Брз одговор
Одземањето на изолираниот принос од приносот на суровата не го мери формирањето на спореден производ. Една вредност може да опише прашок што содржи сол, друга доделена цел, and a…
Принос на нуспроизвод во синтезата на пептиди - Поставете ја границата на рамнотежата на материјалот
Купувајте пептиди Кралскиот пептид Одземањето на изолираниот принос од приносот на суровата не го мери формирањето на спореден производ. Една вредност може да опише прашок што содржи сол, друга доделена цел, и трето одговорот на детекторот во избраните хроматографски врвови. Првата задача е да се идентификува молекуларната количина и границата на процесот зад секој број. Само тогаш аритметиката може да каже каде е пронајдена целта, каде останува, а што не е измерено.
Корисната рамнотежа разликува четири исходи: цел во прифатениот производ, цел во други измерени текови, идентификувани производи на трансформација и нерешен остаток. Овие категории водат до различни развојни одлуки. Повратната цел во одбиената фракција е прашање за одвојување; идентификувана варијанта на низа може да биде хемиско прашање; необјаснив остаток е првично прашање за мерење и сметководство.
Работените броеви подолу се хипотетички наставни вредности, не експериментални резултати или типични перформанси на индустријата. Тие се намерно едноставни за да може да се проверат разликите. Реалните задачи треба да вклучуваат ограничувања на методот и несигурност.
Споредете три сметководствени пристапи на иста граница на процесот
За правична споредба, дефинирајте го почетниот материјал или фаза, целната структура, релевантниот износ основа, и точката во која се собира материјалот. Не го споредувајте суровиот прашок на една рута со прочистената цел на друг пат и толкувајте ја разликата само како хемија.
| Предност | Ограничување | Применливи услови | Метод на верификација |
|---|---|---|---|
| Бруто повратената маса е едноставна и корисна за ракување со записите. | Тоа не е цел принос кога водата, соли, нечистотии, или резидуалните компоненти придонесуваат. | Споредување на физичките збирки само кога нивната состојба на примерокот и основата се јасно наведени. | Потврдете го мерењето, корекции на контејнери, состојба на примерок, и информации за составот. |
| Доделената целна сума поддржува изолирани пресметки за принос и целна наплата. | Тоа зависи од соодветен квантитативен метод и јасна дефиниција на доделените видови. | Споредување на истата цел во дефинираните влезни и излезни фази. | Прегледајте ја калибрацијата, подготовка на примерок, идентитет, квантитативна основа, и неизвесност. |
| Салдото од тек по поток идентификува каде се евидентира материјалот. | Неизмерените потоци и недоделените видови оставаат празнини; јазот не е именуван спореден производ. | Истражување на дефинирана операција со документирани влезови, излези, и земање мостри. | Доследно мерете ги релевантните текови и избегнувајте двојно броење задржани примероци или здружени фракции. |
Чистотата на хроматографската област е уште еден корисен дескриптор, но тоа не е четврта мерка на заменлив принос. Го известува релативниот одговор на детекторот вклучен во одредена интеграција според одреден метод. Различни компоненти може да имаат различни одговори, и некои материјали може да не бидат откриени или интегрирани.
Референтна студија за ангиотензин II на Мелансон и неговите колеги комбинира квантитативни пристапи за дефинирана задача за чистота. Тоа илустрира зошто треба да се специфицира основата на износот. Релативен хроматографски процент не може едноставно да се замени за доделената целна масена фракција бидејќи и двата се изразуваат како проценти.
Работете преку хипотетичка сурова и изолирана пресметка на приносот
Претпоставете експлицитно дефинирана теоретска целна количина на 1.000 mmol и просечна моларна маса од 1,000 g/mol за наведениот неутрален пептид. Соодветните Сè за пептидите теоретска целна маса е 1,000 mg. Овој именител е наставна претпоставка; вистинската синтеза мора да ја оправда нејзината почетна количина и стехиометриска основа.
Хипотетичката сурова колекција тежи 1,200 mg. Соодветна квантитативна задача го утврдува тоа 35.0% од таа што се снабдува маса е наведениот целен пептид. Пептидни лекови Затоа, суровата колекција содржи 1,200 × 0.350 = 420 mg цел, или 0.420 mmol. Нејзиниот целен принос во однос на наведената теоретска сума е 42.0%.
Повикувајќи го 1,200 mg собирање сурова „120% принос на пептид“ би го сокрило неговиот состав. Соодносот на бруто маса надминува 100% бидејќи колекцијата не се претпоставува дека е чиста цел. Не покажува создавање на дополнителен пептид или не го идентификува нецелниот материјал.
По прочистувањето, тежи хипотетичкиот изолиран прав 250 mg и има доделен цел масен дел од 80.0% на иста основа како испорачаната. Затоа содржи 200 mg цел, или 0.200 mmol. Изолираниот целен принос е 20.0%, додека обновувањето на целта преку ова прочистување е 200/420 × 100 = приближно 47.6%.
| Наставна количина | Пресметка | Значење |
|---|---|---|
| Сооднос на бруто сурова маса | 1,200/1,000 × 100 = 120% | Физичко собирање во однос на теоретската целна маса, не целниот принос |
| Суров целен принос | 420/1,000 × 100 = 42.0% | Доделена цел во наплатата на суровата нафта во однос на дефинираната теоретска сума |
| Изолиран целен принос | 200/1,000 × 100 = 20.0% | Доделена цел во финалниот изолиран материјал во однос на истата теоретска количина |
| Обновување на целта за прочистување | 200/420 × 100 ≈ 47.6% | Дел од влезната цел е обновена во прифатената финална колекција |
Доколку изолираниот примерок има и 98% чистота на хроматографската област, не се множат автоматски 200 mg од 0.98. Во овој пример, на 80.0% доделувањето веќе ја означува наведената целна фракција. Примената на друга корекција на чистотата без разбирање на дефинициите двојно ќе ја коригира количината. Задачата „вкупна содржина на пептид“ може да бара поинакво толкување.
Истражете ја нецелосната рамнотежа без да измислите нуспроизвод
Продолжете со хипотетичкиот пример за прочистување. На 420 mg влезна цел, 200 mg се доделува на финалната колекција, 160 mg до отфрлените фракции, и 25 mg до снимените миења. Тоа сметки за 385 mg од оригиналната цел, оставајќи номинален 35 mg јазот пред да се земе предвид несигурноста на мерењето.
Јазот не е автоматски деградација. Тоа може да вклучува немерени трансфери, задржани примероци, адсорпција, нецелосно закрепнување од опремата, аналитичка пристрасност, или хемиска промена. Истрагата треба да ги следи реалните текови на процесот и ограничувањата на мерењето. Хроматограмот не може да го означи исчезнатиот 35 mg без дополнителни докази.
Ставете ја неизвесноста покрај очигледната сума што недостасува
Проширете го примерот со хипотетички стандардни несигурности: 20 mg за назначувањето на влезната цел и 15 mg за комбинираните измерени резултати. Ако овие две проценки се независни, стандардната несигурност на нивната разлика е √(20² + 15²) = 25 mg. Номиналниот 35 мг јазот е затоа само 1.4 пати повеќе од стандардната несигурност. Оваа пресметка не идентификува механизам за загуба или, без дополнителни претпоставки, воспостави ниво на доверба.
На JCGM Водич за изразување на несигурност во мерењето, делови 5.1-5.2 разликува независни и корелирани влезови. Заедничките фактори за калибрација или подготовка може да направат проценките на влезот и излезот во корелација, така што едноставното пресметување на корен-збирот на квадрати може да биде несоодветно. Опишете го вистинскиот модел на мерење наместо да доделувате погодни ± вредности само за да се направи рамнотежата да изгледа затворена. Поли пептид
Подобрувањето на најмалку информативното мерење може да биде покорисно отколку веднаш да барате производ за деградација. Повторно проценете ја репрезентативноста на примерокот, доделување суми и текови што недостасуваат. Ако по тие проверки остане сигурен остаток, тоа набљудување може да оправда фокусирано хемиско истражување. Сè уште не го дава идентитетот на исчезнатиот вид.
Квантифицирањето на одреден нуспроизвод бара неговиот идентитет и соодветен одговор или доделување износ. За посебна хипотетичка пресметка, да претпоставиме дефиниран нуспроизвод со моларна маса 550 g/mol независно се доделува количина на 55 mg. Тоа е 0.100 mmol. Во однос на наведеното 1.000 mmol почетна основа, неговиот моларен принос би бил 10.0%, под услов стехиометриската врска да го оправда тој именител. Нас Пептидните компании
Ова е различно од тоа да се каже дека а 10% Врвот на областа на детекторот претставува a 10% моларен принос. Исто така, се разликува од третирањето на секоја несобрана целна молекула како нуспроизвод. Наведете дали салдото ја следи целната сума, одреден елемент, еквиваленти на синџири, или вкупна маса; хемиските трансформации можат да ги направат тие салда незаменливи.
Изберете зачувана сметководствена единица
Да претпоставиме, во друг хипотетички модел, 0.100 mmol од родителскиот пептид се подложува на едно расцепување на 'рбетот и произведува 0.100 mmol од секој од двата фрагменти. Додавањето на количини на фрагменти дава 0.200 mmol молекули на производот, туку само 0.100 mmol од матичните молекули беше претворена. Известување а 20% родителската конверзија од сумираните молови на фрагментот би била погрешна кога би била почетната родителска сума 1.000 mmol. Стехиометриската врска, не бројот на врвови на производи, го снабдува именителот.
Границите на потокот создаваат посебна замка. Замислете 50 mg на доделената цел во фракција: 10 mg се повлекува во архива и 40 mg продолжува во базен. Броење на првобитната дропка, архивата и базенот како три паралелни излези би пријавиле 100 mg од истите 50 mg. Користете средни мерења за да ги објасните трансферите, но сметајте ги само непреклопните излези на границата што се балансира.
Инсуасти Цепеда и колегите, градиентна студија за екстракција во цврста фаза е пример за прочистување со дефинирани цели и методи. За нова низа, прашајте кои фракции ја задржуваат наменетата молекула и кои се прифатени. Почисто избран базен и поголема наплатена целна сума се различни резултати; оценете ги и двете наместо увезување објавена бројка за наплата.
Прочитајте ги полињата за сертификат како посебни приговори
| Поле за сертификат или запис | Прашање за поставување | Она што не може да го утврди сам |
|---|---|---|
| Чистота на областа на HPLC | Кој детектор, метод, интеграција, а исклучените сигнали го дефинираат процентот? | Апсолутна целна количина или сите непептидни компоненти |
| Содржина или анализа на пептиди | Дали ова значи вкупен пептиден материјал или наведената цел, и врз која основа на примерок? | Втор фактор на корекција без разбирање на задачата |
| Резултат на идентитетот | Кои структурни карактеристики и алтернативи ги опфаќа методот? | Секоја низа, позиционен, или стереохемиска разлика само од недопрена маса |
| Информации за вода и контрајон | Дали овие беа измерени за оваа многу, и како ја внесуваат пресметката на износот? | Универзална корекција копирана од друга серија |
| Принос или закрепнување | Кои се броителите, именител, граница на процесот, и единици? | Споредливост со необјаснет процент од друга рута |
Замрзнете ги сметководствените дефиниции пред да ги споредите експериментите. Задржете ја основата на количината, повлекување примероци, дропка односи и модел на несигурност покрај пресметката. Ако се промени границата на здружување или доделувањето износ, изрично да се ревидира билансот. Понизок необјаснет остаток произведен од поширока граница не мора да значи дека хемијата се подобрила.
Следниот корисен чекор е да се препише постоечка изјава за принос како реченица: „Оваа количина од овој наведен вид ја повративме од овој дефиниран влез во оваа фаза, користејќи го ова мерење“. Ако некој дел недостасува, решете го пред да ги споредите маршрутите или да им припишете загуба на нуспроизводи.
Најчесто поставувани прашања
Дали приносот на сурова нафта може да надмине 100%? Соодносот на бруто маса може да надмине 100% кога збирката вклучува и друг материјал. Тоа не значи дека наведената цел е произведена над нејзината оправдана теоретска количина.
Изолираниот принос е ист како и обновувањето на прочистувањето? бр. Изолираниот принос најчесто се однесува на дефинирана почетна или теоретска количина, додека обновувањето на прочистувањето го споредува влегувањето и напуштањето на целта од одредена сепарација.
Дали површината на пикот на нечистотијата го мери приносот на нуспроизвод? Не автоматски. Специфична количина на соединение бара соодветен идентитет и квантитативни докази. Процентите на одговор на детекторот не се универзални моларни или масивни фракции.
Дали рамнотежата што се затвора во рамките на неизвесноста докажува дека не се формирани нуспроизводи? бр. Различни видови може да останат нерешени, а избраното салдо може да ја следи само доделената цел. Затворањето го оценува наведениот сметководствен модел; хемиските идентитети бараат соодветни мерења.
