Пептидные библиотеки протеомного происхождения для определения профиля глубокой специфичности реагентов для модификации N-конца

N-концы белков и пептидов являются важными мишенями для селективной модификации с помощью хемопротеомных реагентов и инструментов биоконъюгации.. N-концевой α-амин встречается только один раз в каждой полипептидной цепи., что делает его привлекательной мишенью для биоконъюгации белков.. В клетках, новые N-концы могут быть созданы путем протеолитического расщепления и захвачены реагентами для модификации N-конца, которые позволяют идентифицировать протеазные субстраты в масштабах всего протеома с помощью тандемной масс-спектрометрии. (ЖХ-МС/МС). Понимание специфичности N-концевой последовательности модифицирующих реагентов имеет решающее значение для каждого из этих применений.. Библиотеки пептидов, полученных из протеома, в сочетании с ЖХ-МС/МС являются мощными инструментами для определения профиля специфичности последовательности реагентов для модификации N-конца.. Эти библиотеки очень разнообразны., а ЖХ-МС/МС позволяет анализировать эффективность модификации десятков тысяч последовательностей в одном эксперименте.. Пептидные библиотеки, полученные из протеома, являются мощным инструментом для определения специфичности последовательностей ферментных и химических реагентов для мечения пептидов.. Субтилигаза и 2-пиридинкарбоксальдегид (2СПС) представляют собой два реагента, которые были разработаны для селективной модификации N-концевых пептидов и могут быть изучены с использованием пептидных библиотек, полученных из протеома.. В этом протоколе описаны шаги по созданию пептидных библиотек, полученных из протеома с разнообразными N-концами, и по применению этих библиотек для профиля специфичности реагентов для модификации N-конца.. Мы подробно описываем шаги по профилированию специфичности 2-пиридинкарбоксальдегида., реагент химической модификации, и субтилигаза, реагент ферментативной модификации. Эти протоколы можно легко адаптировать к альтернативным источникам протеома и другим реагентам для мечения N-концевых пептидов..