Peptide Synthesis Cost Comparison - SPPS e tobileng khahlanong le Fragment Ligation
E bitsoa Peptide Peptide Fusion Ha laboratori e botsa litšenyehelo tsa peptide synthesis, Litlhahiso tse peli tsa litsela li ka 'na tsa bonahala li hlalosa theko e tšoanang. E 'ngoe e fana ka kopano e tobileng ea ketane eohle. E mong o etsa tlhahiso ea ho etsa likhechana le ho li kopanya. Papiso e nang le moelelo e tlameha ho latela litsela tseo ka bobeli ho ea ho litšoantšiso tse tšoanang, sehlahiswa se ka sebediswang.
Re ka se khone ho khetha tsela e theko e tlaase. Kopano e tobileng e ka qoba mekhahlelo ea ho sebetsana le likaroloana empa ea e-ba thata ha ketane e ntse e hōla. Fragment ligation e ka etsa hore li-intermediate tse khutšoane li be bonolo ho li laola ha u ntse u eketsa boitokiso, ho kopanya, tlhoekiso, le mosebetsi oa ho hlahloba. Litšenyehelo tse lekanyelitsoeng li itšetlehile ka tatellano le ho hlaphoheloa ka mokhoa o feletseng.
Tataiso ena e bapisa litsela tse peli bakeng sa sepheo sa lipatlisiso tse inahaneloang. Litheko tsohle li ntse li tla qotsoa. Papiso ke boikoetliso ba moralo, eseng khakanyo ea litšenyehelo, boemo ba mofani oa thepa, kapa tseko ea hore tsela efe kapa efe e bontšitsoe mohlala.
Tatelano ea sepheo ke H-AGLQKSEAVGATQALGEKASVAGAQVKCLAEGAQLAGEVAKSAGTAVKQALGSEA-OH, ka 55 mesaletsa le tlhophiso ea L sebakeng se seng le se seng sa masala a chiral. Ser42 e na le phosphorylated; li-serine tse ling ha lia fetoloa. Cys28 ke eona feela cysteine mme e tlameha ho lula e le thiol e sa lefelloeng sehlahisoa sa ho qetela. Ka bobeli li-termini tsa mokokotlo li lokolohile.
Litsopo ka bobeli li tlameha ho kenyelletsa eng?
Bakeng sa papiso ea ho ruta, kopo 50 mg ka mokhoa o ts'oanang o hlalosoang ka mokhoa o hlakileng oa sepheo-peptide motheong. Sisinya bonyane 95% bohloeki ba sebaka tlas'a mokhoa o lumellanoeng o loketseng, ka bopaki bo buang ka sebaka sa phosphate le boemo ba cysteine. Tsena ke liparamente tsa lipuisano tse inahaneloang, eseng litekanyetso tsa boleng bo akaretsang. Litekanyetso tsa ho qetela li lokela ho latela tlhahlobo ea 'nete.
Sebelisa mokhoa o tšoanang oa ho qetela oa counterion, mohlala oa sebopeho, tlhahisoleseding ea polokelo, le lisebelisoa tsa tlhahlobo. Haeba phapanyetsano ea acetate e hlokahala, hlalosa methati e tsamaisanang le mesaletsa ea li-counterion le tekanyo pele u bapisa mantsoe a qotsitsoeng. Lebitso la letsoai le lakatsehang ha le bontše hore na counterion e 'ngoe e tlositsoe ka ho feletseng hakae.
Boloka litlhahiso ka bobeli ka tekanyo e lekanang ea chelete. Palo ea gross powder e ke ke ea nkela chelete eo e kopiloeng ka khutso. Rarolla tlhaloso le boholo ba foromo ea ho qetela pele o bala litšenyehelo ka milligram e amohelehang.
Hape hloka sebaka se tšoanang sa bopaki ba boitsebiso. Boima bo sa fetoheng bo tsamaellanang le phosphate e le 'ngoe ha bo bontše hore na ke efe ho tse 'maloa e fetotsoeng. Ka ho tšoanang, thepa e nang le ketane e lebelletsoeng e ka fapana ka boemo ba cysteine oxidation kapa e na le mefuta ea li-intermolecular. Sephutheloana se nepahetseng sa tlhahlobo se lokela ho sebetsana le litšoaneleho tse bohlokoa ho sepheo sena.
Etsa sepheo sa molek'hule, foromo ea ho qetela, bopaki ba tlhahlobo le bongata ba motheo bo hlakileng ho litlhahiso ka bobeli. Litlhaloso tse akaretsang tsa bokhoni ha li thehe khotheishene bakeng sa tatelano ena. Kopa mong'a e mong le e mong oa tsela ho qolla mekhelo ho e-na le ho fana ka maikutlo a tšoanang ho tsoa lihloohong tse tšoanang tsa litheko.
SPPS e tobileng le li-fragment ligation li fapana joang?
Ka khetho e tobileng, ketane eohle ea masala a 55 e bokelloa ke SPPS e sebelisa leano la ts'ireletso le tokollo le lumellanang le asiti ea ho qetela ea mahala le phetoho e boletsoeng.. Tlhahiso e tlameha ho kenyelletsa cleavage, tshireletso, tlhoekiso, ho hlaphoheloa, le sebopeho. Polelo e mabapi le nako ea kopano ea ketane ke karolo e le 'ngoe feela ea tse ka fanoang.
The Rekoto ea MIT ea tlhahiso ea lik'hemik'hale tse potlakileng tsa protheine E ngotsoe ke Moetsi oa Peptide e fana ka moelelo oa kopano e tobileng ea liketane tse telele tse khethiloeng. Ha e thehe ho hlaphoheloa ha phosphopeptide ena, boemo bo sa hloekang, ho khoneha kapa theko.
Ho khetho ea sekhechana, karohano ea mokhethoa e pakeng tsa Lys27 le Cys28. Classical native native ligation ligation e tla hloka masala a 1-27 e le C-terminal thioester e loketseng le masalla 28-55 a nang le N-terminal cysteine e fumanehang.. Sekhechana sa bobeli se na le phosphoserine e boletsoeng. Terminal carboxyl ea eona e tlameha ho lula e lumellana le sepheo sa ho qetela sa acid e sa lefelloeng.
'Mapa libaka tsa likhechana tsa lehae pele u bapisa scope. Karohano e reriloeng e etsa karolo ea pele ea masala a 27 e fellang Lys27 le karolo ea bobeli ea masala a 28 e qalang ho Cys28.. Ka hona, sepheo sa ho qetela se ntse se le teng 27 + 28 = 55 masalla; ho kopanya ha ho kenye masalla a mang ka boomo. Acetyl Hexapeptide-1 Wholesale
Phosphoserine e kopiloeng ke ketane ea ho qetela Ser42, e fetohang boemo 15 ea karolo ea bobeli: 42 − 27 = 15. Mantsoe a qotsitsoeng bakeng sa karolo e ngotsoeng feela "phosphoserine 15" e hloka foreimi eo ea litšupiso. Ketane ea ho qetela e boetse e na le Ser6, Ser20 le Ser53, kahoo ho boloka tlhaloso e felletseng ho thibela index ea lehae ho fetoha kopo e fapaneng ea phetoho.
Boloka litsamaiso tse hokahaneng ka bobeli li le maemong a mahareng. Lipalo tse nepahetseng ha li behe phosphate ea sebele sebakeng sa heno, empa e thibela moralo oa tsela ka boeona hore o se ke oa tsamaisa sebaka ka khutso pele ho etsoa thepa efe kapa efe.
The thuto ea mantlha ea tlhaho ea tlhaho ea lik'hemik'hale e hlalosa peptide thioester e sebetsanang le N-terminal cysteine ho theha maqhama a matsoalloa a amide. Mokopanyi o sisintsweng o latela mohopolo oo wa sebopeho; ho tsamaellana le boitokisetso bo atlehileng ba li-intermediates tsena tse nepahetseng li ntse li le lipotso tsa morero.
| Tsela | Melemo | Mefokolo | Maemo a ratang ho nahaneloa | Netefatso ea hlokahala |
|---|---|---|---|---|
| SPPS e tobileng ea 55-mer | Tsela e le 'ngoe e kholo ea ketane-kopano; e qoba ho kopanya likaroloana tse arohaneng le li-inventory tsa mahareng | Boitšoaro bo sa phethahalang bo bokelletsoeng kapa boits'oaro bo thata ba ketane bo ka fokotsa sepheo se ka khutlisoang | Ts'ebetso e lumellanang ea ketane e felletseng le tlhoekiso ea ho qetela e sebetsang e tšehetsoa | Boitsebahatso ba ketane e felletseng, kabelo ya ho fetola, tekanyetso ya ditshila, le ho amohela ho hlaphoheloa |
| Likhechana tsa SPPS tse lateloang ke li-chemical ligation tsa tlhaho | Likarolo tse khutšoane li ka hlahlojoa ka thoko; Cys28 ea matsoalloa e fana ka mateano a mokhethoa | E hloka tokiso ea thioester, ho hlaphoheloa ha likarolo tse peli, ligation, le ho qetela ho qetela | Phihlello ea likaroloana le boits'oaro ba tharollo li loketse ho lekana ts'ebetso e eketsehileng | Boitsebahatso ba karolo, sebaka se nepahetseng sa mateano le sebaka sa phosphate, thiol state, 'me qetellong a amoheleha ho hlaphoheloa |
Tlhahiso e sebetsang e supa bopaki ba khetho ea eona ea tsela. Haeba mofani oa thepa a e-na le phihlelo ka tatellano e amanang haufi-ufi, botsa hore na ke likarolo life tse lumellanang le tse fapaneng. Haeba ha ho na tsela e nang le ts'ehetso e nepahetseng, mokhahlelo o hlalosoang oa ho khonahala o ka lefisoa ka thoko. Se ke oa fetola karohano e utloahalang ho ba moralo o tiisitsoeng oa tlhahiso.
Theko ea karolo ea pele e le peptide e tloaelehileng ea mahala ea carboxyl-terminal ha se eona feela theko ea thioester e hlokoang ke Li-peptide tsa Glp tsela ea khale ea NCL e reriloeng. Reactive-terminal lokisetsa, sebopeho sa eona le ts'ebetso ea eona e tšehetsoeng ke karolo ea sebaka sa ho kenya letsoho.
Ka ho tšoanang, karolo ea bobeli e tlameha ho hlahisa N-terminal cysteine e hlokahalang bakeng sa mohato o reriloeng oa ho kopanya. Setifikeiti sa generic fragment se kanna sa se arabe potso eo ea reactive-state. Kopa mong'a tsela hore a khetholle liforomo tsa 'nete tsa mahareng le moo li tšoanelehang.
Litlhoko tsena ha li bolele hore tsela e itseng ea ho itokisetsa e tla sebetsa kapa hore sekhechana se seng ha sea tsitsa. Ba supa hore na ke hobaneng ha litheko tse peli tsa sekhechana tse tšoanang li ka hlalosa theko e fapaneng. Tefiso e tlase ea ho kopanya e ke ke ea lefella lintho tse kentsoeng tse sa kenyelletsoeng khotheishene.
Se ke oa eketsa limiligrama tse mahareng 'me u bitsa kakaretso palo eo u e batlang. Likarolo ke limolek'hule tse arohaneng tse nang le litlhaloso tsa tsona tsa ho qetela, 'me foromo e sebetsang e kenyelletsa k'hemistri e sa bolokehang feela e le sehlopha se eketsehileng ka ketane ea ho qetela. Mong'a tsela o lokela ho bolela hore na li-intermediate tse fanoeng li tšehetsa sehlahisoa se amohetsoeng se tšepisitsoeng, ho e-na le ho itšetleha ka boima bo khahlehang ba mahareng.
Ke hokae moo chelete e bonahalang e bolokiloeng e ka nyamelang?
Bakeng sa kopano e tobileng, tefiso e ntle ea ho kopanya e ka kenyelletsa tlhoekiso e eketsehileng, ho itšehla thajana ho thata, kapa teko ea bobeli e hlokahalang ho fumana chelete e boletsoeng. Bakeng sa fragment ligation, litheko tsa likaroloana tse peli li ka 'na tsa siea boitokisetso ba reactive-terminal, ditshekatsheko tsa mahareng, ho kopanya, le tlhoekiso ea ho qetela. Kopa sebaka se felletseng pele u bapisa kakaretso.
Kenyelletsa tšebeliso ea thepa mohatong o mong le o mong. Sekhechana se hlahisoang ka mokhoa o hlakileng o fetelletseng se na le thuso ha feela se tsebahala, boemo ba ho sebetsa, le botsitso tšehetsa tshebetso e latelang. Phetoho ea ligation e lekantsoeng ka tharollo ha e tšoane le palo ea peptide ea ho qetela e hloekisitsoeng e tlisoang laboratoring..
Litsela tsena tse peli li ka hlahisa mathata a fapaneng a litšila. Tlhahiso e tobileng e ka 'na ea e-ba le lihlahisoa tse amanang le tatellano eo ho leng thata ho e arola. Ligation e ka siea likarolo tse sa sebetseng kapa lihlahisoa tse ling tse amanang le ho kopanya le ho sebetsana. Leha e le profil ea litšila ha e bonolo ka bo eona, mme peresente e tloaelehileng ea ho qetela ea HPLC e ka pata libaka tse sa boneng tsa tlhahlobo. Protheine ea Polypeptide
Latela karolo e 'ngoe le e 'ngoe ho ea ho tlhaloso ea ho qetela ea limolek'hule. Khokahano ea matsoalloa a amide ke tlhokahalo ea khokahano, 'me tlhokahalo ea ho qetela ea free-thiol e ntse e le tšobotsi e fapaneng. Se ke oa bala ho phethoa ha karabelo e kopaneng e le bopaki ba litlhoko tsohle tsa ho qetela tsa cysteine-state kapa litšila..
Leha e le hore peresente ea bohloeki ea mahareng e ka nkeloa sebaka bakeng sa sephetho sa sehlahisoa sa ho qetela. Ho kopanya le ho phethela ho bopa ntho e fapaneng ya tshekatsheko. 55-mer e fanoeng e hloka bopaki bo nepahetseng ho latela litlhaloso tsa eona, ha litlaleho tse bohareng li hlalosa tsela e sebelisoang ho e fumana.
Papiso e bapisang ka ho fetisisa e bolela hore na ho tla etsoa eng ka mor'a palo e 'ngoe le e 'ngoe e qotsitsoeng. Haeba kopano e tobileng e kenyelletsa tlhoekiso ea ho qetela ha nyehelo ea sekhechana e emisa likarolong tse ka thōko, bapisa mosebetsi o sieo pele u phatlalatsa tsela e theko e tlaase. Haeba tsela ea ligation e ntse e le boithuto bo ka khonehang, boloka boemo boo. Potso ke litšenyehelo le ho se kholisehe ha ho fihla pheletsong e tšoanang e amoheloang, ha se chelete e nyane haholo ea litefiso tse sa hlalosoang ka botlalo.
Counterion exchange le aliquoting e ka boela ea fetola ho hlaphoheloa. Haeba litlhahiso ka bobeli li tšepisa mofuta o tšoanang oa ho qetela, ka bobeli li lokela ho kenyelletsa ts'ebetso eo le tekanyo e amanang le eona. Haeba tlhahiso e le 'ngoe e fana ka lisebelisoa tse ngata tse hlokang mosebetsi o eketsehileng ke laboratori e amohelang, kenyeletsa mosebetsi oo papisong.
Hlalosa hore na ke litsela life tse lokelang ho rarolloa pele boitlamo ba ho fana bo ka ba le moelelo. Tlhahiso ea bokhoni le tlhahiso e ikemiselitseng ea sehlahisoa sa ho qetela li ka ba molemo, empa litheko tsa bona li bua ka litlamo tse fapaneng. Boloka li-scopes tseo li bonahala ho e-na le ho fana ka menyetla e iqapetsoeng ea ho hloleha.
RFQ e tsamaellanang le leqephe la mosebetsi la litšenyehelo
Romella sepheo se felletseng 'me u kope litlhahiso tse peli bakeng sa ntlha e tšoanang. Kopa tlhahiso ka 'ngoe ho bolela lintlha tse latelang, ho sebelisa “kenyellelitsoe,” “e qheletsoe ka thoko,” kapa chelete e qotsitsoeng ka thoko ho e-na le ho siea mantsoe a sa hlakang.
| Theko kapa boholo ba ntho | Tlhahiso e tobileng ea SPPS | Tlhahiso ea Fragment-ligation |
|---|---|---|
| Kelo ya kgonahalo kapa ntshetsopele ya mokgwa | Ho qotsoa le ho hlahlojwa | Ho qotsoa le ho hlahlojwa |
| Kopano le boitokiso bo sebetsang-bohareng | Kopano ea ketane eohle le boholo ba tokollo | Ka bobeli likhechana, boitokisetso ba thioester, le sebaka sa ho kopanya |
| Tlhoekiso, foromo ea ho qetela, le ho itšehla thajana | Ho qotsoa ka sehlahisoa sa ho qetela | Ho qotsoa ka sehlahisoa sa ho qetela |
| Bopaki bo lumellanang ba boitsebiso le ho se hloeke | Mekhoa le mekhoa e lokelang ho fanoa | Bopaki bo tšoanang ba ntlha, ka mosebetsi o eketsehileng oa mahareng o khethiloeng |
| Chelete e amohetsoeng ea target-peptide | 50 mg ka motheo oa tekanyo eo ho lumellanoeng ka eona | 50 mg motheong o tšoanang |
| Aliquots, litokomane, Ho tsamaisa ka sekepe, le litefiso tse sebetsang | Ho qotsoa | Ho qotsoa |
| Pheta-pheta-mosebetsi dipehelo le kemiso mehopolo | Ho boleloa | Ho boleloa |
Tlatsa RFQ ka tšebeliso e reriloeng ea laboratori, letsatsi le hlokahalang la ho fihla, sebaka sa dikepe, qotsa chelete le bonnete, litekanyetso tsa ho qetela tsa kamohelo, le tokisetso efe kapa efe ea lekunutu. Hlalosa hore na li-intermediate tse sa sebelisoeng kapa lisebelisoa tsa tlhahlobo ea tlhahlobo ke karolo ea thomello e kopiloeng. Ha ho morekisi ea kileng a ikopanya le eena bakeng sa papiso ena.
Hang ha likarabo li fihla, bapisa kakaretso ea litšenyehelo tse lefshoang bakeng sa thepa e tsamaellanang. Bala litšenyehelo ka milligram e amohelehang feela ka mor'a ho rarolla liphapang tsa likabelo tsa litaba, ditshebeletso tse kenyeleditsweng, le lisebelisoa tsa tlhahlobo tse bolokiloeng. Haeba bopaki bo ntse bo sa rate tsela, khetha teko e latelang ea ho khona ho rarolla mathata a mangata ho fapana le ho khetha palo e tlase e sa fellang..
LBH: ho bapisa litsela tsa peptide synthesis ka litšenyehelo
Na fragment ligation e lula e le theko e tlase bakeng sa peptide e telele? Che. Likarolo tse khutšoane li ka thusa, empa ho kopanya le ho tshwara ka hare ho eketsa mosebetsi. Ho leka-lekana ho itšetlehile ka tatellano e feletseng le ho amoheloa ho hlaphoheloa ha ho qetela.
Na kopano e iketsang e potlakileng e tiisa nako e khuts'oane ea ho fana? Che. Tlhoekiso, tlhatlhobo, boitokisetso ba ho qetela, 'me thomello e ntse e le karolo ea morero. Kopa kemiso ka thomello e amohelehang.
Na tsela e ka fetola tatellano ho ntlafatsa chai? Ke feela ka phetoho e lumelletsoeng ka mokhoa o hlakileng. Mona mateano a reretsoeng a sebelisa Cys28 e teng ntle le ho eketsa masala. Letlapa le sa feleng, Motsoako o setseng kapa khokahano e fetotsoeng e ka fetola ntlha ea ho qetela 'me e tlameha ho hlahlojoa joalo.
Ke eng e etsang hore mantsoe a qotsitsoeng a mabeli a tšoane hantle? Tlhaloso e tšoanang ea limolek'hule, palo motheo, pheletso ya tshekatsheko, foromo ea ho qetela, boholo ba phano, le kalafo ea litlhaloso tse sa rarolloang. Rarolla mantsoe ao pele u etsa qeto ea hore na ke theko efe e emelang boleng bo betere bakeng sa teko.
