Litšenyehelo tsa Peptide Synthesis - Bongata, Bohloeki le Phosphorylation e khethehileng ea sebaka
Tripeptide 1 Feme Li-Peptide tsa Sebopeho sa Tloaelo Morero oa peptide o ka shebahala o le theko e tlase ho fihlela sehlopha se hlalosa palo ea lintho, e phahamisa tlhoko ea bohloeki, kapa e eketsa phetoho. Liphetoho tsena li ama likarolo tse fapaneng tsa mosebetsi. Ho utloisisa litšenyehelo tse amanang le peptide synthesis, botsa hore na ke lits'ebetso life tse ling kapa bopaki boo litlhaloso tse ntlafalitsoeng li li hlokang.
Papiso e molemo ke litšenyehelo tsa thepa e amohelehang e tšehetsang teko e reriloeng. Theko e tlase ka milligram e le 'ngoe ha e na tsebo e ngata haeba chelete e kenyelletsa metsi a sa hlalosoang le li-counterions, haeba tlhahlobo e hlokahalang e sa kenyelletsoa, kapa haeba tokiso ea bobeli e tla hlokahala pele tlhahlobo e qala.
Sengoliloeng sena se hlahloba mefuta e meraro ka thoko: bongata bo fanoeng, tlhokeho ea bohloeki ba chromatographic, le phetolo e le nngwe e kgethehileng sebaka. E sebelisa litlhaloso tse inahaneloang 'me e siea litheko tsohle tsa quotation. Ha e fane ka litefiso tsa hona joale tsa 'maraka, boemo ba bafani, kapa nka hore morekisi e mong le e mong o sebelisa mofuta o tšoanang oa litheko.
Lithuto tsa motheo ke H-GAQLSAVKGTLEAAGQSVAKLQAG-NH2, peptide e setseng e mashome a mabeli a metso e mene e nang le Nterminus ea mahala, sebaka se senyenyane sa C, le tlhophiso ea L ho masalla ohle a chiral. Mosebetsi oa eona oa baeloji le ts'ebetso ea tlhahiso ha ea hlalosoa. Kopo ea pele e inahaneloang ke 10 mg ho latela sepheo seo ho lumellanoeng ka sona-peptide le bonyane 95% bohloeki ba sebaka tlas'a mokhoa o lumellanoeng.
E feto-fetohang: ho eketsa bongata ba phano
Bapisa a 10 kopo ea mg ka a 50 mg kopo ha u ntse u tšoere tatellano, mokhoa oa bohloeki, foromo ea ho qetela, le litlhoko tsa tlhahlobo kamehla. Boitsebiso bo amohelehang bo ka 'na ba hloka motsoako o moholoanyane, matla a eketsehileng a ho hloekisa, mosebetsi o eketsehileng oa ho itšehla thajana, kapa tokisetso e fapaneng ya tlhahiso. Kakaretso ea kakaretso e tla phahama hangata, empa phetoho e ke ke ea baloa ho tloha ho bongata feela.
Mosebetsi o mong o ka arolelanoa ka bongata: mokhoa oa ho seta, litokomane, 'me litlhahlobo tse itseng ha li hlile ha li eketsehe ka tekanyo e tobileng ea boima bo fanoeng. Sena se ka hlahisa litšenyehelo tse tlase tse qotsitsoeng ka milligram ka chelete e kholoanyane. Ka lehlakoreng le leng, moeli oa ts'ebetso kapa tlhoekiso e thata e ka hloka mosebetsi o eketsehileng. Ka hona, theolelo ea molumo ke monyetla oa ho botsa ka, e seng tokelo e nahanoang.
Bapisa lintlha tse amohelehang, eseng li-labels tsa sekala. Tlhahiso e inahaneloang ea limiligrama tse 50 e ka ba beche e le 'ngoe e kholoanyane, likarolo tse hlano tse phethiloeng ka thoko ho motsoali a le mong, kapa thepa e kopantsoeng ho tloha mathateng a mangata. Litokisetso tseo li ka ba le litlhoko tse fapaneng tsa mosebetsi le bopaki leha kakaretso e boletsoeng e lekana.
Haeba teko e hloka sehlopha se le seng sa motsoali, bua joalo pele u kopa palo e fapaneng. Haeba lihlopha tse ikemetseng li amoheleha kapa li na le thuso ea saense, boloka boitsebiso ba bona le chelete e abetsoeng e mong le e mong. Kakaretso e kopaneng ha ea lokela ho hlakola sebopeho sa phepelo e fanoeng.
Botsa hore na theko e kenyelletsa nehelano e hlokahalang bakeng sa ts'ebeliso e reriloeng. Boitsebiso bo eketsehileng ha bo bolele feela likarolo tse ngata tse amoheloang tsa liteko haeba karohano ea lehae kapa litekanyo tse eketsehileng li sala ka ntle ho sephutheloana se reriloeng.
Hlakisa hore na odara e kholoanyane e tla fanoa ho tsoa sehlopheng se le seng kapa tse 'maloa le hore na sehlopha ka seng se fumana tlhahlobo e tšoanang. Haeba teko e itšetlehile ka lotho e le 'ngoe e bapisoang, ho kopanya chelete e itseng ho tsoa mathateng a arohaneng ho ka 'na ha se ke ha khotsofatsa tlhoko ea pele.
Boloka palo ea denominator e tsamaisana: boima ba phofo, kakaretso ea lisebelisoa tsa peptide le palo eo u e abetsoeng ke lintho tse ka fanoang tse fapaneng. Leibole ea litaba e hloka Fektheri ea Dipeptide-2 mokhoa le tlhaloso ea eona. U se ke ua kenya karoloana ea phetolelo ho tsoa bukeng ea litšupiso e sa amaneng e le ho etsa hore mantsoe a qotsitsoeng a bapise.
Hape kenyelletsa lintho tse sebelisoang ke mangolo a thuto, ho sebetsana le liteko, le ho pheta litekanyo. Ho reka hantle chelete e reriloeng bakeng sa teko ea mantlha e ka ba se sa lekana haeba ho sa lumelloe polokelo. Polokelo e loketseng e ipapisitse le projeke ho fapana le peresente e akaretsang e kenyellelitsoeng odara e ngoe le e ngoe.
Tse peli tse feto-fetohang: ho phahamisa tlhokeho ya bohloeki
Khutlela ho 10 mg motheo le ho bapisa litlhoko tse sisintsoeng tsa bonyane 95% le bonyane 98% bohloeki ba sebaka. Linomoro tsena ke li- parameter tsa quotation tse inahaneloang, ha se taba ea hore boemo bofe kapa bofe bo nepahetse lefatšeng ka bophara. Boloka mokhoa oa ho hlahloba le motheo oa kopanyo o tsamaellana e le hore palo e phahameng e bolele tlhokahalo e boima ho feta tekanyo e fapaneng..
Moeli o matla oa ho se hloeke o ka hloka hore ho behoe likaroloana tse nyane, mohato o fetang o le mong oa tlhoekiso, ntlafatso ea mokhoa o eketsehileng, kapa tlhahiso e kholoanyane ea pele ea ho lefella tahlehelo ea ho hlaphoheloa. Haeba ts'ebetso ea pele e se e ntse e kopana le tlhokahalo e phahameng, mosebetsi o eketsehileng e ka ba nyenyane. Haeba ho se hloeke ho amanang haufi-ufi ho thata ho arohana, phapang e ka ba kholo.
Tlhokahalo ea bohloeki ke tekanyetso ea ho qetela, eseng taelo ea hore tlhoekiso e khethehileng e tlameha ho etsahala. Haeba ts'ebetso e thehiloeng e se e hlahisa lintho tse kopanang le maemo a thata ho latela mokhoa o lumellanoeng, ha ho mohato o mocha oa karohano o latelang ka mokhoa o utloahalang ho tloha palo e fetotsoeng feela.
Tabeng e 'ngoe e inahaneloang, tekanyetso e thata e ka hloka karohano e fapaneng le moralo o ntlafalitsoeng oa ho hlaphoheloa. Khopolo e lokela Peptide Labeling bolela mosebetsi o sisintsoeng le ho hloka botsitso ho fapana le ho fana ka maikutlo a hore keketseho e 'ngoe le e 'ngoe ea liperesente tse peli e na le moelelo o tšoanang oa tekheniki..
Boloka mokhoa ofe kapa ofe o fetotsoeng o bonahala. Peresente e phahameng e tlalehiloeng e fumanweng ka ho fetola seo sebono kapa kopanyo e se bonang ha e tshwane le ho ntlafatsa thepa. Haeba mokhoa o fetoha ka lebaka le utloahalang, lekola bocha hore na mokhoa oa khale le o mocha o theha eng. Peptide ea mala
The Thuto ea Truex automated-flow neoantigen e arola kopano e potlakileng le ho fumana thepa e hloekisitsoeng. E fana ka maemo a tekheniki bakeng sa mosebetsi o tlase, eseng lenane la litheko kapa tefiso e sa fetoheng ha tlhoko ea bohloeki e fetoha.
Botsa hore na mokhoa o sisintsoeng o ka khetholla litšila life. Peresente e phahameng ea sebaka ha e fane ka bonnete ba bosieo ba isoma ea coeluting, residual counterion, endotoxin, kapa tšobotsi e 'ngoe e lekantsoeng ka thoko. Ho lefella palo e phahameng ka tlas'a mokhoa o fosahetseng ho ka 'na ha siea taba ea sebele ea teko e sa rarolloe.
Nahana ka liphello tsa ka bobeli tlas'a- le tlhaloso e feteletseng. Tekanyetso e sa lekaneng ea ho se hloeke e ka etsa hore liphetho li be tse sa utloahaleng 'me tsa lebisa ho sebetsa bocha. Tlhokahalo e boima ho sa hlokahale e ka nka tekanyetso kapa thepa ntle le ho araba potso e nepahetseng. Qeto e lokela ho latela tlhahlobo le lipelaelo tse tsejoang, ka bopaki bo kopiloeng bo boletsoe ka ho hlaka.
Tse tharo tse feto-fetohang: ho eketsa phosphate sebakeng se itseng
Khutlela hape ho bongata ba motheo le bohloeki, ebe u fetola feela sepheo sa molek'hule ka phosphorylating Ser17. Tatelano e boetse e na le Ser5, kahoo sebaka se tlameha ho boleloa ka mokhoa o hlakileng. Sehlahisoa se fetotsoeng ke molek'hule e fapaneng, 'me boitšoaro ba eona ba baeloji ha bo nahane hore bo lumellana le peptide e sa fetoloang.
Ho na le khetho ea bobeli ea ntlha e patiloeng ho "fetola feela phetoho." Ho boloka 10 li-milligrams tsa boima ba 'mele bo behiloeng bo tsitsitseng ha bo boloke palo ea limolek'hule e tsitsitse ha boima ba molar bo fetoha. Haeba teko e ja li-moles tse lekanang, kopa palo e fetotsoeng motheong oo.
Ka tsela ea tšoantšetso, haeba boima ba molar bo sa fetotsoeng ke M mme phosphate e eketsa keketseho e ntle ea molar-mass ΔM tlas'a kopano e khethiloeng., bongata bo lekanang ba sepheo bo fana ka tekanyo ea palo M/(M + ΔM). Karolelano e ka tlase ho e le 'ngoe. Ena ke lipalo, eseng kabelo e lekantsoeng ea litaba kapa ho bolela esale pele litheko.
Hape boloka tšitiso ea maemo. Ser5 le Ser17 phosphorylation e ka ba le keketseho e ts'oanang ea sebopeho. Keketso ea phosphate ea theko e nepahetseng ha e thehe sebaka se hlokahalang. Papiso e lokela ho bolela hore na bopaki ba setša bo kenyelelitsoe le hore na chelete e lekanang ea ho qetela, foromo le tšebeliso e reretsoeng li lula li tšehetsoa.
Ka hona, phapang ea phosphorylation e ka qotsoa ka litsela tse peli tse nepahetseng: boima bo lekanang bo abetsoeng bakeng sa papiso ea ho reka, kapa limolek'hule tse lekanang bakeng sa teko e jang limolek'hule. Bolela hore na ke pheletso efe e tsitsitseng. Leha e le hore ka tlhaho o phahame, empa ho feto-fetoha pakeng tsa bona ntle le tlhaloso ho ka etsa hore papiso ea theko ea yuniti e bonahale e fetoha ka mabaka ao ha e le hantle e leng palo e fetotsoeng ho e-na le qeto ea theko ea mofani..
Hlalosa phosphorylation e le phetoho e itseng ea limolek'hule. The Ho kena ha Unimod phospho e fana ka monoisotopic increment of 79.966331 Le. Tlhahlobo eo ea sebopeho ha e hlahise sehlopha sebakeng sa heno, etsa qeto ea mosebetsi oa tlhahiso kapa qotsa litšenyehelo tsa ona. Dipeptide-2 Wholesale
Bopaki bo bongata bo lumellanang le phosphorylation ha bo fane ka eona ka boeona ho Ser17 ho fapana le Ser5. Haeba boitsebiso ba sebaka bo bohlokoa, qotsa e lokela ho kenyelletsa leano le loketseng la ho aha sebaka. Mosebetsi oo o eketsehileng oa tlhahlobo ke phello ea sepheo se ntlafalitsoeng 'me se lokela ho bonahala ha ho bapisoa.
Fumana litlhahiso tse tobileng morero oa hajoale bakeng sa sepheo se fetotsoeng. Botsa hore na ke liphetoho life tsa ts'ebetso le tlhahlobo e kenyellelitsoeng le hore na ke lipotso life tse ntseng li ka etsahala. Leqephe la litšebeletso tse akaretsang ha le khone ho theha theko e tlamang, kemiso kapa kabelo e atlehileng ea sebaka bakeng sa phosphopeptide ena e inahaneloang.
| Phapang e fetohile | Mohlomong khatello ea chelete | Hobaneng phello e ka fapana | Ho hlokahala bopaki |
|---|---|---|---|
| 10 mg ho 50 mg e amoheloang sepheo | Mosebetsi o eketsehileng oa tlhahiso le ho qeta; litšenyehelo tse arolelanoang li ka fokotsa litšenyehelo tsa yuniti | Bokhoni ba sehlopha, ho hlaphoheloa, 'me palo ea ho matha e ka fetoha | Litlhaloso tse tsamaellanang tse hlalosang motheo oa bongata le tlhophiso ea sehlopha |
| 95% ho 98% bohloeki ba sebaka | Hoa khoneha ho hloekisa le ho fokotsa ho hlaphoheloa | Mokhoa oa motheo o ka 'na oa se o ntse o finyella se hlokahalang, kapa ho ka ba thata ho rarolla ho se hloeke | Tlhaloso ea mokhoa, tekolo ya kgonahalo, 'me e kenyelelitse sebaka sa tlhoekiso |
| Ser17 e sa fetotsoeng ho ea ho phosphoserine | Lintho tse ka eketsoang, tshebetso, le mosebetsi oa ho hlahloba | Litlhoko tsa ho lumellana le ho netefatsa sebaka li itšetlehile ka tatellano | Sebopeho se fetotsoeng hantle le sephutheloana sa bopaki bo hlophisitsoeng |
Tšoara mela e le lipotso mabapi le mosebetsi o qotsitsoeng. Chelete e kholoanyane, tekanyo e matla ea ho se hloeke le phosphate e tobileng sebaka e ka sebelisana le mokhoa o tšoanang. Litebello tsa boleng ha li fane ka tlatsetso ea litheko kapa ho tiisa hore tlhoko e 'ngoe le e 'ngoe e eketsa ts'ebetso e fapaneng.
Papiso ea mantsoe le RFQ eo u ka e tlatsang
Sebelisa litlhaloso tse arolelanoang ho bafani ba thepa 'me u kope mefuta e fapaneng. Sena se boloka mohloli oa phapang ka 'ngoe ea theko o bonahala. Tafole e latelang ke kopo e inahaneloang, chelete eohle e lefuoang ka boomo e sa tsejoe.
| Kopa | Sepheo le chelete | Tlhahiso ea bohloeki | Theko le nako |
|---|---|---|---|
| Baseline | E sa fetoloang 24-mer; 10 mg target-peptide motheo | Bonyane 95% ka mokhoa o lumellanoeng | Ho qotsoa |
| Phapang ea bongata | Sepheo se tšoanang; 50 mg motheong o tšoanang | E tšoanang le ea motheo | Ho qotsoa ka thoko |
| Phapang ea bohloeki | Sepheo se tšoanang; 10 mg motheong o tšoanang | Bonyane 98% ka mokhoa o hlophisitsoeng | Ho qotsoa ka thoko |
| Phetoho e fapaneng | Sepheo sa Ser17-phosphorylated; 10 mg ka motheo o tšoanang o hlalositsoeng | Litlhoko tsa mokhoa oa motheo, ka ho tshwaneleha ho lekolwa bocha | Ho qotsoa, ho kenyelletsa bopaki bo eketsehileng ba sebaka |
Tlatsa RFQ ka meaho e nepahetseng; tšebeliso e reretsoeng ea laboratori; kopile counterion; meedi e setseng e loketseng le mekhoa; tekanyo ea bongata; aliquots; lifaele tsa tlhahlobo; le mekhoa ea ho amohela. Kenya letsatsi le hlokahalang la ho fihla, sebaka sa dikepe, qotsa chelete, makhetho le kalafo ea likepe, bonnete ba mantsoe a qotsitsoeng, le menahano mabapi le litlhaloso tse hlōlehileng kapa ho pheta-pheta mosebetsi.
Kopa phapang pakeng tsa synthesis, tlhoekiso, tlhatlhobo, litokomane, le ho tsamaisa moo ho nang le thuso. Khoutu e kopaneng e ntse e ka bapisoa haeba e akaretsa boholo bo tšoanang. Se ke oa nka lits'ebeletso tse qheletsoeng ka thoko e le tsa mahala kapa oa nahana hore nako e khuts'oane ea ho kopanya e kenyelletsa tlhahlobo ea ho qetela le thomello.
Ha litheko li fihla, bapisa kakaretso ea litšenyehelo bakeng sa thepa e amohelehang pele u bala litšenyehelo tsa yuniti. Haeba qotso e le 'ngoe e sebelisa boima bo feteletseng' me e 'ngoe e sebelisa palo e fanoeng, rarolla phapang eo pele. Haeba motho a haelloa ke bopaki bo hlokahalang ba sebopeho, e ka ba theko ea mosebetsi o sieo kapa ho nka tlhahiso e sa phethahala bakeng sa morero o boletsoeng.
LBH: ho fetolela peptide synthesis litšenyehelo liphetoho
Na theko ka masalla a lekaneng ho etsa tekanyetso ea peptide? Che. E ka ba kopano ea pele ea khoebo, empa bothata ba tatelano, qetelo, palo motheo, liphetoho, 'me boholo ba tlhahlobo bo ka fetola litšenyehelo tsa sebele tsa morero.
E etsa ho odara litšenyehelo tse tlase ka milligram e le 'ngoe? Che. Mosebetsi o kopanetsoeng o ka thusa, empa lihlopha tse eketsehileng kapa lithibelo tsa ts'ebetso li ka fokotsa phello eo. Kopa tlhahiso e tšoanang ka bongata ka bobeli 'me u bapise mantsoe a qotsitsoeng.
Na kamehla ke lokela ho khetha bohloeki bo phahameng ka ho fetisisa bo fumanehang? Khetha bopaki bo sa hloekang boo teko e bo hlokang. Karolo e phahameng ea sebaka tlas'a mokhoa o sa lokelang e ke ke ea theha Ser17 ho e-na le phosphorylation ea Ser5. Potso ea sebaka le tlhoko ea ho se hloeke li hloka tse loketseng, bopaki bo hlakileng.
Mohato o latelang ke ofe ha litheko li le sieo? Kenya litlhaloso tse tlatsitsoeng le mefuta e fapaneng e hlalositsoeng ka thoko bakeng sa khotheishene. Boloka litheko le linako tse sa tsejoeng li tšoailoe joalo, ebe u bapisa likarabo ka mantsoe a tšoanang ho e-na le ho tlatsa likheo ka lethathamo le sa amaneng kapa litheko tsa kalafo.
