Azịza ngwa ngwa
Mgbe ụlọ nyocha na-arịọ maka ego maka njikọ peptide, Atụmatụ ụzọ abụọ nwere ike ịpụta na-akọwa otu ịzụrụ. Otu na-enye mgbakọ ozugbo nke ndị niile…
Ntụle ọnụ ahịa Peptide Synthesis - SPPS na-aga n'ihu na nkebi ligation
Akpọrọ Peptide Peptide Fusion Mgbe ụlọ nyocha na-arịọ maka ego maka njikọ peptide, Atụmatụ ụzọ abụọ nwere ike ịpụta na-akọwa otu ịzụrụ. Otu na-enye mgbakọ kpọmkwem nke agbụ dum. Onye ọzọ na-atụ aro ime iberibe ma jikọta ha. Ntụnyere bara uru ga-eso ụzọ abụọ ahụ gaa n'otu njirimara, ngwaahịa eji eme ihe.
Ọnụ nzaghachi naanị enweghị ike ịhọrọ ụzọ dị ọnụ ala karịa. Mgbakọ kpọmkwem nwere ike izere usoro nhazi nkebibi mana ọ ga-esi ike ka yinye ahụ na-eto. Iberibe ligation nwere ike ime ka ndị etiti dị mkpụmkpụ dị mfe ijikwa ma na-agbakwunye nkwadebe, isonye, ime ka ọ dị ọcha, na ọrụ nyocha. Ọnụ ego ndị ikwu na-adabere na usoro na mgbake site na usoro zuru ezu.
Ntuziaka a tụlere ụzọ abụọ maka ebumnuche nyocha echiche. Ọnụ ahịa niile ka ga-ehota. Ntụnyere bụ mmemme atụmatụ, ọ bụghị ọnụ ahịa atụmatụ, a soplaya ogo, ma ọ bụ nkwupụta na ụzọ ọ bụla egosipụtara maka ihe atụ.
Usoro ebumnuche bụ H-AGLQKSEAVGATQALGEKASVAGAQVKCLAEGAQLAGEVAKSAGTAVKQALGSEA-OH, ya na 55 residues na nhazi L na chiral ọ bụla fọdụrụnụ. Ser42 bụ phosphorylate; serine ndị ọzọ agbanwebeghị. Cys28 bụ naanị cysteine ma ga-anọgide na-abụ thiol efu na ngwaahịa ikpeazụ. Ma ọdụ azụ azụ bụ n'efu.
Kedu ihe nhota abụọ ahụ ga-agụnye?
Maka ntụnyere nkuzi, arịrịọ 50 mg n'otu aka ahụ akọwapụtara nke ọma-peptide ndabere. Tụọ ma ọ dịkarịa ala 95% ịdị ọcha mpaghara n'okpuru usoro dabara adaba, nwere ihe akaebe na-ekwu banyere ọnọdụ phosphate na steeti cysteine. Ndị a bụ usoro mkparịta ụka echiche, ọ bụghị eluigwe na ala àgwà ụkpụrụ. Usoro ikpeazụ kwesịrị ịgbaso nyocha n'ezie.
Jiri otu nkọwa mgbochi ikpeazụ ahụ, usoro ihe atụ, ozi nchekwa, na analytical deliverables. Ọ bụrụ na achọrọ mgbanwe acetate, kọwapụta nrịba ama nhụta mpụta-counterion na-eso ya tupu atụlee nhota okwu. Aha nnu a chọrọ adịghị egosi na e wepụrụ ihe mgbochi ọzọ kpamkpam.
Debe onyinye abụọ a n'otu ebumnuche-ego ndabere. Nnukwu ntụ ntụ enweghị ike dochie ego ekenyere achọrọ ebe a. Kpebie nkọwapụta na ụdị ikpeazụ tupu ịgbakọ ọnụ ahịa kwa milligram anabatara.
chọkwara otu ụdị ihe akaebe njirimara. Uka na-emebibeghị nke dabara na otu phosphate anaghị ewepụta nke megharịrị n'ime ọtụtụ serine.. N'otu aka ahụ, ihe nwere yinye tụrụ anya nwere ike ịdị iche na steeti cysteine oxidation ma ọ bụ nwee ụdị intermolecular. Ngwungwu nyocha kwesịrị ekwesị kwesịrị ileba anya n'àgwà ndị dị mkpa na ebumnuche a.
Mee ebumnuche molekul, ụdị ikpeazụ, ihe nleba anya na ngụkọ n'ụkọ doro anya na atụmatụ abụọ a. Nkọwa ikike izugbe anaghị ewepụta nhota maka usoro a. Rịọ onye nwe ụzọ ọ bụla ka ọ chọpụta mwepu kama ịkọwapụta njedebe na-adịkarị site na isiokwu ọnụahịa yiri ya.
Kedu ka SPPS na-aga n'ihu na ligation iberibe si dị iche?
Na nhọrọ ozugbo, Ndị SPPS na-achịkọta yinye fọdụrụ 55 niile site na iji usoro nchekwa na ntọhapụ dabara na acid ikpeazụ na ngbanwe akọwapụtara.. Atụmatụ ahụ ga-agụnye nkwụsịtụ, nchebe, ime ka ọ dị ọcha, mgbake, na njirimara. Nkwupụta gbasara oge mgbakọ agbụ agbụ bụ naanị otu akụkụ nke anapụta.
Nke Ndekọ MIT nke njikọ kemịkalụ protein ngwa ngwa Onye nrụpụta Peptide akpọrọ na-enye ọnọdụ maka mgbakọ kpọmkwem nke agbụ ogologo ahọpụtara. Ọ naghị ewepụta mgbake phosphopeptide a, profaịlụ adịghị ọcha, ekwe omume ma ọ bụ price.
Na nhọrọ iberibe, Nkewa nke ndoro-ndoro ochichi bu n'etiti Lys27 na Cys28. Kemịkalụ kemịkalụ oge gboo ga-achọ ihe fọdụrụ 1-27 dị ka thioester C-terminal dabara adaba na ihe fọdụrụ 28–55 nwere N-terminal cysteine dị.. Iberibe nke abụọ nwere phosphoserine a kapịrị ọnụ. Carboxyl ọdụ ya ga-adabarịrị na ebumnuche ikpeazụ-acid efu.
Maapụ ọnọdụ iberibe mpaghara tupu atụnyere oke. Nkewa a tụrụ aro na-eme akụkụ mbụ fọdụrụ 27 na-agwụ na Lys27 yana akụkụ nke abụọ fọdụrụ 28 malite na Cys28.. Ya mere ebumnuche ikpeazụ na-ejigide 27 + 28 = 55 foduru; isonye anaghị ụma tinye ihe fọdụrụnụ. Acetyl Hexapeptide-1 N'ogbe
phosphoserine nke a rịọrọ bụ agbụ ikpeazụ Ser42, nke na-aghọ ọnọdụ 15 nke akụkụ nke abụọ: 42 - 27 = 15. Ngụ maka akụkụ akpọrọ naanị "phosphoserine 15" chọrọ etiti ntụaka ahụ. Agbụ ikpeazụ nwekwara Ser6, Ser20 na Ser53, ya mere ichekwa nkọwa n'agbụ zuru oke na-egbochi ndeksi mpaghara ka ọ bụrụ arịrịọ mgbanwe dị iche.
Debe usoro nhazi abụọ ahụ na nkọwapụta etiti. Mgbakọ ziri ezi anaghị akọwapụta phosphate n'ezie, mana ọ na-egbochi atụmatụ ụzọ n'onwe ya ka ọ ghara ịkwagharị saịtị ahụ n'ime nzuzo tupu emee ihe ọ bụla.
Nke ọmụmụ ihe ọmụmụ kemikal mbụ na-akọwa peptide thioester na-emeghachi omume na cysteine N-terminal iji mepụta njikọ amide nke ala.. Njikọ a tụrụ aro na-esote echiche nhazi ahụ; ndakọrịta na ihe ịga nke ọma nkwadebe nke ndị a kpọmkwem intermediates na-anọgide oru ngo ajụjụ.
| Ụzọ | Uru | Oke | Ọnọdụ na-akwado echiche | Achọrọ nkwenye |
|---|---|---|---|---|
| Direct SPPS nke 55-mer | Otu isi yinye-mgbakọ ụzọ; na-ezere nsonye dị iche iche na ngwa ahịa etiti | Mmeghachi omume ezughị oke ma ọ bụ omume yinye siri ike nwere ike ibelata ebumnuche mgbake | A na-akwado usoro agbụ zuru oke dakọtara yana nchacha ikpeazụ na-arụ ọrụ | njirimara nke agbụ zuru oke, ọrụ mgbanwe, nyocha adịghị ọcha, ma nabata mgbake |
| Iberibe SPPS na-esote kemịkalụ ala ala | Enwere ike inyocha akụkụ dị mkpụmkpụ iche iche; nwa afọ Cys28 na-enye nkwụsị nke onye ntinye akwụkwọ | Na-achọ nkwadebe thioester, mgbake akụkụ abụọ, ligation, na n'ihu agwụcha | Ịnweta iberibe na omume ngwọta dị mma nke ukwuu iji mebie ọrụ agbakwunyere | Njirimara ngalaba, njikọ ziri ezi na ọnọdụ phosphate, steeti thiol, na mgbake ikpeazụ nabatara |
Atụmatụ bara uru na-achọpụta ihe akaebe dị n'azụ nhọrọ ụzọ ya. Ọ bụrụ na onye na-eweta ngwaahịa nwere ahụmịhe na usoro nwere njikọ chiri anya, jụọ ajụjụ ndị dabara na nke dị iche. Ọ bụrụ na ụzọ ọ bụla enweghị nkwado dabara adaba, Enwere ike ịkwụ ụgwọ nke ọma n'usoro ihe omume akọwapụtara iche. Atụgharịla nkewa nwere ezi uche ka ọ bụrụ atụmatụ nrụpụta ejirila n'aka.
Ọnụ ego maka akụkụ nke mbụ dị ka peptide carboxyl-terminal efu abụghị ọnụ ahịa akpaaka maka thioester chọrọ. Glp Peptides ụzọ oge gboo NCL tụrụ aro. Nkwadebe na-emeghachi omume-ọnụ, njirimara ya na njikwa ya na-akwado bụ akụkụ nke oke ntinye.
N'otu aka ahụ, Akụkụ nke abụọ ga-ewetarịrị cysteine N-terminal achọrọ maka usoro njikọ akwadoro. Asambodo mkpirisi mkpirisi nwere ike ọ gaghị aza ajụjụ ahụ na-emeghachi omume. Rịọ onye nwe ụzọ ahụ ka ọ mata ụdị etiti dị n'ezie yana ebe ha tozuru oke.
Ihe ndị a a chọrọ apụtaghị na otu ụzọ nkwadebe ga-arụ ọrụ ma ọ bụ na nke ọ bụla n'ime iberibe adịghị akwụsi ike. Ha na-achọpụta ihe kpatara ọnụ ahịa iberibe abụọ yiri nke ahụ nwere ike ịkọwa ịzụrụ dị iche iche. Ụgwọ njikọ dị ala enweghị ike ịkwụ ụgwọ maka ntinye na-etinyeghị na nhota a.
Etinyekwala ọnụọgụ milligram nke etiti wee kpọọ nchikota ego ebumnuche ikpeazụ. Akụkụ ndị ahụ bụ ụmụ irighiri ihe dị iche iche nwere nkọwa njedebe nke ha, na ụdị mmeghachi omume na-agụnye kemịkalụ nke na-adịghị echekwa ya dị ka otu mgbakwunye na agbụ ikpeazụ. Onye nwe ụzọ kwesịrị ikwupụta ka ndị etiti wetara si akwado ngwaahịa anabatara, kama ịdabere na mkpokọta ịdị arọ etiti mara mma.
Ebe ego ego pụtara ìhè ga-apụ n'anya?
Maka mgbakọ kpọmkwem, ụgwọ njikọ mara mma nwere ike wepu nchacha ọcha, ike iche, ma ọ bụ mgbalị nke abụọ achọrọ iji nweta ego a kapịrị ọnụ. Maka iberibe ligation, Ọnụ ahịa maka iberibe abụọ ahụ nwere ike ịhapụ nkwadebe reactive-terminal, nyocha nke etiti, isonye, na ikpeazụ ọcha. Rịọ maka oke zuru oke tupu atụlee mkpokọta.
Tinye ihe oriri n'oge ọ bụla. Iberibe nke emepụtara dị ka ngafe ga-aba uru naanị ma ọ bụrụ na njirimara ya, steeti mmeghachi omume, na nkwụsi ike na-akwado ọrụ ọzọ. Ntugharị ligation tụrụ na ngwọta abụghị otu na ọnụọgụ peptide ikpeazụ emechara nke a na-ebuga n'ụlọ nyocha..
Ụzọ abụọ a nwere ike ịmepụta nsogbu adịghị ọcha dị iche iche. Ngwakọta ozugbo nwere ike ịnwe ngwaahịa metụtara usoro nke siri ike ikewa. Njikọta nwere ike ịhapụ akụkụ na-emeghị eme ma ọ bụ ngwaahịa ndị ọzọ metụtara njikọ na njikwa. Profaịlụ adịghị ọcha adịghị adị mfe ozugbo, na pasent HPLC ikpeazụ nkịtị nwere ike zoo ntụpọ nyocha dị iche iche. Polypeptide protein
Soro etiti nke ọ bụla ruo na nkọwa nke mkpụrụ ndụ ikpeazụ. Njikọ amide nke ala bụ ihe njikọ chọrọ, na ikpeazụ free-thiol chọrọ na-anọgide a iche iche àgwà. Agụla mmechi mmeghachi omume nbata dị ka ihe akaebe nke steeti cysteine ikpeazụ ma ọ bụ adịghị ọcha chọrọ.
Ma ọ bụ ekwesighi dochie pasentị ịdị ọcha nke etiti maka nsonaazụ ngwaahịa ikpeazụ. Ijikọ na imecha mepụta ihe nyocha dị iche. 55-mer ewepụtara chọrọ ihe akaebe dabara na nkọwapụta nke ya, ebe ihe ndekọ etiti na-akọwa ụzọ eji enweta ya.
Ntụle dabara adaba kacha baa uru na-ekwu ihe a ga-eme mgbe obere mkpokọta nke ọ bụla ekwuru. Ọ bụrụ na mgbakọ na-aga n'ihu na-agụnye nchacha ikpeazụ ka mpempe akwụkwọ na-akwụsị na akụkụ ndị dịpụrụ adịpụ, tulee ọrụ efu tupu ikwuwapụta ụzọ dị ọnụ ala. Ọ bụrụ na ụzọ ligation ka bụ ọmụmụ ihe ga-ekwe omume, chebe ọnọdụ ahụ. Ajụjụ a bụ ọnụ ahịa na ejighị n'aka nke iru ebe njedebe anabatara, Ọ bụghị nchikota kacha nta nke ebubo mmeghachi omume akọwara ezughị ezu.
Mgbanwe mgbanwe na mmanya na-egbu egbu nwekwara ike ịgbanwe mgbake. Ọ bụrụ na amụma abụọ ahụ kwere nkwa otu ụdị ikpeazụ, Ha abụọ kwesịrị ịgụnye ọrụ ndị ahụ na nha metụtara. Ọ bụrụ na otu atụmatụ na-enye nnukwu ihe na-achọ ọrụ ọzọ site na ụlọ nyocha na-anata, tinye ọrụ ahụ na ntụnyere.
Kọwaa ụzọ ejighị n'aka nke a ga-edozi tupu nkwa mbufe enweghị isi. Atụmatụ ekwe omume na ntinye ngwaahịa ikpeazụ nwere ike ịba uru, mana ọnụ ahịa ha na-ezo aka na ọrụ dị iche iche. Debe oghere ndị ahụ kama ekenye ohere ọdịda echepụtara echepụta.
RFQ dakọtara na akwụkwọ ọrụ ọnụ ahịa
Zipu ebumnuche nkọwapụta zuru oke wee rịọ atụmatụ abụọ maka otu ebe njedebe. Rịọ atụmatụ ọ bụla ka o kwuo ihe ndị a, iji "gụnyere,"" ewepụrụ,” ma ọ bụ ego e hotara iche karịa ịhapụ oghere na-enweghị isi.
| Ọnụ ma ọ bụ ihe oke | Atụmatụ SPPS Direct | Atụmatụ iberibe-ligation |
|---|---|---|
| Ntụle ike ma ọ bụ mmepe usoro | A ga-ehota na scoped | A ga-ehota na scoped |
| Mgbakọ na mmeghachi omume-nkwadebe nke etiti | Mgbakọ niile agbụ na ntọhapụ | Iberibe abụọ ahụ, nkwadebe thioester, na nsonye obosara |
| Ịdị ọcha, ụdị ikpeazụ, na iche | A ga-ehota ya site na ngwaahịa ikpeazụ | A ga-ehota ya site na ngwaahịa ikpeazụ |
| Ekwekọrịtara njirimara na ihe akaebe adịghị ọcha | Usoro na ihe ndị a ga-ewepụta | Ihe akaebe njedebe ahụ, ya na ọrụ etiti ọzọ achọpụtara |
| Ego ebumnuche-peptide anabatara | 50 mg na nkwekọrịta nha ndabere | 50 mg na otu ndabere |
| Aliquots, akwụkwọ, mbupu, yana ụgwọ ọdabara | A ga-ehota ya | A ga-ehota ya |
| Usoro ọrụ ugboro ugboro na atụmatụ nhazi oge | A ga-ekwu | A ga-ekwu |
Mezue RFQ site na iji ụlọ nyocha ebumnuche, ụbọchị mbata chọrọ, mbupu ebe, kwuo ego na nkwado, njirisi nnabata ikpeazụ, na nhazi nzuzo ọ bụla. Ezipụta ma etiti na-ejighị ya ma ọ bụ ihe nyocha bụ akụkụ nke nnyefe achọrọ. Ọ nweghị onye na-eweta ngwaahịa akpọtụrụla maka ntụnyere ihe atụ a.
Ozugbo nzaghachi rutere, tulee ngụkọta ọnụ ahịa a ga-akwụ maka ihe a na-ebuga dakọtara. Gbakọọ ọnụ ahịa otu milligram anabatara naanị ka edozichara ndịiche dị na ọrụ ọdịnaya, ewepụrụ ọrụ, na ihe eji anwale. Ọ bụrụ na ihe akaebe ka na-akwado ma ụzọ ọ bụla, họrọ nnwale nleba anya na-esote nke na-edozi ejighị n'aka nke kacha pụta kama ịhọrọ obere mkpokọta ezughị oke kacha ala..
FAQ: atụnyere ụzọ njikọ peptide site na ọnụ ahịa
Bụ iberibe ligation mgbe niile dị ọnụ ala maka ogologo peptide? Mba. Akụkụ dị mkpụmkpụ nwere ike inye aka, mana ijikọ na njikwa etiti na-agbakwunye ọrụ. Ntụziaka dabere na usoro zuru oke yana nnabata ikpeazụ.
Ọ na-enwe mgbakọ akpaghị aka ngwa ngwa na-ekwe nkwa oge nnyefe dị mkpirikpi? Mba. Ịdị ọcha, nyocha, nkwadebe-ụdị nkwadebe, na mbupu na-anọgide na akụkụ nke oru ngo. Rịọ maka nhazi oge site na nnyefe anabatara.
Ụzọ nwere ike ịgbanwe usoro iji melite mkpụrụ? Naanị site na mgbanwe ebumnuche akwadoro nke ọma. N'ebe a nkwekọrịta ezubere na-eji Cys28 dị adị na-agbakwunyeghị ihe fọdụrụ. Mkpado na-adịgide adịgide, njikwa fọdụrụnụ ma ọ bụ njikọ gbanwere ga-agbanwe ebe njedebe na a ga-enyocharịrị ya.
Ihe na-eme ka okwu abụọ bụrụ ihe atụnyere n'ezie? Otu nkọwa nke molekul, ndabere nke ukwu, njedebe nyocha, ụdị ikpeazụ, oke nnyefe, na ọgwụgwọ nke nkọwapụtaghị edozi. Kpebie usoro ndị ahụ tupu ị kpebie ọnụahịa nke na-anọchite uru ka mma maka nnwale ahụ.
