Perguntas frequentes
Simplesmente complexo de miligramas a quilogramas
Solicitação de orçamento personalizado
How to store peptides?
Peptídeos Liofilizados
Para armazenamento a longo prazo de peptídeos, recomendamos armazená-los como um pó sólido. Os peptídeos liofilizados podem ser armazenados a -20°C ou menos com degradação mínima. Os clientes são aconselhados a inspecionar novamente os peptídeos personalizados a cada 2 anos a partir da data da liberação do controle de qualidade.
Peptídeos em solução
Os peptídeos em solução são menos estáveis e propensos à degradação. As soluções aquosas utilizadas para dissolver peptídeos devem ser estéreis e puras.
Em solução, uma certa quantidade de peptídeo pode ser degradada, dependendo dos aminoácidos presentes na sequência. Alguns exemplos estão listados abaixo:
– Peptídeos contendo metionina, resíduos de cisteína ou triptofano devem ter tempo de armazenamento limitado em solução devido à oxidação. Esses peptídeos devem ser dissolvidos em um solvente livre de oxigênio. –
Glutamina e asparagina podem ser desamidadas em ácido glutâmico e ácido aspártico, respectivamente. –
A cisteína pode sofrer ciclização oxidativa para formar uma ligação dissulfeto cisteína-cisteína (que pode ser formado dentro ou entre ligações dissulfeto). –
Os resíduos cobrados (ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina) são higroscópicos (absorvendo água do ar) e tendem a formar uma camada viscosa, óleo claro. Esta mudança física pode não afetar a natureza do peptídeo. Recomenda-se que tais peptídeos sejam liofilizados para remover vestígios de água, em seguida, desgaseificado com nitrogênio para garantir que não haja vapor de água no frasco, e então rapidamente tampado.
Para evitar danos causados por congelamento e descongelamento repetidos, recomendamos que os usuários dissolvam apenas a quantidade de peptídeo necessária para o experimento atual. O excesso de solução deve ser armazenado a ≥ -20 o C até ser necessário.
Evite umidade.
Como a umidade reduz significativamente a estabilidade a longo prazo dos peptídeos, recomendamos equilibrar os peptídeos em um dessecador à temperatura ambiente antes de abrir os frascos. Após a conclusão da distribuição do peptídeo, os peptídeos restantes no tubo devem ser suavemente purgados com nitrogênio anidro, então o recipiente deve ser tampado, selado com uma película de vedação, e armazenado a -20°C.
As características de solubilidade de diferentes peptídeos variam consideravelmente. Resíduos como alanina (Alá), cisteína (Cis), isoleucina (Com), leucina (Leu), metionina (Conheci), fenilalanina (Phe), e valina (Val) adicionar à hidrofobicidade e solubilidade do peptídeo em soluções aquosas, e é recomendado que o cliente siga estas orientações ao personalizar peptídeos.
Propriedades de solubilidade
A solubilidade dos peptídeos é altamente dependente da sequência de aminoácidos. Peptídeos naturalmente hidrofóbicos (UM, F, G, V, eu, EU, M, C, P com maior propensão) requerem solventes orgânicos para solubilização. Peptídeos ácidos (maior propensão para D, E na sequência peptídica) requerem tampões aquosos básicos para solubilização, enquanto peptídeos básicos (maior propensão para K, H, e R) requerem tampões aquosos ácidos para solubilização.
Seleção de solvente
Dadas as limitações do seu ensaio, recomendamos usar as seguintes diretrizes para determinar o melhor solvente para solubilizar peptídeos
Peptídeos Hidrofóbicos
Para re-solubilizar peptídeos hidrofóbicos, adicionar 100 μL de DMSO e sonicar até que uma solução homogênea seja formada. Próximo, adicione o buffer de sua escolha para fazer um 1 solução mg/mL (quanto maior a concentração de peptídeo, maior a quantidade de DMSO necessária).
Hidrofílico (Ácido) Peptídeos
Para resolubilizar peptídeos ácidos, adicionar 100 μL de 1% NH 4 AH para 1 mg de peptídeo e vórtice. Assim que a solução estiver clara, adicione o buffer de sua escolha para fazer um 1 solução mg/mL.
Hidrofílico (Básico) Peptídeos
Para reconstituir um peptídeo básico, adicione água destilada 1 mg de peptídeo e vórtice.
Qual é a diferença entre o peso líquido e o peso bruto do peptídeo?
O padrão da indústria é fornecer peptídeos na forma liofilizada como peso bruto. Peso bruto do peptídeo é o peso total de todos os componentes presentes no pó liofilizado. Isso inclui o peptídeo de interesse, quaisquer impurezas peptídicas, água, solventes residuais, e contra-íon.
Pelo contrário Líquido peso do peptídeo, calculado a partir do Conteúdo líquido de peptídeos, é o peso de apenas o peptídeo componente presente no pó liofilizado. Isso oferece concentrações mais precisas de suas soluções peptídicas subsequentes. Por isso, recomendamos quantidades de peso líquido de peptídeo para Peptídeo Personalizado pedidos.
Conteúdo líquido de peptídeos a medição é realizada por análise de aminoácidos (AAA; precisão limitada, mas requer uma pequena quantidade de material) ou análise elementar (CHN; requer miligramas de peptídeo, mas é mais preciso). Ambos os métodos produzem um valor percentual (ou seja., 75% conteúdo líquido de peptídeos).
O conteúdo líquido de peptídeos depende da quantidade de contra-íon presente*, que depende da sequência peptídica. Essencialmente, quanto maior a carga do peptídeo, quanto menor o conteúdo de peptídeo
*Observação: O elemento usado para calcular o conteúdo líquido de peptídeos é baseado no contra-íon peptídico. Isto é feito para garantir que o contra-íon não contribua para a quantidade de conteúdo peptídico. Por exemplo, quando TFA ou acetato são o contra-íon, o nitrogênio é usado porque é encontrado no peptídeo, mas não no TFA ou no acetato. Carbono ou Nitrogênio podem ser usados quando o cloreto é o contra-íon pelo mesmo motivo.
Cálculos do peso líquido do peptídeo:
Quantidade líquida de peptídeos (peptídeo total) — método que usamos para pedidos líquidos de peptídeos personalizados.
Multiplique a porcentagem líquida de conteúdo de peptídeos (forma decimal) pelo Peso Bruto do Peptídeo, para obter a quantidade de Quantidade Líquida de Peptídeo (peptídeo total).
Por exemplo:
Para 5 mg de peptídeo bruto/frasco:
O conteúdo líquido de peptídeos é 84%.
Quantidade exata de peptídeo total = 0.84*5 mg = 4,2 mg de peptídeo total
Quantidade líquida de peptídeo de interesse - mais precisa — o cliente pode usar este método por conta própria para calcular o peptídeo de interesse.
Multiplique a porcentagem líquida do conteúdo peptídico pelo peso bruto do peptídeo, e a pureza do peptídeo (por HPLC), para calcular a quantidade exata do peptídeo de interesse que você possui. A porcentagem líquida de peptídeo (forma decimal) é multiplicado pela pureza do peptídeo (forma decimal).
Por exemplo:
Para 5 mg de peptídeo bruto/frasco com:
O conteúdo líquido de peptídeos é 84%.
A quantidade exata de peptídeo de interesse é = 0.84*0.96*5 mg = 4,03 mg
MOL Changes utiliza química Fmoc de fase sólida em vez de química BOC. A química do Fmoc permite a remoção de grupos protetores usando condições suaves durante o alongamento do peptídeo, enquanto a química do BOC requer o uso de um ácido forte para remover os grupos protetores durante o alongamento do peptídeo. Adicionalmente, A química Fmoc utiliza ácido trifluoroacético (TFA) para remover o peptídeo da resina, enquanto a química do BOC utiliza ácido fluorídrico (AF). HF é incolor, altamente corrosivo, e um veneno de contato.
Portanto, MOL Changes emprega química Fmoc, pois é mais suave, flexível, e versátil em comparação com a química BOC.
Como calculo a molaridade do meu peptídeo?
Molaridade refere-se à concentração molar de uma solução, que é o número de moles de soluto dissolvido em 1 litro de solução, expresso em mol/L, ou M.
Molaridade [M] = Massa / (Volume x Massa Molar); Mol = Concentração (g/L) xVolume (eu)/PM (g/mol)
Exemplo:
Dado: 1mg de peptídeo em pó seco com PM: 20KDa (A massa molar do peptídeo é 20 g/mol)
Para determinar a molaridade com massa e volume conhecidos
Para uma solução de 1ml deste peptídeo:
Molaridade = Massa (0.001g) / (volume (0.001eu) x Massa molar (PM 20,000) = 50 µM
Para determinar a massa para atingir uma certa molaridade:
Se para o seu ensaio, você precisa de solução de peptídeo de trabalho 0,01 mM em 1 ml de água, então calcule a massa necessária da seguinte forma:
Massa = Molaridade x Volume x Massa Molar
Massa = 0,01 mM x (1/1000 eu) x 20.000g/mol = 0,0002g
Por isso, você precisará de 0,2mg/ml de peptídeo para ter uma solução de trabalho de 0,01mM.
De que forma os peptídeos são entregues?
Entregamos como pó liofilizado ou cru e solução de peptídeo.
Como posso saber se meu peptídeo será solúvel?
A solubilidade de um peptídeo em um determinado solvente depende da sequência de aminoácidos e muitas vezes é difícil de prever.. No caso de peptídeos de catálogo, as informações de solubilidade estão listadas na folha de dados de CQ. Para peptídeos personalizados, consulte a seção intitulada “Como devo solubilizar meu peptídeo”.
Qual é a diferença entre o conteúdo do peptídeo e a pureza do peptídeo?
O conteúdo do peptídeo não é uma indicação da pureza do peptídeo, pois estas são duas medições separadas. A pureza é determinada por HPLC analítica e indica a presença/ausência de outros contaminantes peptídicos (ou seja. peptídeos truncados).
O conteúdo líquido de peptídeo determina a quantidade real do peptídeo (peptídeo de interesse, bem como os contaminantes peptídicos) presente na amostra. O conteúdo líquido de peptídeos é tradicionalmente medido por análise de aminoácidos (AAA; precisão limitada, mas requer uma pequena quantidade de material) ou análise elementar (CHN; requer miligramas de peptídeo, mas é mais preciso).
Como você geralmente purifica seus peptídeos?
Os peptídeos MOL Changes são geralmente purificados por HPLC preparativa de fase reversa, usando 2 buffers contendo 0.1% ácido trifluoroacético (TFA). O primeiro buffer (Tampão A) é composto por 0.1 % TFA em água desionizada e o segundo tampão (Tampão B) é composto por 0.1 % TFA em acetonitrila (ACN).
Geralmente, peptídeos brutos são primeiro dissolvidos em uma solução de Tampão A, alguma quantidade de tampão B, ou um solvente polar orgânico tal como DMSO. Se um solvente polar orgânico ou tampão B foi usado, esta solução límpida será primeiro diluída com tampão A. Próximo, a solução peptídica é filtrada e carregada no sistema HPLC preparativo. Utilizando um gradiente de método otimizado, as frações são então coletadas com base nas leituras de absorbância. Cada fração é então analisada através de um HPLC analítico para garantir que a pureza de cada fração atenda às especificações de pureza exigidas.
Essas frações “puras” são então reunidas e liofilizadas. O pó “puro” é então testado quanto à pureza e identidade para garantir que o peptídeo correto foi fabricado.
Finalmente, um grupo independente de controle de qualidade da AnaSpec testa novamente o peptídeo para garantir que todos os atributos de teste atendam às especificações exigidas.
Como escrevo meus terminais de sequência peptídica?
A nomenclatura internacional usada para os terminais da sequência é a seguinte:
– Terminal N: H significa amina livre (NH2-), Ac significa acetil [CH3C(Ó)-NH-], Pyr significa ácido piroglutâmico
– Terminal C: OH significa ácido livre (-COOH), NH2 significa amida [-CONH2]
– As modificações na cadeia lateral dos aminoácidos são representadas entre parênteses após o aminoácido correspondente. Por exemplo; serina fosforilada = S(PO3H2) ou lisina épsilon-N-acetilada = K(Ac)
O que é um contra-íon peptídico?
Durante a produção de peptídeos, íons nas soluções de síntese e purificação ligam-se às cadeias laterais de aminoácidos carregadas do peptídeo, formando sais. Esses íons são conhecidos como contra-íons peptídicos e ajudam a equilibrar a carga do peptídeo.
Ácido trifluoroacético (TFA) é comumente usado na síntese e purificação de peptídeos.
Forma sais de trifluoroacetato com aminoácidos básicos (por exemplo, lisina, arginina, histidina) e a amina N-terminal livre. Portanto, trifluoroacetato é normalmente o contra-íon padrão.
O número mínimo de moléculas de TFA ligadas a um peptídeo é proporcional ao número de resíduos básicos em uma determinada sequência peptídica. Por isso, os resíduos mais básicos presentes em um peptídeo, quanto menor o teor líquido de peptídeos do pó liofilizado. Para contabilizar o TFA ou o teor de água presente na amostra, recomendamos realizar um ensaio de conteúdo de peptídeo para cada peptídeo personalizado.
Água e ácido trifluoroacético (TFA) são subprodutos do processo de purificação. No entanto, O TFA pode levantar preocupações de toxicidade para vivo e estudos pré-clínicos. Portanto, MOL Changes oferece acetato atóxico, cloreto, ou trocadores de sal de amônio.
são peptídeos contendo Cys, Conheci, ou Trp difícil de sintetizar?
Peptídeos contendo Cys, Conheci, ou Trp são um desafio para sintetizar e obter produtos de alta pureza. Isto se deve principalmente à instabilidade e suscetibilidade à oxidação desses grupos funcionais. É necessária atenção especial ao uso e armazenamento desses peptídeos para evitar aberturas repetidas dos frascos.
Perdemos sua pergunta? Deixe-nos uma mensagem e nós iremos
volte para dentro 24 horas.
