Разработка радиоактивно меченного необратимого пептида-лиганда для ПЭТ-визуализации фактора роста эндотелия сосудов

Агенты визуализации на основе пептидных зондов обладают желаемыми фармакокинетическими свойствами при условии, что они обладают высоким сродством к своей мишени in vivo.. Подход к улучшению сродства пептидного лиганда к его мишени заключается в том, чтобы сделать это взаимодействие ковалентным и необратимым.. Для этой цели, мы оценили метку аффинного пептида, меченного 64Cu, 64Cu-L19K-(5-фтор-2,4-динитробензол) (64Cu-L19K-ФДНБ), который ковалентно и необратимо связывается с фактором роста эндотелия сосудов. (ВЭФР) в качестве агента ПЭТ-визуализации. Мы сравнили in vivo свойства 64Cu-L19K-FDNB в ксенотрансплантатах опухолей, экспрессирующих VEGF, с его нековалентно связывающимися аналогами., 64Cu-L19K-(2,4-динитрофенил) (64Cu-L19K-ДНП) и 64Су-Л19К. Методы: Пептид L19K (GGNECDIARMWEWECFERK-CONH2) был сконструирован с 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусной кислотой на N-конце для радиоактивной метки 64Cu с полиэтиленгликолевым спейсером между пептидом и хелатом.. 1,5-дифтор-2,4-динитробензол конъюгировали с С-концевым лизином для сшивания с VEGF., в результате L19K-FDNB. 64Cu-L19K-FDNB анализировали на ковалентное связывание с VEGF in vitro.. В качестве контроля, L19K был конъюгирован с 1-фтор-2,4-динитробензолом., в результате чего получается L19K-DNP. ПЭТ-визуализация и исследования биораспределения 64Cu-L19K-FDNB, 64Cu-L19K-ДНП, и нативный 64Cu-L19K сравнивали в ксенотрансплантатах HCT-116.. Исследования блокирования 64Cu-L19K-FDNB проводились с одновременным введением избытка немеченого L19K-FDNB.. Результаты: Исследования связывания in vitro подтвердили ковалентное и необратимое связывание 64Cu-L19K-FDNB с VEGF., тогда как 64Cu-L19K-DNP и 64Cu-L19K не связывались ковалентно. ПЭТ-визуализация показала более высокое поглощение опухолью 64Cu-L19K-FDNB, чем 64Cu-L19K-DNP и 64Cu-L19K., со средними стандартизированными значениями поглощения 0.62 ± 0.05, 0.18 ± 0.06, и 0.34 ± 0.14, соответственно, в 24 час после инъекции (П < 0.05), и 0.53 ± 0.05, 0.32 ± 0.14, и 0.30 ± 0.09, соответственно, в 48 час после инъекции (П < 0.05). Исследования блокирования 64Cu-L19K-FDNB в присутствии избытка немеченого пептида показали 53% снижение поглощения опухолью 48 час после инъекции. Заключение: В этом исследовании, подтверждающем концепцию, использование ковалентно-связывающего пептидного лиганда против VEGF улучшает накопление индикатора в месте опухоли in vivo, по сравнению с его аналогами нековалентного связывания пептидов. Этот метод является многообещающим инструментом для повышения эффективности пептидных зондов в качестве средств визуализации..