Häufig gestellte Fragen
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How to store peptides?
Lyophilisierte Peptide
Zur Langzeitlagerung von Peptiden, Wir empfehlen, sie als festes Pulver aufzubewahren. Lyophilisierte Peptide können bei minimaler Zersetzung bei -20 °C oder niedriger gelagert werden. Kunden wird empfohlen, individuell angepasste Peptide jedes Mal erneut zu prüfen 2 Jahre ab dem Datum der Qualitätskontrollfreigabe.
Peptide in Lösung
Peptide in Lösung sind weniger stabil und neigen zum Abbau. Wässrige Lösungen zum Auflösen von Peptiden sollten steril und rein sein.
In Lösung, Eine bestimmte Menge an Peptid kann abgebaut werden, abhängig von den in der Sequenz vorhandenen Aminosäuren. Einige Beispiele sind unten aufgeführt:
– Methioninhaltige Peptide, Cystein- oder Tryptophanreste sollten aufgrund der Oxidation nur eine begrenzte Lagerzeit in Lösung haben. Diese Peptide sollten in einem sauerstofffreien Lösungsmittel gelöst werden. –
Glutamin und Asparagin können zu Glutaminsäure und Asparaginsäure desamidiert werden, jeweils. –
Cystein kann einer oxidativen Zyklisierung unterliegen, um eine Cystein-Cystein-Disulfidbindung zu bilden (die innerhalb oder zwischen Disulfidbindungen gebildet werden können). –
Die aufgeladenen Rückstände (Asparaginsäure, Glutaminsäure, Lysin, Arginin, Histidin) sind hygroskopisch (Wasser aus der Luft aufnehmen) und neigen dazu, eine zähflüssige Flüssigkeit zu bilden, klares Öl. Diese physikalische Veränderung hat möglicherweise keinen Einfluss auf die Natur des Peptids. Es wird empfohlen, solche Peptide zu lyophilisieren, um Spuren von Wasser zu entfernen, Anschließend wird mit Stickstoff entgast, um sicherzustellen, dass sich kein Wasserdampf im Fläschchen befindet, und dann schnell gekappt.
Um Schäden durch wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden, Wir empfehlen Benutzern, nur die Menge an Peptid aufzulösen, die für das aktuelle Experiment erforderlich ist. Überschüssige Lösung sollte bei ≥ gelagert werden -20 o C, bis es benötigt wird.
Feuchtigkeit vermeiden.
Denn Feuchtigkeit verringert die Langzeitstabilität von Peptiden deutlich, Wir empfehlen, die Peptide vor dem Öffnen der Fläschchen in einem Exsikkator auf Raumtemperatur zu bringen. Nach Abschluss der Peptidabgabe, Die verbleibenden Peptide im Röhrchen sollten vorsichtig mit wasserfreiem Stickstoff gespült werden, Dann sollte der Behälter verschlossen werden, mit einer Siegelfolie versiegelt, und bei -20°C gelagert.
Die Löslichkeitseigenschaften verschiedener Peptide variieren erheblich. Rückstände wie Alanin (Ala), Cystein (Cys), Isoleucin (Mit), Leucin (Leu), Methionin (Getroffen), Phenylalanin (Phe), und Valin (Val) tragen zur Hydrophobie und Löslichkeit des Peptids in wässrigen Lösungen bei, und es wird empfohlen, dass der Kunde diese Richtlinien befolgt, wenn er Peptide individuell anpasst.
Löslichkeitseigenschaften
Die Löslichkeit von Peptiden hängt stark von der Aminosäuresequenz ab. Natürlich hydrophobe Peptide (A, F, G, V, L, ICH, M, W, P mit höherer Neigung) erfordern organische Lösungsmittel zur Solubilisierung. Saure Peptide (höhere Neigung zu D, E in der Peptidsequenz) erfordern zur Solubilisierung basische wässrige Puffer, während basische Peptide (höhere Neigung zu K, H, und R) erfordern zur Solubilisierung saure wässrige Puffer.
Lösungsmittelauswahl
Angesichts der Einschränkungen Ihres Tests, Wir empfehlen die Verwendung der folgenden Richtlinien, um das beste Lösungsmittel für die Solubilisierung von Peptiden zu bestimmen
Hydrophobe Peptide
Um hydrophobe Peptide wieder aufzulösen, hinzufügen 100 µL DMSO und beschallen, bis eine homogene Lösung entsteht. Nächste, Fügen Sie den Puffer Ihrer Wahl hinzu, um eine zu erstellen 1 mg/ml-Lösung (desto höher ist die Peptidkonzentration, desto größer ist die benötigte DMSO-Menge).
Hydrophil (Sauer) Peptide
Um saure Peptide wieder aufzulösen, hinzufügen 100 µL von 1% NH 4 OH zu 1 mg Peptid und Vortex. Sobald die Lösung klar ist, Fügen Sie den Puffer Ihrer Wahl hinzu, um eine zu erstellen 1 mg/ml-Lösung.
Hydrophil (Basic) Peptide
Um ein basisches Peptid wiederherzustellen, destilliertes Wasser hinzufügen 1 mg Peptid und Vortex.
Was ist der Unterschied zwischen Netto- und Bruttopeptidgewicht??
Der Industriestandard besteht darin, Peptide in lyophilisierter Form als Bruttogewicht zu liefern. Bruttopeptidgewicht ist das Gesamtgewicht aller im lyophilisierten Pulver vorhandenen Bestandteile. Dazu gehört auch das interessierende Peptid, etwaige Peptidverunreinigungen, Wasser, restliche Lösungsmittel, und Gegenion.
Im Gegenteil Netto Peptidgewicht, berechnet aus dem Nettopeptidgehalt, ist das Gewicht von nur das Peptid Bestandteil im lyophilisierten Pulver. Dies bietet genauere Konzentrationen Ihrer nachfolgenden Peptidlösungen. Somit, Wir empfehlen Netto-Peptidgewichtsmengen für Benutzerdefiniertes Peptid Bestellungen.
Nettopeptidgehalt Die Messung erfolgt mittels Aminosäureanalyse (AAA; begrenzte Genauigkeit, erfordert jedoch eine geringe Materialmenge) oder Elementaranalyse (CHN; erfordert Milligramm Peptid, ist aber genauer). Beide Methoden liefern einen Prozentwert (dh., 75% Nettopeptidgehalt).
Der Nettopeptidgehalt hängt von der Menge des vorhandenen Gegenions ab*, was von der Peptidsequenz abhängt. Im Wesentlichen, desto höher ist die Peptidladung, desto geringer ist der Peptidgehalt
*Notiz: Das zur Berechnung des Nettopeptidgehalts verwendete Element basiert auf dem Peptid-Gegenion. Dies geschieht, um sicherzustellen, dass das Gegenion nicht zur Menge des Peptidgehalts beiträgt. Zum Beispiel, wenn TFA oder Acetat das Gegenion sind, Stickstoff wird verwendet, da er im Peptid vorkommt, nicht jedoch in TFA oder Acetat. Aus dem gleichen Grund kann Kohlenstoff oder Stickstoff verwendet werden, wenn Chlorid das Gegenion ist.
Berechnungen des Nettopeptidgewichts:
Nettopeptidmenge (Gesamtpeptid) – Methode, die wir für kundenspezifische Peptidbestellungen verwenden.
Multiplizieren Sie den Prozentsatz des Nettopeptidgehalts (Dezimalform) durch das Peptid-Bruttogewicht, um die Menge der Nettopeptidmenge zu erhalten (Gesamtpeptid).
Zum Beispiel:
Für 5 mg Bruttopeptid/Fläschchen:
Der Peptid-Nettogehalt beträgt 84%.
Genaue Menge des Gesamtpeptids = 0.84*5 mg = 4,2 mg Gesamtpeptid
Netto-Peptidmenge von Interesse – am genauesten — Der Kunde kann diese Methode selbst verwenden, um das gewünschte Peptid zu berechnen.
Multiplizieren Sie den Prozentsatz des Nettopeptidgehalts mit dem Bruttogewicht des Peptids, und die Peptidreinheit (durch HPLC), um die genaue Menge des gewünschten Peptids zu berechnen. Der Nettopeptidprozentsatz (Dezimalform) wird mit der Peptidreinheit multipliziert (Dezimalform).
Zum Beispiel:
Für 5 mg Bruttopeptid/Fläschchen mit:
Der Peptid-Nettogehalt beträgt 84%.
Die genaue Menge des interessierenden Peptids ist = 0.84*0.96*5 mg=4,03 mg
Welche Art von Chemie verwenden Sie??
MOL Changes nutzt die Festphasen-Fmoc-Chemie anstelle der BOC-Chemie. Die Fmoc-Chemie ermöglicht die Entfernung von Schutzgruppen unter milden Bedingungen während der Peptidverlängerung, während die BOC-Chemie die Verwendung einer starken Säure erfordert, um die Schutzgruppen während der Peptidverlängerung zu entfernen. Zusätzlich, Die Fmoc-Chemie nutzt Trifluoressigsäure (TFA) um das Peptid vom Harz zu entfernen, während die BOC-Chemie Flusssäure verwendet (HF). HF ist farblos, stark ätzend, und ein Kontaktgift.
daher, MOL Changes verwendet Fmoc-Chemie, da diese milder ist, flexibel, und vielseitig im Vergleich zur BOC-Chemie.
Wie berechne ich die Molarität meines Peptids??
Unter Molarität versteht man die molare Konzentration einer Lösung, Das ist die Anzahl der Mole des gelösten Stoffes, in der gelöst ist 1 Liter Lösung, ausgedrückt als mol/L, oder M.
Molarität [M] = Masse / (Volumen x Molmasse); Mol = Konzentration (g/L) x Lautstärke (L)/MW (g/mol)
Beispiel:
Gegeben: 1mg trockenes Peptidpulver mit MW: 20KDa (Die Molmasse des Peptids beträgt 20 g/mol)
Bestimmung der Molarität bei bekannter Masse und bekanntem Volumen
Für eine 1-ml-Lösung dieses Peptids:
Molarität = Masse (0.001G) / (Volumen (0.001L) x Molmasse (MW 20,000) = 50 µM
Zur Bestimmung der Masse, um eine bestimmte Molarität zu erreichen:
Wenn für Ihren Test, Sie benötigen 0,01 mM Arbeitspeptidlösung in 1 ml Wasser, Berechnen Sie dann die erforderliche Masse wie folgt:
Masse = Molarität x Volumen x Molmasse
Masse = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20.000 g/mol = 0,0002 g
Somit, Sie benötigen 0,2 mg/ml Peptid, um eine Arbeitslösung von 0,01 mM zu erhalten.
In welcher Form werden Peptide abgegeben??
Wir liefern als lyophilisierte oder rohe Pulver- und Peptidlösung.
Woher weiß ich, ob mein Peptid löslich ist??
Die Löslichkeit eines Peptids in einem bestimmten Lösungsmittel hängt von der Aminosäuresequenz ab und ist oft schwer vorherzusagen. Im Fall von Katalogpeptiden, Die Löslichkeitsinformationen sind im QC-Datenblatt aufgeführt. Für kundenspezifische Peptide, Bitte beachten Sie den Abschnitt mit der Überschrift “Wie soll ich mein Peptid solubilisieren?”.
Was ist der Unterschied zwischen Peptidgehalt und Peptidreinheit??
Der Peptidgehalt ist kein Hinweis auf die Reinheit des Peptids, da es sich um zwei separate Messungen handelt. Die Reinheit wird durch analytische HPLC bestimmt und zeigt das Vorhandensein/Fehlen anderer peptidischer Verunreinigungen an (d.h. verkürzte Peptide).
Der Nettopeptidgehalt bestimmt die tatsächliche Menge des Peptids (Peptid von Interesse sowie die Peptidverunreinigungen) in der Probe vorhanden. Der Nettopeptidgehalt wird traditionell durch Aminosäureanalyse gemessen (AAA; begrenzte Genauigkeit, erfordert jedoch eine geringe Materialmenge) oder Elementaranalyse (CHN; erfordert Milligramm Peptid, ist aber genauer).
Wie reinigen Sie im Allgemeinen Ihre Peptide??
MOL Changes-Peptide werden im Allgemeinen durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, verwenden 2 Puffer enthalten 0.1% Trifluoressigsäure (TFA). Der erste Puffer (Puffer A) besteht aus 0.1 % TFA in entionisiertem Wasser und dem zweiten Puffer (Puffer B) besteht aus 0.1 % TFA in Acetonitril (ACN).
Allgemein, Rohpeptide werden zunächst in einer Lösung von Puffer A gelöst, etwas Puffer B, oder ein organisches polares Lösungsmittel wie DMSO. Wenn ein organisches polares Lösungsmittel oder Puffer B verwendet wurde, Diese klare Lösung wird zunächst mit Puffer A verdünnt. Nächste, Die Peptidlösung wird filtriert und auf das präparative HPLC-System geladen. Verwendung eines optimierten Methodengradienten, Die Fraktionen werden dann basierend auf den Absorptionsmesswerten gesammelt. Anschließend wird jede Fraktion mittels analytischer HPLC analysiert, um sicherzustellen, dass die Reinheit jeder Fraktion der erforderlichen Reinheitsspezifikation entspricht.
Diese „reinen“ Fraktionen werden dann zusammengeführt und lyophilisiert. Das „reine“ Pulver wird dann auf Reinheit und Identität geprüft, um sicherzustellen, dass das richtige Peptid hergestellt wurde.
Endlich, Eine unabhängige QC-Gruppe bei AnaSpec testet das Peptid erneut, um sicherzustellen, dass alle Testattribute den erforderlichen Spezifikationen entsprechen.
Wie schreibe ich meine Peptidsequenztermini??
Die für die Sequenztermini verwendete internationale Nomenklatur lautet wie folgt:
– N-Terminus: H bedeutet freies Amin (NH2-), Ac bedeutet Acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr bedeutet Pyroglutaminsäure
– C-Terminal: OH bedeutet freie Säure (-COOH), NH2 bedeutet Amid [-CONH2]
– Modifikationen an der Seitenkette von Aminosäuren sind in Klammern hinter der entsprechenden Aminosäure angegeben. Zum Beispiel; phosphoryliertes Serin = S(PO3H2) oder epsilon-N-acetyliertes Lysin = K(Ac)
Während der Peptidproduktion, Ionen in den Synthese- und Reinigungslösungen binden an die geladenen Aminosäureseitenketten des Peptids, Salze bilden. Diese Ionen werden als Peptid-Gegenionen bezeichnet und helfen, die Ladung des Peptids auszugleichen.
Trifluoressigsäure (TFA) wird häufig bei der Peptidsynthese und -reinigung verwendet.
Es bildet mit basischen Aminosäuren Trifluoracetatsalze (z.B., Lysin, Arginin, Histidin) und das freie N-terminale Amin. daher, Trifluoracetat ist typischerweise das Standardgegenion.
Die Mindestanzahl der an ein Peptid gebundenen TFA-Moleküle ist proportional zur Anzahl der basischen Reste in einer bestimmten Peptidsequenz. Daher, die basischeren Reste, die in einem Peptid vorhanden sind, desto geringer ist der Nettopeptidgehalt des lyophilisierten Pulvers. Zur Berücksichtigung des in der Probe vorhandenen TFA- oder Wassergehalts, Wir empfehlen, für jedes benutzerdefinierte Peptid einen Peptidgehaltstest durchzuführen.
Wasser und Trifluoressigsäure (TFA) sind Nebenprodukte des Reinigungsprozesses. Jedoch, TFA kann Bedenken hinsichtlich der Toxizität aufwerfen lebendig und präklinische Studien. daher, MOL Changes bietet ungiftiges Acetat, Chlorid, oder Ammoniumsalzaustauscher.
Hy sind Peptide, die Cys enthalten, Getroffen, oder Trp schwer zu synthetisieren?
Peptide, die Cys enthalten, Getroffen, oder Trp sind schwierig zu synthetisieren und hochreine Produkte zu erhalten. Dies ist hauptsächlich auf die Instabilität und Oxidationsanfälligkeit dieser funktionellen Gruppen zurückzuführen. Bei der Verwendung und Lagerung dieser Peptide ist besondere Vorsicht geboten, um ein wiederholtes Öffnen der Fläschchen zu vermeiden.
Haben wir Ihre Frage übersehen?? Schreiben Sie uns eine Nachricht und wir werden es tun
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