니다, 방법의 평판이 아니라.
게이트 기준
이를 순서대로 진행하세요, 첫 번째 실패에서 중지.
-
의도한 목적이 적혀있습니다. ATP는 측정할 속성의 이름을 지정합니다., 성능 특성 및 관련 기준, ICH Q14를 통해. 도매 펩티드
-
탐지가 보고 임계값에 적합합니다.. 방법은 Ph를 충족하는데 적합해야 합니다.. 유로. 0.1% 합성 펩타이드에 대한 보고 임계값, 당 EMA 합성 펩타이드 가이드라인. 에이 280 nm 전용 방법은 비방향족 종에 대해 이 게이트에 실패합니다..
-
특이성은 세 가지 ICH Q2 중 하나에 의해 입증됩니다.(R2) 노선. 간섭 없음, 직교 절차와의 비교, 또는 절차의 기본 과학적 원리; 절차가 구체적이지 않은 경우에도 선택성을 입증할 수 있습니다. (나는 Q2(R2)).
-
반응 요인이 해결됩니다. 기준 물질과 반응이 다른 불순물의 경우, ICH Q2를 통해(R2).
-
안정성 표시 기능이 표시됩니다. 강제적인 저하를 통해, ICH Q1A를 통해(R2).
-
시스템 적합성은 절차에 따라 설정됩니다., 장에서 가정되지 않음. USP <621> 전체 분석 시스템이 분석 전과 분석 전반에 걸쳐 적절하게 작동함을 입증해야 합니다., 논문 또는 분석 절차에 의해 설정된 기준에 따라; 조화된 장은 다음과 같은 피크 대칭 요구 사항을 추가합니다. 0.8 에게 1.8 절반 높이의 피크 폭으로부터 분해능을 계산합니다. (USP <621> 시스템 적합성). 합격 시스템 적합성은 필수 조건입니다., 목적에 적합하지 않음.
응력이 가해지고 스파이크된 시료를 사용한 분석법의 도전
강제 저하 및 스파이크는 게이트 체크리스트를 증거로 바꾸는 것입니다.. AQbD 엑세나타이드 연구에서는 4가지 매개변수를 선별했습니다. (컬럼 화학, 유기적 변형제, 산성 수식어, 그라데이션 시간), 감지되어 부분적으로 해결됨 19 프로세스- 및 제품 관련 불순물 피크, 최종 MODR 검증 크로마토그램을 생성했습니다. 20 통합 영역의 피크 0.05% 또는 그 이상, USP 분해능의 최적화 목표에 대해 최소 1.5 확인된 제품 관련 불순물의 대부분에 대해 (AQbD 엑세나타이드 방법 개발 연구). 저것들 20 피크는 피크가 감지됩니다., 제한하지 않음, 그리고 그 사이의 간격 19 상영회 때 그리고 20 검증할 때 방법을 신뢰하기보다는 도전하는 것이 가치이다. 펩타이드에 대한 카이저 테스트
최적화가 충분할 때, 그리고 정확히 무엇을 바꾸나요?
그럴듯한 변화가 분석 목표 프로필을 충족할 수 있을 때 최적화. 매개변수 변경으로 인해 선택성뿐만 아니라 머무름 및 효율성도 변경될 수 있습니다.. 결과 증거가 여전히 불충분할 경우 직교 절차를 추가하거나 방법을 재설계합니다..
무엇을 바꿔야 할까요?, 순서대로
실제 중요 쌍에 대한 구조화된 최적화 계획을 선택하십시오.. 이동상, 고정상, 기울기와 온도가 상호 작용합니다.; 하나의 공급업체 비교에서는 필수 변경 순서나 보편적인 경사 기울기를 설정하지 않습니다..
직교 기술이나 화합물별 분석법 개발이 필요한 경우
이 방법으로 모든 펩타이드 관련 불순물을 분리할 수 없는 경우 직교 기술이 필요합니다., 어느 EMA 합성 펩타이드 가이드라인 추가적인 독립적인 방법이 필요할 수 있으며, 동시 용출되는 불순물은 다음 사항에 해당한다고 명시하여 예상합니다. 1.0% 정당하지 않은 한 자격 기준. 이는 이론적인 조항이 아니다.. 동일한 엑세나타이드 연구는 RPLC에 얕은 농도가 필요한 탈아미드화 쌍을 보여줍니다. 0.5% 분당 유기적 변화도 이상 114 피크 프론팅을 통해 부분 해결에만 몇 분 소요, BEH Amide HILIC은 심지어 150 mm, BEH HILIC은 부분 해결을 달성했습니다. 1% 분당 유기농 45 분, 분석 시간은 절반으로 줄이고 처리량은 두 배로 늘리는 동시에 100 mm 열 길이 (엑세나타이드에 대한 Waters의 RPLC/HILIC 직교 프로파일링 연구).
직교 모드 선택
선택은 기본 모드에서 볼 수 없는 것에서 따릅니다.. HILIC은 역상으로 기준선을 해결할 수 없는 변형에 대해 문서화된 보완 제품입니다., HILIC에서는 모드가 중요합니다.: BEH Amide와 BEH HILIC은 동일한 탈아미드화 쌍에서 다르게 행동했습니다.. 질량 검출은 동일성 및 동시 용리 종에 대한 보완책입니다., 질량 검출기는 주요 UV 피크 아래에 있는 불순물의 특성 질량 이동을 읽을 수 있기 때문입니다.. 질량 검출의 한계는 HRMS 자체가 이성질체와 동위원소 불순물을 구별할 수 없다는 것입니다., 라세미화로 인해 모약물과 같은 질량의 D-아미노산 불순물이 생성되기 때문입니다., 이온쌍 형성제로 사용되는 TFA는 질량분석기에서 펩타이드 이온화를 억제합니다. (GLP-1 분석 과제에 대한 LCGC 인터뷰). 동일한 맹점을 공유하는 직교 방법은 직교 방법이 아닙니다..
화합물별 개발이 정직한 답인 경우
화합물별 개발은 분석물질을 중심으로 방법을 재설계하지 않고 플랫폼 매개변수와 직교 모드의 조합으로 ATP를 충족할 수 없는 경우 정직한 대답입니다.. 증거는 학급 전체에 대해 그렇게 지적합니다.: Thermo Fisher 연구에서는 분석법 최적화가 화합물별로 이루어져야 하며 범용 플랫폼 분석법을 다양한 GLP-1 수용체 작용제에 직접 적용할 수는 없다는 결론을 내렸습니다., 각 분석물질에 맞는 크로마토그래피 조건 제공 (세마글루타이드 및 티르제파티드에 대한 Thermo Fisher의 RPLC-UV 최적화 연구). 규제 체계는 ICH Q14를 통해 이를 수용합니다., 이는 최소한의 (전통적인) 향상된 접근 방식의 접근 방식 또는 요소, 단변량 또는 다변량 연구를 통해 영향력 있는 매개변수를 식별하고 MODR을 설정하기 위해 사전 지식과 위험 평가를 사용하는 향상된 접근 방식을 사용합니다. (나 Q14). 플랫폼 지식이 출발점이다; ATP는 얼마나 멀리 운반할지 결정합니다..
비교 가능성 주장이 검토 후에도 유지되도록 이전 및 기록 패키지에 포함되어야 하는 내용
소분자 이전이 허용되는 세부 사항에서 펩타이드에 대한 분석법 이전이 실패함. 시스템 거주량의 차이는 빈번합니다., 펩타이드 분리가 매우 얕은 기울기에 의존하기 때문에 전달 실패의 원인이 과소평가됨, 큰 분자가 더 천천히 확산되기 때문에 컬럼 온도와 유속은 작은 분자보다 펩타이드에 더 중요합니다. (GLP-1 분석법 이전에 대한 LCGC 실무자 논의). 얕은 그라데이션은 악기 간의 모든 볼륨 차이를 증폭시킵니다..
기록은 독립적인 검토자가 각 실험실에서 수행한 작업을 재구성할 수 있도록 해야 합니다.. 이는 메소드 ID 및 버전을 의미합니다.; 컬럼 제조업체, 화학, 치수, 입자 및 기공 크기, 일련번호 또는 로트 번호, 컨디셔닝 이력, 주입 횟수, 보관 및 교체 기준; 소프트웨어 및 펌웨어 버전이 포함된 기기 및 감지기 ID; 측정 방법 및 적용된 보상을 사용하여 측정되거나 검증된 체류량; 실제 기록된 온도와 평형 시간이 포함된 컬럼 오븐 및 자동 샘플러 설정값; 용매 및 시약 등급을 포함한 이동상 준비 세부 사항, 공급자 및 로트 번호, 수원, pH 및 조정 시약, 준비 날짜와 시간, 준비자 및 검증자, 여과 및 탈기, 저장 용기 및 만료 또는 보유 시간 (FDA의 비교가능성 및 방법 이전 기대).
데이터 무결성 계층
기본 데이터가 ALCOA 기대치를 충족하는 경우에만 기록을 방어할 수 있습니다.. MHRA는 ALCOA를 귀속성으로 정의합니다., 읽기 쉬운, 동시대의, 독창적이고 정확함, 플러스는 완료를 나타냄, 일관된, 지속적이고 사용 가능, 원시 데이터는 활동의 완전한 재구성을 허용해야 하며 데이터는 동적 상태에서 캡처되어 전자적으로 생성되어야 한다고 명시합니다., 종이 사본은 원시 데이터로 간주될 수 없습니다. (크로마토그래피 원시 데이터에 대한 MHRA의 ALCOA 기대치). 크로마토그래피의 경우 이는 구체적입니다.: 인쇄된 크로마토그램은 데이터를 재처리하고 기준선을 확장하는 기능을 잃습니다., 이는 공동 용출 질문이 발생할 때 리뷰어에게 필요한 기능입니다..
연결된 데이터 패키지가 도움이 되는 경우
핸드오프 시 실질적인 실패는 문서 누락이 아니라 문서 간의 연결 누락입니다.. 메소드 버전이 있는 경우, 기둥 부지, 체류량 측정 및 통합 결정은 별도의 파일에 저장됩니다., 검토자는 원래 실험실에 문의하지 않고는 실행을 재구성할 수 없습니다., 비교 가능성 주장은 과학보다는 서신에 달려 있습니다.. 분석법 기록을 유지하는 연결된 데이터 패키지, 동일한 샘플 및 실행 식별자에 연결된 기기 기록과 원시 크로마토그래피 데이터는 해당 재구성 단계를 제거합니다.. 그쪽이 좁다, 그러한 패키지가 여기서 수행하는 실질적인 역할: 일련의 질문 없이 리뷰어의 재구성을 가능하게 합니다..
방법 질문을 제출 질문으로 바꾸는 일반적인 실수
첫 번째 실수는 시스템 적합성을 목적 적합성으로 간주하는 것입니다.. USP <621> 적절하게 수행하려면 완전한 분석 시스템이 필요합니다., 절차에 의해 설정된 기준에 따라, 보편적인 해상도 값을 부과하지 않습니다. (USP <621> 시스템 적합성). 적합성을 통과하면 시스템이 현재 작동하고 있음을 나타냅니다., 그 방법이 의도한 질문에 답하는 것은 아니다.
두 번째는 UV 순도 수치를 식별성 또는 완전성 주장으로 읽는 것입니다.. 해결된 피크는 식별된 피크가 아닙니다., 그리고 98% 면적 백분율은 나머지가 있다는 증거가 아닙니다. 2% 양성이다. 세 번째는 해결된 피크가 단일 종이라고 가정하는 것입니다.: 하나의 피크로 관찰되는 동시 용리 불순물은 1.0% 달리 정당화되지 않는 한 자격 기준 (EMA 합성 펩타이드 가이드라인). 네 번째는 성공적인 사내 이전이 방법이 이전 가능하다는 것을 의미한다고 가정하는 것입니다., 드웰 볼륨과 얕은 기울기로 인해 기기 간 선택성이 이동하는 경우 (GLP-1 분석법 이전에 대한 LCGC 실무자 논의).
자주 묻는 질문
통과 시스템 적합성은 플랫폼 방식이 목적에 적합하다는 것을 의미합니까??
아니요. USP <621> 전체 분석 시스템이 분석 전과 분석 전반에 걸쳐 적절하게 작동함을 입증해야 합니다., 범용 해상도 값을 설정하지 않습니다.; 기준은 논문이나 분석 절차에서 나옵니다. (USP <621> 시스템 적합성). 목적에 대한 적합성은 별도의 질문입니다., ICH Q14에 정의된 분석 대상 프로파일에 대한 답변 (나 Q14).
UV 면적 백분율이 릴리스 사양의 순도 수치 역할을 할 수 있습니까??
순도를 측정하는 역할을 할 수 있습니다., 하지만 자격이 없는 사람은 아니다.. 면적 정규화는 몰당 비슷한 반응을 가정합니다., 그리고 나는 Q2(R2) 분석물질의 반응이 기준 물질과 다른 경우 상대 반응 인자를 계산하도록 지시합니다. (나는 Q2(R2)). 감지 파장은 계산에 어떤 종을 입력할지 설정합니다., ~부터 280 nm는 주로 Trp를 감지합니다., 티르와 페 (Waters의 펩타이드 방법 개발 프라이머).
최적화할지 아니면 직교할지 어떻게 알 수 있나요??
문제가 매개변수 범위이고 중요한 쌍이 이동상에 반응하는 경우 최적화, 컬럼 화학, 온도 또는 경사 기울기. 쌍이 이들 중 어느 것에도 응답하지 않으면 직교로 이동하십시오., HILIC이 Rs에 도달하는 동안 RPLC가 광범위한 최적화 후에 기준선을 해결할 수 없는 엑세나타이드 프롤린 삽입 변형과 마찬가지로 2.94 (엑세나타이드에 대한 Waters의 RPLC/HILIC 직교 프로파일링 연구).
실험실 간 펩타이드 분석법 이전이 실패하는 이유?
체류량 차이는 자주 발생하며 과소평가되는 원인입니다., 펩타이드 분리는 매우 얕은 기울기에 의존하기 때문입니다., 컬럼 온도와 유속은 소분자보다 펩타이드에 더 중요합니다. (GLP-1 분석법 이전에 대한 LCGC 실무자 논의). 따라서 전송 기록에는 측정된 체류량과 측정 방법이 포함되어야 합니다., 열 로트와 함께, 컨디셔닝 이력 및 이동상 준비 세부정보 (FDA의 비교가능성 및 방법 이전 기대).
결론
결정은 올바른 순서로 질문 한 개로 귀결됩니다.: 의도된 목적에 필요한 것은 무엇인가, 플랫폼 방식이 이를 충족합니까?? 분석 대상 프로필을 먼저 작성하세요., ICH Q14를 통해, 그런 다음 EMA에 대해 방법을 테스트하십시오. 0.1% 보고 임계값, 무형유산 Q2(R2) 특이성을 입증하는 경로, 및 안정성 표시 기능의 강제 저하 증거. 메소드가 해당 게이트를 지우면, 그대로 사용하고 제한 사항을 기록하십시오.. 매개변수 범위에서 실패하는 경우, 중요한 순서대로 최적화: 이동상, 컬럼 화학, 온도, 그런 다음 경사 기울기. 선택성에서 실패하는 경우, 동일한 사각지대를 공유하지 않는 직교 모드 추가. 분석물질을 중심으로 분석법을 재구성하지 않고 ATP를 충족할 수 없는 경우, 화합물별 개발에 전념, 이것이 클래스 수준 증거가 뒷받침하는 것입니다..
이전 패키지는 다른 사람이 결정을 테스트하는 곳입니다.. 체류량 측정 수행, 컬럼 로트 및 컨디셔닝 기록, 이동상 준비 기록 및 원시 전자 데이터, MHRA의 재건 요구 사항은 검토자가 적용하기 때문입니다.. 다음 단계는 앞에 있는 시퀀스에 대한 ATP를 가져와서 6개의 게이트 기준에 따라 실행하는 것입니다.; 해당 평가에 대한 두 번째 눈을 원한다면, 해당 방법이 서류로 접수되기 전에 전문가와 상담하세요.
